南海紅樹林內生真菌ZH-7代謝產物研究

楊建香+邱聲祥+佘志剛+林永成+++

摘要：采用反復硅膠柱色譜法、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０凝膠色譜法等分離純化南海紅樹林內生真菌ＺＨ－７的代謝產物，并通過理化常數測定和光譜分析鑒定其化學結構。結果表明，從南海紅樹林內生真菌ＺＨ－７的培養液中分離得到６個代謝產物。經波譜解析，分別為：比卡菌素（１）、ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ Ⅱ（２）、環（苯丙－脯）二肽（３）、環（苯丙－苯丙）二肽（４）、環（苯丙－纈）二肽（５）、環（苯丙－亮）二肽（６）。初步藥理活性顯示化合物１對口腔癌細胞ＫＢ，ＫＢｖ２００的抗腫瘤活性的ＩＣ５０值分別為１０．０和１４．５ μｇ／ｍＬ。通過鑒定，所有化合物均首次從南海紅樹林內生真菌ＺＨ－７中分離得到。

關鍵詞：紅樹林；內生真菌；代謝產物

中圖分類號：Ｏ６２９文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０14）09－2061-03

Metabolites of Mangrove Endophytic Fungus ZH-7 from the South China Sea

ＹＡＮＧ Ｊｉａｎ－ｘｉａｎｇ１，２，ＱＩＵ Ｓｈｅｎｇ－ｘｉａｎｇ１，ＳＨＥ Ｚｈｉ－ｇａｎｇ３，ＬＩＮ Ｙｏｎｇ－ｃｈｅｎｇ３

（１． Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６５０，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｇｕｉｌｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， ５４１００１，Ｇｕｉｌｉｎ， Ｃｈｉｎａ；

３． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｕｎ Ｙａｔ－ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０２７５， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｐｈｙｓｉｃ－ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｔｒａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ Ｎｏ·ＺＨ－７ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｓｅａ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ６ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｎｄ ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ ａｓ Ｂｉｋａｖｅｒｉｎ （１）， ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ Ⅱ（２）， ｃｙｃｌｏ－（Ｐｈｅ－ｐｒｏ） （３）， ｃｙｃｌｏ－（Ｐｈｅ－ｐｈｅ）（４）， ｃｙｃｌｏ－（Ｐｈｅ－Ｖａｌ）（５）， ｃｙｃｌｏ－（Ｐｈｅ－ｌｅｕ）（６）． Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｂｉｏａｓｓａｙ， ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ １ ｓｈｏｗｅｄ ｓｔｒｏｎｇ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｎ ｔｈｅ ＫＢ，ＫＢｖ２００ ｗｉｔｈ ＩＣ５０ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ １０．０ ａｎｄ １４．５ μｇ／ｍＬ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ， ａｌｌ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｆｉｒｓｔｌｙ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ Ｎｏ·ＺＨ－７．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｎｇｒｏｖｅ； ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ； ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ

長期以來，國內外開發天然藥物的重點一直集中在陸生生物資源，現有的天然藥物大多數也都來自陸生生物。然而，在對陸生生物資源的長期研究開發過程中發現，從陸生生物次生代謝產物中發現新藥或先導化合物的難度越來越大，抗性問題也日益嚴重，新藥的開發面臨著嚴峻挑戰［１］。因此，自上世紀６０年代以來，人們開始將注意力投向尚未開發的巨大天然資源寶庫——海洋微生物。海洋微生物生活在低溫、缺氧、高壓、高鹽的特殊環境中，以其獨特的代謝方式，提供了在陸地生物中沒有的代謝產物。對海洋共生和附生微生物的研究是一個發現結構新穎、具有獨特生理活性的化合物的重要途徑。在目前許多深海遠海海洋真菌都需要相對苛刻的條件，人們把目光投向了第二大海洋真菌的天堂——陸地海洋過渡生態系統紅樹林，而根據Bugni等［2］和Sadaba等［3］的研究發現絕大多數海洋真菌都與紅樹林有著緊密的聯系。紅樹林內生真菌是一種新的天然產物資源，而且其化學成分也具有廣泛的藥理活性。如抗腫瘤及抗氧化活性［４，５］，抑制乙酰膽堿酯酶活性等［６－８］。

