老年原發免疫性血小板減少癥患者治療前后T淋巴細胞亞群的臨床研究

孫媛媛 謝 軍 鮑揚漪 李玉芝

老年原發免疫性血小板減少癥患者治療前后T淋巴細胞亞群的臨床研究

孫媛媛 謝 軍 鮑揚漪 李玉芝

目的 檢測老年原發免疫性血小板減少癥(ITP)患者治療前后T淋巴細胞亞群的動態變化，探討其在ITP發生發展中的作用。方法采用流式細胞術測定ITP患者治療前后及正常對照組外周血T淋巴細胞亞群的水平。結果ITP患者治療前后T淋巴細胞絕對值、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+T淋巴細胞比例及CD4+/CD8+比值分別為(0.83±0.16)vs(1.74±0.36)、(71.71±1.07)%vs(72.69±1.35)%、(41.78±0.71)%vs(42.46±1.20)%、(29.67±0.97)%vs(28.56±1.75)%、(8.76±0.56)%vs(9.39±1.26)%、(1.42±0.07)vs(1.49±0.13)，CD8+T淋巴細胞比例治療后顯著降低，其余均顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。結論T淋巴細胞亞群的異常改變，破壞自身免疫，與病情相關，可指導臨床治療，并作為評估預后的參考指標。

免疫性血小板減少癥；T淋巴細胞亞群；調節性T淋巴細胞

原發免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)是一種獲得性自身免疫性出血性疾病，多發于兒童和育齡期婦女，但60歲以上老年人是繼上述人群之后的又一高發人群[1]。該病主要由體液和細胞免疫介導的血小板過度破壞和血小板生成不足所致。為探討老年ITP患者T淋巴細胞免疫功能的變化，本文檢測36例老年ITP患者外周血T淋巴細胞亞群在病程中的變化，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月至2014年10月我科初診的36 例ITP患者(ITP組)，男女各18例，年齡60～85歲，平均73.24歲，治療前血小板計數為(2～27)×109/L?；颊咴\斷及療效判斷參照美國成人免疫性血小板減少癥實踐指南及中國專家共識[2]。ITP組中，32例均為經地塞米松(40 mg/次，1次/d，連用4 d)沖擊治療有效者，剩余4例為激素治療無效者。對照組30例隨機選自同期健康體檢人群，男女各15 例，年齡60～83歲，平均71.56歲，血小板計數均≥100×109/L。

1.2 檢測方法

1.2.1 試劑與儀器 流式細胞分析儀FACSCalibur型購自美國BD公司，T淋巴細胞亞群試劑即鼠抗人單克隆抗體CD3-FITC/CD45-Percp/CD4-APC/CD8-PE/CD25-PE由美國BD公司提供。

1.2.2 T淋巴細胞亞群測定 采集ITP組患者治療前及治療后5～7天時晨起空腹靜脈血2 mL，EDTA抗凝，相同方法采集對照組外周血2 mL。取50 μL外周血分別加入鼠抗人單克隆抗體CD3-FITC、CD45-Percp、CD4-APC、CD8-PE、CD25-PE 20 μL，室溫避光孵育20 min，再加入溶血素450 μL，室溫避光孵育10 min，用PBS洗滌2次，重懸細胞上FACSCalibur流式細胞儀檢測。

2 結果

2.1 兩組治療前外周血T淋巴細胞亞群檢測比較 ITP組治療前T淋巴細胞絕對值及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞比例分別為(0.83±0.16)×109/L、(71.71±1.07)%、(41.78±0.71)%、(29.67±0.97)%，CD4+/CD8+T淋巴細胞比值為(1.42±0.07)；相應地，對照組外周血T淋巴細胞亞群分別為(1.61±0.27)×109/L、(72.63±1.61)%、(42.73±1.75)%、(28.93±1.70)%、(1.48±0.13)。治療前，ITP組T淋巴細胞絕對值、CD3+、CD4+T淋巴細胞比例低于對照組，CD8+T淋巴細胞比例高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；CD4+/CD8+T淋巴細胞比值低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組治療前外周血T淋巴細胞亞群檢測

2.2 ITP患者治療前后外周血T淋巴細胞亞群檢測比較 ITP患者經地塞米松沖擊治療后，T淋巴細胞絕對值、CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞比例分別為(1.74±0.36)×109/L、(72.69±1.35)%、(42.46±1.20)%、(28.56±1.75)%，CD4+/CD8+T淋巴細胞比值為(1.49±0.13)，治療后T淋巴細胞絕對值、CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞均明顯升高，CD8+T淋巴細胞明顯降低，CD4+/CD8+T淋巴細胞比值顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 ITP患者治療前后外周血T淋巴細胞亞群檢測

2.3 ITP患者治療前后CD4+CD25+T淋巴細胞數量比較 對照組患者CD4+CD25+T淋巴細胞占T淋巴細胞的比例為(9.52±1.02)%，而ITP患者為(8.76±0.56)%，兩組差異有統計學意義(P<0.05)。經過地塞米松治療后，ITP組患者CD4+CD25+T細胞比例增加至(9.39±1.26)%，較治療前顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.4 ITP 患者治療前后血小板數比較 ITP患者治療前血小板計數為為(10.58±8.79)×109/L，治療后為(70.43±22.38)×109/L，治療前后血小板計數差異有統計學意義(t=17.41，P<0.05)。治療有效的32例患者中，T淋巴細胞亞群恢復接近正常，而治療無效4例的患者T淋巴細胞亞群無變化。

