種植體周圍炎患者齦溝液中IL-8、IL-18的水平檢測及意義

酈 興 壽建剛 何 謹 朱滕飛

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種植體周圍炎患者齦溝液中IL-8、IL-18的水平檢測及意義

酈 興 壽建剛 何 謹 朱滕飛

目的 探討IL-8、IL-18在種植體周圍炎齦溝液(GCF)中的表達及意義。方法 選擇2011年1月～2013年12月期間40例種植體周圍炎患者為研究對象。另選擇健康種植體患者40例。選擇健康人群50例為健康對照組。統計3組探診深度(PD)、齦溝出血指數(SBI)、IL-8、IL-18質量濃度，并對GCF中IL-8、IL-18質量濃度與性別、年齡、PD、SBI進行相關性分析。結果 種植體周圍炎組PD、SBI、GCF均高于健康種植體組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；但健康種植體組和對照組PD、SBI、GCF差異無統計學意義(P>0.05)；種植體周圍炎組IL-8、IL-18水平高于健康種植體組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，健康種植體組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；≥60歲組IL-8、IL-18水平高于<60歲組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，<60歲組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；GCF 與PD、SBI、IL-8、IL-18呈正相關(P<0.05)；IL-8、IL-18與年齡、PD、SBI呈正相關(P<0.05)；IL-8和IL-18之間呈正相關(P<0.05)。結論 IL-8、IL-18在種植體周圍炎患者GCF中呈高表達；GCF中IL-8、IL-18的特異性表達與種植體周圍炎密切相關。

種植體周圍炎 齦溝液 細胞因子 炎性反應 免疫功能

種植體周圍炎是種植體周圍組織的炎性反應，可導致患者支持骨喪失，甚至引起種植體脫落，可嚴重影響患者的口腔健康，對該病盡早診治對病情的控制和改善具有重要意義[1，2]?？谇谎仔约膊r患者體內細胞因子可出現異常表達，表明機體存在一定的炎性反應和免疫紊亂[3]。本研究通過檢查種植體周圍炎患者齦溝液(gingival crevicular fluid，GCF)中白細胞介素8(IL-8)、IL-18的質量濃度，旨在探討IL-8、IL-18在種植體周圍炎GCF中的表達及意義。

資料與方法

1.一般資料：選擇2011年1月～2013年12月期間被筆者醫院收治的50例種植體周圍炎患者為研究對象，符合種植體周圍炎的診斷標準[3]，患者年齡20～70歲，平均年齡為39±4歲，男性23例，女性27例。另選擇同期被筆者醫院收治的健康種植體患者50例，患者年齡21～65歲，平均年齡為40±4歲，男性22例，女性28例。選擇同期在筆者醫院門診體檢的健康人群50例為健康對照組，患者年齡19～65歲，平均年齡37±3歲，男性22例，女性28例。3組在年齡、性別等方面比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究均獲受試者知情并簽署知情同意書。

2.納入排除標準：(1)納入標準[3]：患者年齡16～35歲；符合種植體周圍炎的診斷標準；無全身系統疾??；近半年內未接受牙周治療、未服用抗生素；無其他原發腦部器質性病變；知情同意。(2)排除標準[3]：有種植體周及牙周組織疾病治療史者；有精神疾病史；有酒精、藥物濫用史；近半年內服用免疫抑制劑、避孕藥者；孕婦；吸煙者；未完成隨訪者。

3.研究方法：(1)GCF的采集：將Whatman 3號濾紙裁成寬2mm×20mm的紙條，置于干凈容器中備用。采集GCF：用無菌干棉球擦干牙面，隔濕，去除較大的菌斑，輕吹牙齦，將制備好的濾紙條插入種植體頰側近遠中、舌(腭)側近遠中齦溝中，1min后取出，用游標卡尺測量并記錄浸濕長度，剪去干燥部分，置于裝有1ml生理鹽水的Eppendorf管中，每管含1個樣本的4條濾紙，離心半徑8cm，10000r/min，4℃離心10min，取上清液，-70℃冷凍保存。(2)GCF定量:將健康者血清0.1～2.0μl分為20組(以0.01μl遞增)，用 5μl進樣器取各組標準量血清滴于相同的Whatman 3號濾紙條，每組3條濾紙，游標卡尺測量濾紙浸濕長度。根據健康者血清量與濾紙浸濕面積的標準曲線計算GCF量，經計算，正常人血清體積與濾紙浸濕面積呈直線線性相關(r=0.978，P=0.000)。(3)標本檢測:室溫下解凍標本20min，1000r/min離心10min，取上清液，采用雙抗體夾心ELISA法檢測所有受試者GCF中IL-8、IL-18含量，試劑盒購自于上海華大科技有限公司。嚴格按照說明書操作[1]。(4)統計指標:統計3組探診深度(PD)、齦溝出血指數(SBI)、受試者GCF中IL-8、IL-18質量濃度，并對GCF中IL-8、IL-18質量濃度與性別、年齡、PD、SBI進行相關性分析。

