辛伐他汀對糖尿病大鼠頸動脈的保護作用

禹曉寧 焦建寅 (南京師范大學校醫院，江蘇 南京 210042)

目前，糖尿病及其所并發的大血管病變發展迅速，其大血管病變以多支、多處、彌漫病變為主，主要累及主動脈、冠狀動脈、腦動脈、腎動脈和周圍血管等大血管，是影響2型糖尿病患者生活質量及致殘、致死的主要原因之一〔1，2〕。他汀類藥物是近年來發現的一種行之有效的調脂藥，具有顯著的降脂作用。本研究擬通過動物實驗擬探討辛伐他汀對糖尿病大鼠頸動脈的保護作用。

1 資料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物 選用近交、清潔型雄性Wistar大鼠30只，體質量230～260 g，購于南京醫科大學實驗中心，醫用動物合格證號：由南京市醫科大學提供，合格證號00A024。

1.1.2 儀器 利舒坦血糖儀，美國雅培公司提供;Wrellscan MK-3型酶標儀，全自動生化檢測儀(Beckm鋤CX7型)，Ⅳ型超薄切片機，瑞典LKB公司提供;BI-2000圖像分析系統，成都泰盟科技有限公司提供。

1.1.3 藥物與試劑 鏈脲佐菌素(STZ)：100 mg/支，購于Sig-ma公司;辛伐他汀片，規格：40 mg/片，購于默沙東制藥有限公司;0.1 mol枸櫞酸緩沖液：A液：枸櫞酸2.1 g溶于100 ml雙蒸水;B液：枸櫞酸三鈉2.94 g溶于100 ml雙蒸水。A液和B液按1∶1.32的比例混合，調節pH值至4.3;P-選擇素ELISA試劑盒，由美國RB生物工程公司提供;MMP-2 ELISA試劑盒，由上海業培生物科技有限公司提供;二步法山羊免疫組化檢測試劑PV-6003，由美國 BGI公司提供;兔抗鼠基質金屬蛋白酶(MMP)-2及羊抗兔IgG多克隆抗體，由武漢博士德生物工程有限公司生產;DAB顯色劑，由北京中杉生物工程公司提供。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與模型制備 取30只Wistar大鼠，隨機分為正常對照組、糖尿病組、糖尿病干預組，每組10只。禁食12 h后，糖尿病組、糖尿病干預組應用STZ 55 mg/kg溶于pH4.3、0.1 mmol/L的枸櫞酸緩沖液中一次性腹腔注射，正常對照組注射等體積的枸櫞酸緩沖液。72 h后以連續3次隨機血糖≥16.7 mmol/L為造模成功。各組于成模l w后給藥，糖尿病干預組給予辛伐他汀生理鹽水混懸液灌胃，10 mg·kg－1·d－1正常對照組、糖尿病組給予等體積生理鹽水灌胃。共喂養12 w，每周測體重1次，每2 w測血糖1次。所有大鼠分籠飼養，溫度18℃ ～22℃，相對濕度為40% ～70%，未使用胰島素及其他降血糖藥物。

1.2.2 標本采集 于造模成功后4、8、12 w時各組分別取8只雄性Wistar大鼠稱重、剪尾測空腹血糖后，以25%烏拉坦腹腔注射麻醉，0.004 ml/g;固定后逐層分離右側頸動脈結扎兩端，迅速打開胸腔心內采血6 ml分別置于含有枸櫞酸鈉抗凝劑的試管和普通試管中各3 ml，離心(2 500 r/min)15 min，用所分離的血清測定空腹胰島素、血脂、P-選擇素、MMP-2的含量。切取部分右側頸動脈組織固定、包埋，制備病理切片用于HE及免疫組化染色。

1.3 統計學分析 所有數據應用SPSS17.0統計軟件處理，計量資料結果以s表示，采用完全隨機分組析因設計的方差分析，相關性研究采用Pearson相關分析。

2 結果

2.1 不同時間段空腹血糖和胰島素水平比較 糖尿病組、糖尿病干預組大鼠空腹血糖顯著增高，與正常對照組相比有統計學差異(P＜0.05);糖尿病組與糖尿病干預組間相比無統計學意義(P＞0.05)。糖尿病組、糖尿病干預組空腹胰島素明顯降低，與正常對照組相比有統計學差異(P＜0.05)，糖尿病組與糖尿病干預組間相比無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

2.2 不同時間段的血脂水平變化 糖尿病組、糖尿病干預組血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)水平升高較正常對照組顯著(P＜0.05)，且糖尿病干預組高于糖尿病組(P＜0.05)。高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)逐漸降低，三組間無明顯差異(P＜0.05)。見表1。

2.3 各階段血清P-選擇素、MMP-2的表達變化 表2可見，與正常對照組比較，P-選擇素、MMP-2糖尿病組、糖尿病干預組升高明顯(P＜0.05)，糖尿病組增加更顯著(P＜0.05)。

表1 三組不同時段血脂、血糖、胰島素水平變化比較( s ，n=8)

表1 三組不同時段血脂、血糖、胰島素水平變化比較( s ，n=8)

