不同的抗原修復方法在免疫組化染色中的應用

【摘要】目的　研究分析免疫組化染色使用不同抗原修復的使用情況。方法 選取66例我院乳腺癌手術切除組織來進行分析，采取不處理、電爐煮沸、高壓、胰酶法等抗原修復方式進行免疫組化染色，探討免疫組化染色在不同方式下的情況。結果　抗原修復選擇的方法不同，組織抗原暴露就會有差異性，高壓加熱能夠讓掩蓋以及交聯變性的抗原暴露和修復，提升免疫組化結果的準確度，選擇高壓熱修復方式獲得陽性結果比較可靠。結論 臨床中根據情況來使用不同的抗原修復方式能夠對免疫組化結果進行優化，對難以檢測的細胞內液和細胞核提供較高的檢出率，結果可靠性較高。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.14.145

作者單位：163316 黑龍江省大慶市第四醫院

Application of Different Antigen Retrieval Methods in Immunohistochemical Staining

JU Xueping The Fourth Hospital of Daqing City，Daqing 163316，China

【Abstract】Objective To study immunohistochemical analysis using a different antigen retrieval. Methods A total of 66 cases of breast cancer in our hospital surgical removal of tissue for analysis，take no treatment，electric boiling，pressure，and other aunt enzymatic antigen retrieval mode immunohistochemical staining. Immunohistochemical staining situation in different ways were discussed. Results The repair method selected different antigens，tissue antigen exposure had differences，autoclavable allow conceal and crosslinked denatured antigen exposure and repair，improve accuracy of immunohistochemistry results，the highpressure hot fix more reliable way to get a positive result. Conclusion According to the clinical situation，the use of different antigens repair methods for immunohistochemical results can be optimized，for difficult and nuclear provide higher detection rate in the intracellular fluid and test cell，the results higher reliability.

【Key word】 Antigen retrieval method，Immunohistochemistry，Microwave，Electric boiling，Trypsin method

免疫組織化學是使用抗體和抗原特異性結合進行細胞以及組織某些化學物的鑒定方式，該技術既包含了免疫學理論，同時也包含了組織化學理論 ［1］。免疫組織化學染色技術的敏感性強，特異性高，對組織、細胞以及細胞培養爬片都能夠進行蛋白質和多肽定位，一般臨床中使用的方式有化學方式以及物理方式兩種，使用較多的技術包括了酶消化、微波、高壓鍋煮沸、蒸汽等等。此次我院對三種使用比較多的抗原修復方法進行了研究，探討其免疫組化染色情況，現根據研究進行以下報道。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1　組織材料　根據我院2013年1月～2014年9月接收的66例乳腺癌外科手術切除組織來進行探討分析，使用了5種常用的抗體修復方式進行比較。

1.1.2　試劑?。?）16種抗體、s-p即用型試劑盒購自福州邁新生物技術開發公司；（2）胰蛋白酶也購自福州邁新生物技術開發公司即胰酶消化試劑盒；（3）抗原修復緩沖液：檸檬酸鹽緩沖液（0.01 mmol，pH=6.0）edta緩沖液（1 mmol，pH=8.0）按1：50的比例稀釋；（4）丙酮、苯甲酸甲酯、二甲苯、10%福爾馬林液、3%雙氧水甲醇液、PBS（pH=7.2～7.4）液、dab顯色液等。

1.2　方法

1.2.1　電爐加熱抗原修復法?。?）切片脫蠟至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇處理切片10 min。（3）自來水洗，蒸餾水洗。（4）使用電爐和抗原修復液對切片進行處理，等溫度到達92℃后可以拔掉電源，等溫度低于92℃時將電源插上，保持在這個范圍內，持續進行切片處理10 min。（5）等修復液的溫度回復到室溫狀態后，PBS洗三次，根據選擇的染色方法來染色。

1.2.2　高壓抗原修復法?。?）切片脫蠟至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇處理切片10 min。（3）自來水洗，蒸餾水洗。（4）置切片于修復液中，連容器一同置入高壓鍋進行煮沸。等壓力閥噴氣1～4 min。（5）等修復液溫度回復到室溫，PBS洗三次，按選擇染色方式染色。

1.2.3　真空負壓抗原修復法?。?）切片脫蠟至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇真空負壓處理5 min。（3）自來水洗，蒸餾水洗。（4）0.01 M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），真空負壓干燥箱預先調至95℃，真空負壓處理10 min。（5）待修復液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進行染色。

2　結果

此次研究中使用的三種抗原修復方式結果表明，高壓鍋加熱抗原修復法處理過的切片組織，使用的免疫組化染色結果陽性表達比較優秀，顆粒和顏色都很清晰，電爐煮沸抗原修復方式中陽性表達抗體只有一種。

3　討論

免疫組化的原理是基于抗原和抗體的反應來實現的，使用顯色劑來對反應抗體進行標記，就能夠對組織細胞抗原進行確定，達到定位、定性、定量的目的?？乖涂贵w的結合特異性是比較高的，抗原修復的有效溫度以及需要的時間根據使用的設備以及儀器變化會有一定的差異性，修復抗原時選擇的溫度范圍以及保持有效溫度的時間也有差異性 ［2］?？乖迯臀覀冞x擇加熱的方式比較多，微波輻射加熱的方式雖然產生的熱量快，但是液體干涸也快，所以，要求使用足夠的修復液，否則就會導致切片干涸。實驗室研究表明微波輻射對修復液的要求有時會達到1 000 ml ［3］。使用大量的修復液需要的沸騰時間也會增加，那么切片的輻射量也會增加，這樣才能夠徹底的讓抗原得到修復。

總而言之，抗原修復方法應用于免疫組化染色時，需要選擇正確的抗原修復方式，這樣才能夠讓染色的效果提升，獲得的陽性結果也更加準確，此次研究中我們選擇的三種修復方式中，高壓鍋加熱的方式獲得的陽性顆粒表達比較優秀，電爐煮沸的陽性表達抗體為一種。