１材料與方法

１．１儀器和試劑

ＩＮＯＶＡ－５００ＮＢ型超導核磁共振譜儀和ＩＮＯＶＡ－３００ＮＢ型核磁共振儀（美國Ｖａｒｉａｎ公司），ＶＧ ＺＡＢ－ＨＳ型雙聚焦質譜儀，Ｔｈｅｒｍｏ ＤＳＱ型電子轟擊電離質譜儀，Ｔｈｅｒｍｏ ＭＡＴ９５ＸＰ型高分辨質譜儀，Ｘ－４型數字顯示顯微熔點測定儀（北京泰克儀器有限公司）。所用試劑均為廣州化學試劑廠生產，化學純，溶劑經重蒸后使用；柱層析硅膠為青島海洋化工廠生產的２００～３００目硅膠，硅膠Ｈ，薄層硅膠ＧＦ２５４。

１．２菌種培養

紅樹林內生真菌ＺＨ－７采自中國廣東省珠海市，經鑒定為擬莖點霉菌（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｐ．），保存于中山大學化學與化學工程學院。發酵培養基為葡萄糖１０ ｇ／Ｌ，蛋白胨２ ｇ／Ｌ，酵母膏１ ｇ／Ｌ，粗海鹽２ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０。５００ ｍＬ三角瓶內裝培養基２５０ ｍＬ，１．２５×１０５ Ｐａ 滅菌３０ ｍｉｎ后接種１２０ ｍＬ，在２５ ℃靜置培養３５ ｄ。分別收集發酵液和菌體。

１．３提取與分離

１２０ ｍＬ發酵物過濾得菌體和發酵液，發酵液濃縮后用乙酸乙酯充分萃取，菌體用甲醇多次浸泡。提取濃縮物分別以體積比１∶２拌硅膠（２００～３００目）進行柱層析，以石油醚／乙酸乙酯／甲醇進行梯度加壓洗脫。收集各組分再經反復柱層析，制備薄層層析，重結晶等進行純化。從培養液粗提物（約３０ ｇ）中分離得到比卡菌素（１）（１２ ｍｇ）、ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ Ⅱ（２）（１３ ｍｇ）、環（苯丙－脯）二肽（３）（１０ ｍｇ）、環（苯丙－苯丙）二肽（４）（８ ｍｇ）、環（苯丙－纈）二肽（５）（１０ ｍｇ）、環（苯丙－亮）二肽（６）（１０ ｍｇ）。

１．４細胞毒活性實驗

采用ＭＴＴ法［９］測定了化合物１對人體口腔癌ＫＢ，ＫＢｖ２００的抗腫瘤活性。

１．５化合物的試驗數據

化合物１：紅色粉末。ＥＩＭＳ：３８２（基峰），３６７，３３９，３２５，３１１，２８３，２６９，２４１，２１２，１８４，７７，６９；１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，３００ ＭＨｚ）δ：１３．２９（ｓ，ＯＨ），１２．７６（ｓ，ＯＨ），６．７９（ｄ，２．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，２．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），２．８７（ｓ，３Ｈ）。

化合物２：淡黃色蠟狀物。１ＨＮＭＲ（５００ ＭＨｚ， Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６）：７．６８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８），７．００（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８）， ６．７３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４），６．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．５３（ｓ，２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６）：１７２．４（Ｃ），１６９．８（Ｃ），１５９．７（Ｃ），１５８．０（Ｃ），１３９．８（Ｃ）， １３３．６（２ＣＨ），１３１．１（２ＣＨ），１２９．５（Ｃ），１２５．８（Ｃ），１２３．５（Ｃ），１１７．６（２ＣＨ），１１６．４（２ＣＨ），８７．１（Ｃ），５４．７（ＣＨ３），４０．１（ＣＨ２）。ＥＩＭＳ（ｍ／ｚ）：３５６［Ｍ＋］。

