尿絨毛膜促性腺激素檢查與臨床意義

劉敏　常紀　付寶慶

【摘要】探討尿絨毛膜促性腺激素檢查方法及臨床意義。免疫學方法簡便、快速、靈敏、特異性強。人絨毛膜促性腺激素（hCG）可用于早孕診斷。正常育齡婦女hCG升高提示早孕。作為絨毛膜上皮細胞癌、葡萄胎的早期診斷指標?？捎糜趯q毛膜上皮細胞癌、葡萄胎手術后化療效果觀察，是有效隨訪監測的手段。

【關鍵詞】尿絨毛膜促性腺激素； 檢查；臨床意義

血液和尿液hCG檢測方法非常多，如酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、電化學發光免疫試驗、放射免疫試驗、乳膠凝集抑制試驗、血凝抑制試驗等。而目前臨床上應用最為普遍的是尿液的單克隆抗體膠體金試驗[1]。對2012年～2013年檢測100例尿絨毛膜促性腺激素臨床檢查及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對2012年1月～2013年12月尿絨毛膜促性腺激素檢測100例。均為女性，年齡22～46歲，平均28歲。尿液以1500～2000r/min離心10min。晨尿hCG水平最高，接近血清水平，通常收集晨尿送檢。

1.2 方法 酶聯免疫吸附法，包被固相載體用的β-hCG基McAb。根過氧化物酶（HRP）標記的β-hCG基的McAb。在HRP反應體系中作底物（供氫體）的四甲基聯苯胺（TMB，目測呈蘭色或鄰苯二胺（OPD，呈現黃色）。在已包被抗β-hCG亞基McAb的聚乙烯反應板微孔中加最適濃度（說明書指定）酶標記抗β-hCG亞基McAb 0.1ml，立即加尿或血清0.1ml。輕輕抖動反應板，或于混勻器上混勻30s，再置37℃20min。甩去孔內反應物，以蒸餾水沖洗6次，晾干。加底物溶液0.1ml，室溫放置5min，觀察。藍色（底物為TMB-H2O2時）或黃色（底物為OPD-H2O2時）為陽性，無色為陰性。如需定量，可同時做一標準系列濃度，結果以IgC對吸光度值作圖，待測樣本濃度可從曲線中查出。

2 結果

HCG<5mIu/mL18例，HCG 5.1～2000mIu/ml58例，HCG2001～5000 mIu/ml23例，5001～1000 mIu/mL1例。

3 討論

HCG檢測的方法早期應用生物學檢測，目前正被簡便、快速、靈敏、特異性強的免疫學方法代替。膠乳凝集抑制試驗（LAT）以HCG作為抗原注入兔子體內，使其產生相應抗體，當這種抗體與HCG抗原相遇時發生免疫反應，但此反應不能為肉眼所見。利用化學方法將HCG抗原交聯在聚苯乙烯膠乳顆粒上，制成HCG膠乳抗原，此膠乳抗原與HCG抗體結合，產生肉眼可見的膠乳顆粒狀凝集。本法操作簡便、價格便宜、快速（5min）、試劑易得[2]。但因靈敏度低（100～500IU/L）、特異性不高而趨淘汰。單克隆雙抗體酶免疫法首先將β-HCG單抗包被聚乙烯酶標板小孔底部，加入被檢尿液（或HCG的標準品），被檢樣品中HCG抗原與包被在小孔底部的抗體結合，再加入特異性的酶標β-HCG抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。洗去過量的未結合酶標抗體，加入酶作用底物及顯色劑顯色，顏色的深淺與被檢尿液中HCG含量成正比。此法靈敏度（20～50IU/L）高，可定量，臨床常用，適合批量檢測。不足是操作較復雜，所需時間較長。單克隆抗體膠體金標記免疫層析法，在試帶（纖維素膜）的特定位置，分別包被羊抗鼠IgG抗體、羊抗人HCG抗體，呈上下兩條線排列；另外試帶上還含有均勻分布的膠體金標記人β-HCG單抗、膠體金標記的鼠IgG抗原。檢測時將試帶浸入被測尿液后迅速取出，由于層吸作用，尿中的HCG抗原先與膠體金標記的人β-HCG單抗結合，移行至特定位置即羊抗人HCG抗體檢測線時，形成金標記β-HCG單抗-β-HCG抗原—羊抗人HCG抗體的雙抗體夾心式復合物，試帶即顯1條紫紅色線為陽性；同時金標記鼠IgG抗原隨尿上行至羊抗鼠IgG抗體時，形成金標記鼠IgG抗原與羊抗鼠IgG抗體復合物，試帶也顯1條紫紅色線，為陰性對照即質控線。本法簡便快速（1～15min）、特異性強、靈敏度高（10～25 IU/L），可半定量，在受精后7～10d即可作出診斷，故臨床應用廣泛。試帶顯紅色是由于膠體金的作用，膠體金是氯化金與還原劑反應形成的一種膠體顆粒，其表面帶有負電荷，能吸附帶正電荷蛋白質，被吸附在膠體金顆粒表面的蛋白質（抗體）活性不會改變，它的顏色隨顆粒大小呈紅色到紫色變化[3]。放射免疫用閃爍計數器測定，靈敏度可達<21U/L，如果用于血清中HCG含量的測定，其結果比尿液標本更準確、更穩定。由于放射免疫測定需放射性核素標記，且放射性核素易污染環境，所需時間長（2h），本法只適用于研究工作，臨床不常用。

妊娠后尿液hCG濃度增高，一般妊娠后35～40天時，hCG濃度可達到200ng/L以上，常用的尿hCG檢查即可得到陽性結果。滋養層細胞腫瘤如葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮細胞癌患者尿中hCG含量明顯高于正常孕婦；滋養層細胞腫瘤治療后，尿內hCG含量明顯下降。流產診斷和監察，自然或非自然原因終止妊娠后，檢測結果仍然提示弱陽性，先兆流產和不全流產呈陽性。完全流產呈陰性。診斷異位妊娠和宮外孕：hCG多為陽性，宮外孕破裂后大部分患者轉為陰性。非滋養層腫瘤如畸胎瘤、睪丸間質細胞癌、卵巢癌、子宮頸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌同樣會引起hCG濃度增高，因此檢測結果必須由醫生綜合其他臨床癥狀及其他實驗室指標后方可進行綜合分析鑒別。

采集hCG陽性且尿蛋白定性為陰性的尿液3～4份，混合后存放在4℃冰箱內保存過夜。取出后離心，取上清液以化學交聯抗原和配套的抗血清做稀釋試驗，測定hCG的效價。按所測定效價低1倍的稀釋度為準，以生理鹽水稀釋尿液到此濃度，作為陽性對照質控物。每批試驗應該設定陽性和陰性對照，對照試驗達到預期的結果時才能使用該批號尿試帶，進行檢測和簽發報告。陽性對照也可采用質控液。每份尿液最好做雙份檢查，即以原濃度尿液和倍量稀釋后的尿液同時檢查，兩者同為陽性時為真陽性，可發結果；原濃度陽性，稀釋尿液為陰性時，可能為弱陽性反應或促黃體生成激素（LH）增高等引的假陽性反應。

【參考文獻】

[1] 郎江明.臨床免疫診斷學.廣州：廣東科學技術出版社，2003，497-498.

[2] 張迎春，賈翠英，王娟.血清β-HCG檢測異位妊娠的診斷意義.放射免疫學雜志，2001，14（6）：167.

[3] 林敏.人絨毛膜促性腺激素檢測及臨床應用.檢驗醫學與臨床，2009，6：281-282.