4.統計學方法:使用SPSS 19.0軟件，計量資料執行t檢驗或單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，相關性分析采用Pearson檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1.3組患者PD、SBI、GCF:3組間PD、SBI、GCF的比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，3組間PD、SBI、GCF差異有統計學意義；種植體周圍炎組PD、SBI、GCF均高于健康種植體組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)；但健康種植體組和對照組PD、SBI、GCF差異無統計學意義(P>0.05，表1)。

表1 3組患者PD、SBI、GCF比較

與健康種植體比較,**P<0.01；與對照組比較,##P<0.01

2. 3組GCF中IL-8、IL-18質量濃度:3組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，3組間IL-8、IL-18水平存在明顯差異；種植體周圍炎組IL-8、IL-18水平高于健康種植體組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，健康種植體組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，表2)。

表2 3組GCF中IL-8、IL-18水平比較

與健康種植體比較,**P<0.01；與對照組比較,##P<0.01

3.不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平:50例種植體周圍炎患者中，男性23例，女性27例，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，檢測結果顯示，不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較，差異無統計學意義(P>0.05，表3)。

表3 不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較

與對照組比較，**P<0.01

4.不同年齡段種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平:將50例種植體周圍炎患者按照年齡段分為≥60歲組(20例)和<60歲組(30例)兩組。組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，不同年齡段種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較差異有統計學意義，≥60歲組IL-8、IL-18水平高于<60歲組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，<60歲組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01，表4)。

表4 不同年齡段種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較

與<60歲組比較，**P<0.01；與對照組比較，##P<0.01

5.GCF中IL-8、IL-18的表達與性別、年齡、PD、SBI的相關性分析:采用Pearson檢驗對GCF中IL-8、IL-18表達與性別、年齡、PD、SBI進行相關性分析，GCF 與PD、SBI、IL-8、IL-18呈正相關(P<0.05)；IL-8、IL-18與年齡、PD、SBI呈正相關(P<0.05)；IL-8和IL-18之間呈正相關(P<0.05，表5)。

表5 GCF中IL-8、IL-18的表達與性別、年齡、PD、SBI的相關性

討 論

IL-8可由巨噬細胞、內皮細胞等多種細胞分泌，是一種重要的炎性因子，具有多重作用，既可介導炎性反應過程，亦可誘導內皮細胞增殖和遷移，促進血管生成[3]。IL-8作為介導炎癥進展的重要細胞因子，與口腔炎性疾病的發病密切相關，在口腔炎性疾病的發病過程中亦起重要作用[4～6]。本研究檢測種植體周圍炎患者GCF中IL-8含量，實驗結果顯示，種植體周圍炎患者GCF中IL-8的檢測含量明顯高于健康種植體者和健康人群。與Severino等[3]的報道基本一致。健康人群GCF中無明顯炎性反應，因此GCF中IL-8可正常表達；本研究中健康種植體患者IL-8檢測含量高于健康人群，表明其亦存在一定的炎性反應，但相較種植體周圍炎患者，健康種植體患者炎性反應較弱，因此其GCF中IL-8質量濃度檢測結果介于健康人群與種植體周圍炎患者之間，這表明IL-8與種植體周圍炎的發生密切相關[3，7]。

IL-18為近年來發現的白介素因子，其具有免疫調節功能，可參與機體免疫反應[8]。近年來研究發現，IL-18在口腔疾病中可出現異常表達，與口腔相關炎癥性疾病的發病密切相關。本研究檢測種植體周圍炎患者GCF中IL-18含量，實驗結果顯示，種植體周圍炎患者GCF中IL-18檢測含量高于健康種植體患者和健康人群。健康人群和健康種植體患者GCF中無炎性反應或炎性水平較弱，因此GCF中IL-18可正常表達或表達水平介于健康人群與種植體周圍炎之間[9]。而種植體周圍炎患者存在免疫紊亂和炎性反應，因此IL-18可出現高表達，表明種植體周圍炎患者體內存在由IL-18誘導的免疫激活，IL-18的表達狀況與種植體周圍炎的發生同樣密切相關，推測可能機制為，IL-18通過調節血中5-HT水平變化進而激活免疫反應[9，10]。