化合物３：白色固體，熔點：１２４～１２６ ℃。１ＨＮＭＲ（氘代吡啶，３００Ｈｚ）δ：７．２４（５Ｈ，ｍ），４．６２（１Ｈ，ｂｒｓ），４．１３（１Ｈ，ｔ），３．６０（１Ｈ，ｍ），３．３２（２Ｈ，ｍ），２．１４（１Ｈ，ｍ），２．１３（１Ｈ，ｍ），１．７８（２Ｈ，ｍ）。１３Ｃ ＮＭＲ（氘代吡啶，７５Ｈｚ）δ：１７０．３（Ｃ），１６５．１（Ｃ），１３６．０（ＣＨ），１２９．４（ＣＨ），１２９．１（ＣＨ），１２７．６（ＣＨ），５９．２（ＣＨ），５６．２（ＣＨ），４５．５（ＣＨ２），３６．９（ＣＨ２），２８．４（ＣＨ２），２２．５（ＣＨ２）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：２４５［Ｍ＋１］＋。

化合物４：白色針晶，熔點：１２０～１２６ ℃。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，３００ ＭＨｚ）δ：７．９０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．２８（ｄｄ，７．５，７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄｄ，７．５，７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｄｄ，１３．５，７．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄｄ，１３．５，６．０Ｈｚ，１Ｈ）；ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：２９５［Ｍ＋Ｈ］＋，２７９，１５６，１２０，８９，７７，５１。

化合物５：白色粉末，ＩＲ（ＫＢｒ）ｖｍａｘ：３ ２１０、３ ０３０、

１ ６６６、１ ６００、１ ４５０、７５６、７０２／ｃｍ；熔點：２８０～２８２ ℃。ＥＩＭＳ：２４６，２０４，１５５，１２７，９１（基峰）。１ＨＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：８．０７（１Ｈ，ｓ），７．８８（１Ｈ，ｓ），７．２２（５Ｈ，ｍ），４．２０（１Ｈ，ｍ），３．５２（１Ｈ，ｍ），３．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１３．５ Ｈｚ），２．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１３．４ Ｈｚ），１．６９（１Ｈ，ｍ），０．６５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ），０．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）；１３Ｃ ＮＭＲ（７５ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：１６６．５（Ｃ），５９．２（ＣＨ），３１．０（ＣＨ２），１８．２（ＣＨ），１６．２（ＣＨ３），１６６．４（Ｃ），５５．０（ＣＨ），３７．８（ＣＨ２），１３６．３（Ｃ），１３０．３（ＣＨ），１２７．９（ＣＨ），１２６．４（ＣＨ），１２７．９（ＣＨ），１３０．３（ＣＨ）。

化合物６：白色粉末，熔點：２６１～２６３ °Ｃ。１ＨＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ ＭＨｚ）δ：７．２５（５Ｈ，ｍ），４．３０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），３．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．２，１０．８ Ｈｚ），３．６（１Ｈ，ｍ），２．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．８，１３．６ Ｈｚ），１．４１（１Ｈ，ｍ），０．８４（２Ｈ，ｍ），０．７２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ），０．６７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ ＭＨｚ）δ：１７０．６（ＣＯ），１６９．０（ＣＯ），１３６．８（Ｃ），１３１．８（ＣＨ），１２９．７（ＣＨ），１２８．５（ＣＨ），５７．５（ＣＨ），５４．２（ＣＨ），４５．３（ＣＨ２），４０．３（ＣＨ２），２４．７（ＣＨ），２３．３（ＣＨ３），２１．５（ＣＨ３）。