3 討論

ITP是以外周血血小板數目減少、壽命縮短、骨髓巨核細胞代償性增多合并成熟障礙為表現的自身免疫性疾病。ITP的發生不僅存在B淋巴細胞異常, 也存在T淋巴細胞的異常[3]，T、B淋巴細胞共同參與了ITP的發病。ITP是一種免疫介導的血小板減少綜合征，發病機制不明，主要與T淋巴細胞及B淋巴細胞異常、巨核細胞成熟障礙及血小板破壞加速等方面有關[4]。T 淋巴細胞介導的免疫反應參與了ITP的發病，機體免疫功能紊亂是ITP發病的主要原因[5]。

ITP患者體內存在著多種異常T淋巴細胞，其中包括CD4+T淋巴細胞降低，并促進自身反應性B淋巴細胞增殖，產生抗血小板抗體，進而破壞血小板。大多數ITP患者血清中血小板表面包被抗體增加，CD8+T淋巴細胞可通過細胞毒性作用將其破壞。因此，T淋巴細胞是體液與細胞免疫的重要環節，CD4+/CD8+T淋巴細胞比值的動態平衡是維持免疫環境穩定的中心環節，王厚才等[6]認為T 淋巴細胞異常導致B淋巴細胞激活可能是ITP真正的發病機制。

本研究顯示ITP患者的確存在著T淋巴細胞亞群的異常改變，與ITP患者治療前相比正常組的T淋巴細胞絕對值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴細胞亞群比例及CD4+/CD8+T淋巴細胞比值均有不同程度下降，而CD8+T淋巴細胞比例顯著增高，充分說明了T淋巴細胞亞群功能和比例失衡，T淋巴細胞免疫調節機制的紊亂，在ITP的發生發展過程中起重要作用[7]。地塞米松治療有效的患者出現T淋巴細胞絕對值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴細胞數量及CD4+/CD8+T淋巴細胞比值升高及CD8+T淋巴細胞數量下降，提示地塞米松抑制了T淋巴細胞抗原的表達，對CD8+T淋巴細胞的抑制更為明顯。隨著免疫功能紊亂的糾正，T淋巴細胞絕對值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+、CD8+T淋巴細胞水平恢復正常，血小板水平亦逐漸恢復，與相關研究一致[8]。由此得出，糾正異常的T淋巴細胞功能，對ITP的治療可能有幫助。

因此，通過檢測患者的外周血淋巴細胞亞群變化，可以對治療ITP疾病的療效觀察和預后發展趨勢做出相應的判斷[9]。T淋巴細胞亞群的水平可作為評估患者病情、指導治療、判斷預后的指標，有助于明確發病機制，對患者治療方案的選擇具有指導意義[10]。老年ITP患者有其特殊性，基礎疾病多，臟器功能差，對常規治療的反應差。隨著對ITP免疫學發病機制研究的深入，通過檢測患者的外周血淋巴細胞亞群變化，對治療ITP疾病的療效觀察和預后發展趨勢做出相應的判斷，更好地運用免疫手段來治療疾病，調節淋巴細胞亞群平衡可能成為治療ITP的新途徑。

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(2015-01-26收稿 2015-03-29修回)

The clinical study on T lymphocyte subsets before and after treatment in elderly patients with primary immune thrombocytopenia

SunYuanyuan,XieJun,BaoYangyi,etal

DepartmentofHematology,theFirstPeople'sHospitalofHefei,Hefei230061,China

Objective To detect the dynamic changes of T lymphocyte subsets before and after the treatment in elderly patients with primary immune thrombocytopenia, and to explore its role in the occurrence and development of ITP.MethodsThe levels of peripheral blood T lymphocyte subsets were measured before and after treatment in patients with ITP and normal control group by flow cytometry.ResultsBefore and after treatment in patients with ITP, the absolute value of T lymphocytes, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+CD25+T lymphocyte ratio and the ratio of CD4+/CD8+was (0.83±0.16)vs(1.74±0.36), (71.71±1.07)%vs(72.69±1.35)%,(41.78±0.71)%vs(42.46±1.20)%, (29.67±0.97)%vs(28.56±1.75)%, (8.76±0.56)%vs(9.39±1.26)%, (1.42±0.07)vs(1.49±0.13), respectively; the proportion of CD8+T lymphocyte decreased significantly after the treatment; the rest were significantly increased, and the differences were statistically significant (P<0.05).ConclusionThe changes of T cell subsets and the breakdown of immune are related to the course of disease, which may guide the clinical treatment and serve as a reference index to evaluate the prognosis.

Immune thrombocytopenia;T lymphocyte subsets;Regulatory T cell

230061 安徽省合肥市第一人民醫院血液科

鮑揚漪,ahmuxj@sina.com

10.3969/j.issn.1000-0399.2015.06.015