TCTGLDL-CHDL-C組別 血糖(mmol/L)血胰島素(μIU/ml)(mmol/L)(mmol/L)(mmol/L)(mmol/L).005 0.654±0.007 0.385±0.017 8 w 5.18±0.55 16.85±3.24 2.039±0.018 1.164±0.011 0.672±0.008 0.394±0.019 12 w 4.75±0.47 15.32±2.06 2.036±0.023 1.159±0.015 0.670±0.012 0.387±0.012糖尿病組 4 w 21.48±3.551) 2.48±0.621) 2.235±0.0201) 1.471±0.0081) 0.784±0.0071) 0.355±0.0131)8 w 18.18±2.751) 2.85±0.561) 2.381±0.0241) 1.750±0.0151) 0.938±0.0191) 0.355±0.0171)12 w 17.74±2.211) 2.25±0.451) 2.531±0.0271) 2.200±0.0081) 0.742±0.0231) 0.359±0.0121)糖尿病干預組 4 w 19.81±3.751)2) 2.88±0.641)2) 2.131±0.0271)2) 1.150±0.0051)2) 0.654±0.0071)2) 0.385±0.0171)2)8 w 19.14±3.271)2) 2.33±0.481)2) 2.225±0.0101)2) 1.674±0.0101)2) 0.842±0.0121)2) 0.364±0.0141)2)12 w 21.29±3.361)2) 2.58±0.561)2) 2.136±0.0231)2) 1.430±0.0581)2) 0.701±0.0121)2) 0.324±0.0151)2)正常對照組 4 w 4.31±0.57 15.78±2.65 2.031±0.027 1.150±0

表2 三組不同時段P-選擇素、MMP-2比較(s，n=8，ng/ml)

表2 三組不同時段P-選擇素、MMP-2比較(s，n=8，ng/ml)

4 w 6.351±0.027 5.718±0.002 8 w 6.708±0.055 5.854±0.024 12 w 7.075±0.047 6.372±0.016糖尿病組 4 w 12.480±0.0551) 11.248±0.0621)8 w 13.618±0.0251) 13.085±0.0561)12 w 16.274±0.0211) 15.525±0.0451)糖尿病干預組4 w 9.281±0.0251)2) 8.688±0.0241)2)8 w 10.124±0.0271)2) 10.331±0.0481)2)12 w 11.029±0.0361)2) 11.138±0.0561)2)MMP-2正常對照組組別 P-選擇素

2.4 不同時期頸動脈內中膜厚度(IMT)變化 與正常對照組相比，糖尿病組、糖尿病干預組IMT增長(P＜0.05)，且糖尿病組增加較糖尿病干預組顯著(P＜0.05)。見表3。

表3 三組不同時段IMT比較(s，n=8，mm)

表3 三組不同時段IMT比較(s，n=8，mm)

5.151±0.014 5.160±0.024 5.165±0.017糖尿病組 6.755±0.0251) 9.965±0.0281) 21.052±0.1051)糖尿病干預組6.356±0.0171)2) 7.310±0.018 5.510±0.0201)2)4 w 8 w 12 w正常對照組組別

3 討論

辛伐他汀為HMG-CoA抑制劑，是目前臨床上最為廣泛應用的他汀類降脂藥物之一。辛伐他汀可通過抑制P-選擇素的表達發揮調脂外抗炎、抗動脈粥樣硬化、保護大血管的可能機制為〔3～8〕：①通過抑制膽固醇酯合成，代償性促進LDL受體合成，加速LDL-C降解，從而有效降低血脂，減少了高脂對內皮的損傷刺激以及P-選擇素的高表達;②通過抑制OX-LDL誘導的ICAM-1的表達，降低P-選擇素水平，從而抑制單核-巨噬細胞黏附、浸潤血管壁及血栓形成，阻止了AS的發生、發展;③還可通過降低血管平滑肌細胞中血小板源性生長因子所誘導的DNA合成，阻止血管平滑肌細胞由G1期向S期轉變，抑制了血管甲滑肌增殖;④通過降低泡沫細胞內膽固醇酯含量，減輕泡沫化程度，延緩動脈粥樣硬化形成。

1 劉方武，劉俊華，李會芹.他汀類藥物非降脂作用的應用前景〔J〕.中國誤診學雜志，2005;5(3)：527.

2 陳婉莉，范金茹.P-選擇素在心腦血管疾病中的意義及中藥的干預作用〔J〕.中西醫結合心腦血管病雜志，2006;4(9)：799-801.

3 王 峰，汪年松，唐令詮，等.P選擇素在糖尿病腎病中的意義〔J〕.中華糖尿病雜志，2005;13(6)：452-3.

4 余國忠，趙明中.P-選擇素與血小板活化〔J〕.中國醫藥導刊，2006;8(9)：108-9.

5 孫 燕，胡 健，劉 永.冠狀動脈支架置入術后血漿P-選擇素水平的動態變化〔J〕.中國介入心臟病學雜志，2006;14(9)：226-7.

6 夏 威，嚴鐘德.P-選擇素與糖尿病血管病變〔J〕.國外醫學內分泌學分冊，2003;23(增刊)：14-5.

7 杜艷華，胡義奎，李 芳，等.阿托伐他汀對腦梗死患者血小板GMPl40、CD62p和CD63水平的影響〔J〕.國際腦血管病雜志，2007;15(9)：651-4.

8 尚 可.辛伐他汀對動脈粥樣硬化大鼠的干預作用及機制〔D〕.中國優秀碩士學位論文全文數據庫，2007.