２結果與分析

化合物１～６的結構圖如圖１所示。

化合物１：紅色粉末。１ＨＮＭＲ譜圖比較簡單，有兩個螯合羥基１２．７６ ｍｇ／Ｌ（ｓ，１Ｈ），１３．２９ ｍｇ／Ｌ（ｓ，１Ｈ），兩個間位耦合芳香質子６．９１ ｍｇ／Ｌ（ｄ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７９ ｍｇ／Ｌ（ｄ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）和一個孤立芳香質子６．３４ ｍｇ／Ｌ（ｓ，１Ｈ）以及3個甲基３．９ ｍｇ／Ｌ（ｓ，３Ｈ），３．９４ ｍｇ／Ｌ（ｓ，３Ｈ），２．８７ ｍｇ／Ｌ（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ顯示有２０個碳。ＥＩＭＳ顯示分子離子峰為３８２，結合１ＤＮＭＲ分析可推出該化合物的分子式為Ｃ２０Ｈ１４Ｏ８，參照文獻［１０］可發現同已知化合物比卡菌素的譜圖數據幾乎一致，ＥＩＭＳ碎片離子峰完全一致，因此推測該化合物為比卡菌素。

化合物２：淡黃色蠟狀物，ＥＩＭＳ顯示化合物分子離子峰為３５６，結合核磁數據，可得化合物的分子式為Ｃ１９Ｈ１６Ｏ７。１３Ｃ ＮＭＲ和ＤＥＰＴ顯示兩個對位取代的苯環，一個連氧叔碳，一個甲酸甲酯基，一個亞甲基，一個羧碳和一個雙鍵。參照文獻［１１］可確定化合物的結構為ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅⅡ。該化合物是個木酯素類化合物，曾多次作為天然產物在多種真菌中被分離得到過。

化合物３：ＬＣＭＳ顯示２４５［Ｍ＋１］＋，結合１Ｈ和１３ＣＮＭＲ，由此推定分子式為Ｃ１４Ｈ１６Ｎ２Ｏ２，不飽和度為８。１３Ｃ ＮＭＲ和ＤＥＰＴ顯示分子中含有１４個Ｃ，即４個ｓｐ３的－ＣＨ２，２個ｓｐ３的ＣＨ，５個ｓｐ２的ＣＨ，１個ｓｐ２的季Ｃ，２個－Ｃ＝Ｏ。氫譜δ４．６２（１Ｈ，ｂｒｓ）的一個活潑氫信號以及碳譜δ１７０．３和δ１６５．１處的兩個酰胺碳信號，初步確定化合物３可能為環二肽化合物。δ７．２４（５Ｈ，ｍ）有一個單取代苯環，分子中沒有甲基氫信號。一個苯環和一個環二肽的不飽和度為７，那么分子中另有一個環（不可能為一個雙鍵）。參照文獻［１２］可確定化合物３為環（苯丙－脯）二肽。

化合物４：白色針狀晶體，溶解性能很差，ＴＬＣ碘熏顯白點，拖尾。ＦＡＢＭＳ給出２９５［Ｍ＋Ｈ］＋，結合氫譜提示分子式為Ｃ１８Ｈ１８Ｎ２Ｏ２，不飽和度為１１。ＩＲ譜提示存在活潑氫信號［ν３ １９０（ｂｒｓ）／ｃｍ］和羰基信號（ν１ ６６２／ｃｍ）。氫譜共給出９個質子信號，說明化合物是對稱的。從氫譜［δ７．３１（ｔ，７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｔ，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，７．５Ｈｚ，２Ｈ）］看出化合物存在一個單取代苯環，δ４．０５（ｍ，１Ｈ）是連雜原子的飽和次甲基質子信號，δ２．２３（ｄｄ，１３．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ）和２．９２（ｄｄ，１３．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ）是芐亞甲基質子的特征，δ７．０４（ｂｒｓ，１Ｈ）是活潑ＮＨ信號，據此推出該化合物為環（苯丙－苯丙）二肽。進一步與文獻［１３］對比得到確證。

化合物５：白色粉末，ＩＲ（ＫＢｒ）ｖｍａｘ３ ２１０、１ ６６６／ｃｍ提示結構中含有酰胺鍵，３ ０３０、１ ６００、１ ４５０為芳環特征吸收峰，７５６、７０２提示取代類型為苯環單取代。ＥＩＭＳ給出分子離子峰為２４６。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）譜中顯示，高場區有裂分為ｄ峰的２個甲基氫信號，推斷結構中含有異丙基，在低場區δ７．２２（５Ｈ，ｍ）的１組氫信號提示結構中也含有單取代苯環，根據核磁數據與文獻［１４］比對，鑒定化合物５為環（苯丙－纈）二肽。