本研究中不同性別的種植體周圍炎患者之間GCF中IL-8、IL-18的檢測含量并無顯著差異，但不同年齡段的種植體周圍炎患者GCF中上述指標檢測含量存在明顯差異，表明種植體周圍炎中IL-8、IL-18等指標的表達與性別無相關性，但與年齡有關，相關性結果亦進一步證實了這一點。60歲以上的種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18的表達存在異常，分析可能與以下因素有關：老年人群本身免疫功能已經開始減退，相較60歲以下人群，發生炎性反應時老年患者免疫紊亂和炎癥程度較重，因此GCF中上述指標檢測結果存在明顯異常。

本組資料相關性分析結果顯示，PD、SBI與IL-8、IL-18、GCF呈正相關，IL-8、IL-18的表達之間呈正相關。表明上述指標之間存在較為復雜的相關性，在種植體周圍炎中IL-8、IL-18等指標可能并不單獨起作用。種植體周圍炎患者GCF中IL-8檢測水平越高，IL-18表達亦增強，即IL-8、IL-18均呈高表達，表明機體所產生的炎性反應越劇烈，免疫紊亂越嚴重，表現為種植體周圍的PD和SBI越顯著[11]。

國內有關GCF中IL-8、IL-18表達與種植體周圍炎之間的研究較少，因此本研究具有一定的創新性。IL-8、IL-18在種植體周圍炎患者GCF中呈高表達；GCF中IL-8、IL-18的特異性表達與種植體周圍炎密切相關。

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3 Severino VO, Napimoga MH, de Lima Pereira SA. Expression of IL-6, IL-10, IL-17 and IL-8 in the periimplant crevicular fluid of patients with peri-implantitis[J]. Arch Oral Biol, 2011, 56(8):823-828

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6 孫鴻義,戴燕平,鞏玉花，等.種植體周圍齦溝液中白介素-1β與牙周指數的相關性研究[J].中國醫藥科學,2013,(17):64-65,78

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9 李德超,周彥鵬,王澤，等.種植體周圍炎患者齦溝液中IL-18和MMP-13表達研究[J].中國實用口腔科雜志,2014,7(4):213-216

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11 Heasman P，Esmail Z，Barclay C．Peri-implant diseases[J].Dent Update，2010，37(8)：511-516

(修回日期：2015-03-16)

IL-8,IL-18 Expression in Peri-implant Gingival Crevicular Fluid and Clinical Significance.

LiXing,ShouJiangang,HeJin,etal.

ShaoxingCentralHospitalofZhejiang,ShaoxingHospitalofChinaMedicalUniversity,Zhejiang312030，China

Objective To study IL-8,IL-18 expression in peri-implantitis gingival crevicular fluid and clinical significance. Methods Between January 2011 and December 2013, 40 patients with peri-implantitis were selected as the research object. 40 cases of healthy implant patients were selected. 50 cases of healthy people healthy were selected as the controls. The probing depth (PD), sulcus bleeding index (SBI), GCF IL-8,IL-18 mass concentration in the three groups were tested, and correlation analysis between IL-8,IL-18 mass concentration in GCF and gender, age, PD and SBI were made. Results PD and SBI, GCF in peri-implant group were higher than healthy implant group and the control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). But the PD and SBI, GCF of healthy implant group and the control group B had no obvious difference (P>0.05); IL-8,IL-18 in peri-implant group was higher than healthy implant group and the control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). IL-8,IL-18 levels in healthy implant group was higher than the control group, and difference was statistically significant(P<0.01). Peri-implant patients with different gender in GCF IL-8,IL-18 levels, and there was no statistically significant difference (P>0.05). IL-8,IL-18 levels of patients whose ages were 60 or higher in peri-implant group were higher than the < 60 years old group and the control group,and the difference was statistically significant (P<0.01).IL-8,IL-18 levels in the < 60 years old group were higher than the control group, and difference was statistically significant (P<0.01). The GCF was positively correlated with PD, SBI, IL-8, IL-18 (P<0.05). IL-8, IL-18 was positively correlated with age, PD, SBI (P<0.05).There was a positive correlation between IL-8 and IL-18 (P<0.05). Conclusion IL-8,IL-18 show high expression in GCF in peri-implantitis. The specific expressions of IL-8,IL-18 in GCF are closely related to peri-implantitis.

Peri-implantitis; Gingival crevicular fluid; Cytokines; Inflammatory reaction; Immune function

312030 中國醫科大學紹興醫院口腔科

R78

A DOI 10.11969/j.issn.1673-548X.2015.10.044

2015-02-04)