化合物６：白色粉末，茚三酮顯陰性，ＩＲ（ＫＢｒ）３ ３００，１ ６５０／ｃｍ提示結構中含有酰胺鍵，ＥＩＭＳ給出分子離子峰為２６０，結合１ＤＮＭＲ分析可以推出分子式為Ｃ１５Ｈ２０Ｎ２Ｏ２，比化合物５多一個ＣＨ２。１ＨＮＭＲ圖譜中顯示，高場區有裂分為ｄ峰的２個甲基氫信號，推斷結構中含有異丙基，在低場區δ７．２２（５Ｈ，ｍ）的１組氫信號提示結構中也含有單取代苯環，根據化合物６的１ＨＮＭＲ和１３ＣＮＭＲ及其與文獻［１５］對照確定化合物６為環（苯丙－亮）二肽。

３小結與討論

本試驗對南海紅樹林內生真菌ＺＨ－７代謝產物進行研究，從培養液中分離得到６個化合物：比卡菌素（１），ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅⅡ（２），環（苯丙－脯）二肽（３），環（苯丙－苯丙）二肽（４），環（苯丙－纈）二肽（５），環（苯丙－亮）二肽（６）。初步藥理活性顯示化合物１對口腔癌細胞ＫＢ，ＫＢｖ２００抗腫瘤活性的ＩＣ５０值分別為１０．０和１４．５ μｇ／ｍＬ。

參考文獻：

［１］ 李越中，陳琦．海洋微生物資源及其產生生物活性次生生物代謝產物的研究［Ｊ］．生物工程進展，２０００，２０（１）：２８－３１．

［２］ ＢＵＧＮＩ ＴＳ， ＩＲＥＬＡＮＤ Ｃ Ｍ． Ｍａｒｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｕｎｇｉ：ａ ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｄｉｖｅｒｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ，２００４，２１：１４３－１６３．

［３］ ＳＡＤＡＢＡ Ｒ Ｂ， ＶＲＩＪＭＯＥＤ Ｌ Ｌ，ＪＯＮＥＳ Ｅ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｖｅｒｔｉｃａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔａｎｄｉｎｇ ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ aｃａｎｔｈｕｓ ｉｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ ｓｔｅｍｓ ａｔ Ｍａｉ Ｐｏ Ｍａｎｇｒｏｖｅ， Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，１９９５，２９５：１１９－１２６．

［４］ ＳＡＲＭＡ Ｖ Ｖ，ＨＹＤＥ Ｋ Ｄ，ＶＩ ＴＴＡＬ Ｂ Ｐ Ｒ． Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｍａｎｇ ｒｏｖｅ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅａｓｔ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，２００１，４５５：４１－５３．

［５］ ＡＮＡＮＤＡ Ｋ， ＳＲＩ ＤＨＡＲ Ｋ Ｒ． Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｗｅｓｔ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｃａｎ ＪＭ Iｃｒｏｂｉｏ，２００２，４８（１０）：８７１－８７８．

［６］ 鄭忠輝，繆莉，黃耀堅，等．紅樹林內生真菌的抗腫瘤活性［Ｊ］．廈門大學學報（自然科學版），２００３，４２（４）：５１３－５１６．

［７］ 吳雄宇，李曼玲，胡谷平，等．南海紅樹林內生真菌２５０８代謝物研究［Ｊ］．中山大學學報（自然科學版），２００２，４１（３）：３４－３６．

［８］ 羅景慧，楊迎暴，林永成，等．中國南海海岸紅樹真菌Ｘ ｙｌａｒｉａ ｓｐ． 代謝產物在體外對乙酰膽堿酯酶活性的影響［Ｊ］．中藥材，２００４，２７（４）：２６１－２６４．

［９］ ＭＯＳＭＡＮＮ Ｔ． Ｒａｐｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Iｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Mｅｔｈｏｄｓ，１９８３，６５（１－２）：５５－６３．

［１０］ ＺＨＡＮ Ｊ Ｘ； ＢＵＲＮＳ Ａ Ｍ，ＬＩＵ Ｍ Ｐ， ｅｔ ａｌ．Ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ： Bｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ｔｗｏ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ［Ｊ］，Ｎａｔ Ｐｒｏｄ，２００７，７０（２）：２２７－２３２．

［１１］ ＪＵＳＴＵＳＫ，ＨＥＲＲＭＡＮＮ Ｒ，ＫＬＡＭＡＮＮ Ｊ Ｄ，ｅｔ ａｌ． Ｒｅｔｉｐｏｌｉｄｅｓ－ｕｎｕｓｕａｌ ｓｐｉｒｏｍａｃｒｏlａｃｔｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ Ｒｅｔｉｂｏｌｅｔｕｓ ｒｅｔｉｐｅｓ ａｎｄ Ｒ． ｏｒｎａｔｉｐｅｓ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ，２００７，３３，５５６０－５５７２．

［１２］ ＤＡＮＩＥＬＡ Ｈ， ＳＡＢＩＮＥ Ｌ， ＡＮＧＥＬＩＫＡ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉａｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｒｏｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｌａｃｔｉｍ ｅｔｈｅｒ［Ｊ］． Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００６，８９（９）：１８９４－１９０９．

［１３］ ＡＢＥＬＬ Ｃ， ＧＡＲＳＯＮ Ｍ Ｊ， ＬＥＥＰＥＲ Ｆ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｓｙｎｔｈｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｎｇａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｌｔｅｒｎａｒｉｏｌ， ｍｅｌｌｅｉｎ， ｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎ， ａｎｄ ６－ｍｅｔｈｙｌｓａｌｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ ＣＤ３ＣＯ２Ｈ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１９８２（１７）：１０１１－１０１３．

［１４］ 劉海濱，高昊，王乃利，等．紅樹林真菌草酸青霉（０９２００７）的環二肽類成分［Ｊ］．沈陽藥科大學學報，２００７，２４（８）：４７４－４７８．

［１５］ 汪有初，周俊，譚寧華，等．五味子的環二肽及其合成［Ｊ］．藥學學報，１９９９，３４（１）：１９－２２．

參考文獻：

［１］ 李越中，陳琦．海洋微生物資源及其產生生物活性次生生物代謝產物的研究［Ｊ］．生物工程進展，２０００，２０（１）：２８－３１．

［２］ ＢＵＧＮＩ ＴＳ， ＩＲＥＬＡＮＤ Ｃ Ｍ． Ｍａｒｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｕｎｇｉ：ａ ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｄｉｖｅｒｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ，２００４，２１：１４３－１６３．

［３］ ＳＡＤＡＢＡ Ｒ Ｂ， ＶＲＩＪＭＯＥＤ Ｌ Ｌ，ＪＯＮＥＳ Ｅ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｖｅｒｔｉｃａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔａｎｄｉｎｇ ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ aｃａｎｔｈｕｓ ｉｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ ｓｔｅｍｓ ａｔ Ｍａｉ Ｐｏ Ｍａｎｇｒｏｖｅ， Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，１９９５，２９５：１１９－１２６．

［４］ ＳＡＲＭＡ Ｖ Ｖ，ＨＹＤＥ Ｋ Ｄ，ＶＩ ＴＴＡＬ Ｂ Ｐ Ｒ． Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｍａｎｇ ｒｏｖｅ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅａｓｔ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，２００１，４５５：４１－５３．

［５］ ＡＮＡＮＤＡ Ｋ， ＳＲＩ ＤＨＡＲ Ｋ Ｒ． Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｗｅｓｔ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｃａｎ ＪＭ Iｃｒｏｂｉｏ，２００２，４８（１０）：８７１－８７８．

［６］ 鄭忠輝，繆莉，黃耀堅，等．紅樹林內生真菌的抗腫瘤活性［Ｊ］．廈門大學學報（自然科學版），２００３，４２（４）：５１３－５１６．

［７］ 吳雄宇，李曼玲，胡谷平，等．南海紅樹林內生真菌２５０８代謝物研究［Ｊ］．中山大學學報（自然科學版），２００２，４１（３）：３４－３６．

［８］ 羅景慧，楊迎暴，林永成，等．中國南海海岸紅樹真菌Ｘ ｙｌａｒｉａ ｓｐ． 代謝產物在體外對乙酰膽堿酯酶活性的影響［Ｊ］．中藥材，２００４，２７（４）：２６１－２６４．

［９］ ＭＯＳＭＡＮＮ Ｔ． Ｒａｐｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Iｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Mｅｔｈｏｄｓ，１９８３，６５（１－２）：５５－６３．

［１０］ ＺＨＡＮ Ｊ Ｘ； ＢＵＲＮＳ Ａ Ｍ，ＬＩＵ Ｍ Ｐ， ｅｔ ａｌ．Ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ： Bｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ｔｗｏ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ［Ｊ］，Ｎａｔ Ｐｒｏｄ，２００７，７０（２）：２２７－２３２．

［１１］ ＪＵＳＴＵＳＫ，ＨＥＲＲＭＡＮＮ Ｒ，ＫＬＡＭＡＮＮ Ｊ Ｄ，ｅｔ ａｌ． Ｒｅｔｉｐｏｌｉｄｅｓ－ｕｎｕｓｕａｌ ｓｐｉｒｏｍａｃｒｏlａｃｔｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ Ｒｅｔｉｂｏｌｅｔｕｓ ｒｅｔｉｐｅｓ ａｎｄ Ｒ． ｏｒｎａｔｉｐｅｓ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ，２００７，３３，５５６０－５５７２．

［１２］ ＤＡＮＩＥＬＡ Ｈ， ＳＡＢＩＮＥ Ｌ， ＡＮＧＥＬＩＫＡ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉａｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｒｏｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｌａｃｔｉｍ ｅｔｈｅｒ［Ｊ］． Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００６，８９（９）：１８９４－１９０９．

［１３］ ＡＢＥＬＬ Ｃ， ＧＡＲＳＯＮ Ｍ Ｊ， ＬＥＥＰＥＲ Ｆ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｓｙｎｔｈｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｎｇａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｌｔｅｒｎａｒｉｏｌ， ｍｅｌｌｅｉｎ， ｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎ， ａｎｄ ６－ｍｅｔｈｙｌｓａｌｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ ＣＤ３ＣＯ２Ｈ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１９８２（１７）：１０１１－１０１３．

［１４］ 劉海濱，高昊，王乃利，等．紅樹林真菌草酸青霉（０９２００７）的環二肽類成分［Ｊ］．沈陽藥科大學學報，２００７，２４（８）：４７４－４７８．

［１５］ 汪有初，周俊，譚寧華，等．五味子的環二肽及其合成［Ｊ］．藥學學報，１９９９，３４（１）：１９－２２．

參考文獻：

［１］ 李越中，陳琦．海洋微生物資源及其產生生物活性次生生物代謝產物的研究［Ｊ］．生物工程進展，２０００，２０（１）：２８－３１．

［２］ ＢＵＧＮＩ ＴＳ， ＩＲＥＬＡＮＤ Ｃ Ｍ． Ｍａｒｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｕｎｇｉ：ａ ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｄｉｖｅｒｓｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ，２００４，２１：１４３－１６３．

［３］ ＳＡＤＡＢＡ Ｒ Ｂ， ＶＲＩＪＭＯＥＤ Ｌ Ｌ，ＪＯＮＥＳ Ｅ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｖｅｒｔｉｃａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｇｉ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔａｎｄｉｎｇ ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ aｃａｎｔｈｕｓ ｉｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ ｓｔｅｍｓ ａｔ Ｍａｉ Ｐｏ Ｍａｎｇｒｏｖｅ， Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，１９９５，２９５：１１９－１２６．

［４］ ＳＡＲＭＡ Ｖ Ｖ，ＨＹＤＥ Ｋ Ｄ，ＶＩ ＴＴＡＬ Ｂ Ｐ Ｒ． Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｍａｎｇ ｒｏｖｅ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅａｓｔ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，２００１，４５５：４１－５３．

［５］ ＡＮＡＮＤＡ Ｋ， ＳＲＩ ＤＨＡＲ Ｋ Ｒ． Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｗｅｓｔ ｃｏａｓｔ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｃａｎ ＪＭ Iｃｒｏｂｉｏ，２００２，４８（１０）：８７１－８７８．

［６］ 鄭忠輝，繆莉，黃耀堅，等．紅樹林內生真菌的抗腫瘤活性［Ｊ］．廈門大學學報（自然科學版），２００３，４２（４）：５１３－５１６．

［７］ 吳雄宇，李曼玲，胡谷平，等．南海紅樹林內生真菌２５０８代謝物研究［Ｊ］．中山大學學報（自然科學版），２００２，４１（３）：３４－３６．

［８］ 羅景慧，楊迎暴，林永成，等．中國南海海岸紅樹真菌Ｘ ｙｌａｒｉａ ｓｐ． 代謝產物在體外對乙酰膽堿酯酶活性的影響［Ｊ］．中藥材，２００４，２７（４）：２６１－２６４．

［９］ ＭＯＳＭＡＮＮ Ｔ． Ｒａｐｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Iｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Mｅｔｈｏｄｓ，１９８３，６５（１－２）：５５－６３．

［１０］ ＺＨＡＮ Ｊ Ｘ； ＢＵＲＮＳ Ａ Ｍ，ＬＩＵ Ｍ Ｐ， ｅｔ ａｌ．Ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ： Bｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ｔｗｏ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ［Ｊ］，Ｎａｔ Ｐｒｏｄ，２００７，７０（２）：２２７－２３２．

［１１］ ＪＵＳＴＵＳＫ，ＨＥＲＲＭＡＮＮ Ｒ，ＫＬＡＭＡＮＮ Ｊ Ｄ，ｅｔ ａｌ． Ｒｅｔｉｐｏｌｉｄｅｓ－ｕｎｕｓｕａｌ ｓｐｉｒｏｍａｃｒｏlａｃｔｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ Ｒｅｔｉｂｏｌｅｔｕｓ ｒｅｔｉｐｅｓ ａｎｄ Ｒ． ｏｒｎａｔｉｐｅｓ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ，２００７，３３，５５６０－５５７２．

［１２］ ＤＡＮＩＥＬＡ Ｈ， ＳＡＢＩＮＥ Ｌ， ＡＮＧＥＬＩＫＡ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉａｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｒｏｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｌａｃｔｉｍ ｅｔｈｅｒ［Ｊ］． Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００６，８９（９）：１８９４－１９０９．

［１３］ ＡＢＥＬＬ Ｃ， ＧＡＲＳＯＮ Ｍ Ｊ， ＬＥＥＰＥＲ Ｆ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｓｙｎｔｈｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｎｇａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｌｔｅｒｎａｒｉｏｌ， ｍｅｌｌｅｉｎ， ｒｕｂｒｏｆｕｓａｒｉｎ， ａｎｄ ６－ｍｅｔｈｙｌｓａｌｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ ＣＤ３ＣＯ２Ｈ［Ｊ］． Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１９８２（１７）：１０１１－１０１３．

［１４］ 劉海濱，高昊，王乃利，等．紅樹林真菌草酸青霉（０９２００７）的環二肽類成分［Ｊ］．沈陽藥科大學學報，２００７，２４（８）：４７４－４７８．

［１５］ 汪有初，周俊，譚寧華，等．五味子的環二肽及其合成［Ｊ］．藥學學報，１９９９，３４（１）：１９－２２．