范芳芳++張宗豪++徐成體
摘要:室內測定了不同濃度S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜不同齡期幼蟲的侵染效果,結果表明,線蟲侵染劑量、侵染時間對致死小云斑鰓金龜幼蟲具有重要意義。該線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的感染活性較高,致死時間主要集中在48 h內,當線蟲濃度為3 000 IJs/mL時,線蟲對1齡小云斑鰓金龜幼蟲的致死率可達92.86%;該線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率較低,當線蟲濃度為2 500 IJs/mL時,致死率僅為40%,當線蟲劑量為3 000、3 500 IJs/mL時,該線蟲對1齡幼蟲的致死率均極顯著高于3齡幼蟲。通過提高線蟲用量、延長致死時間,在小云斑鰓金龜幼蟲1齡期可達到預期的防治效果。
關鍵詞:線蟲;小云斑鰓金龜;致死率
中圖分類號: S433.5文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2015)09-0162-02
蠐螬(Polyphylla gracilicornis)為危害青海省西寧地區草坪的主要地下害蟲,主要咬食草坪草根部,導致草坪草枯黃,且草坪地下害蟲蠐螬的隱蔽性很強,使用化學藥劑往往難以取得理想的防治效果,而且容易導致“3R”問題的產生,加上人們對草坪開發利用強度越來越大,極大地限制了化學藥劑的使用。西寧地區蠐螬危害極為嚴重,最高可達37頭/m2,主要以小云斑鰓金龜(Polyphylla gracilicornis)幼蟲為主,S. longicaudum X-7線蟲是安全、高效的生物制劑,能專性寄生并快速殺死昆蟲,目前在我國南方地區已將其成功應用于草坪地下害蟲的防治[1-3]。本研究探討S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜幼蟲的致病力,旨在為開發利用草坪提供依據。
1材料與方法
1.1供試線蟲
由廣東省昆蟲研究所提供。
1.2供試害蟲
小云斑鰓金龜幼蟲采集于西寧地區周邊草坪地,選用蟲齡大小一致的小云斑鰓金龜幼蟲。
1.3供試線蟲的制備與計量
將貯存S. longicaudum X-7線蟲的海綿塊取出后放入燒杯中,用滅菌水反復沖洗,得到線蟲稀釋液。用微量取樣器吸取線蟲液25 μL,滴于培養皿上,鏡檢解剖鏡視野內的線蟲數,計算線蟲濃度。
1.4方法
1.4.1不同侵染劑量對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的毒力測定制備S. longicaudum X-7線蟲梯度濃度溶液,濃度分別設置為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL。
選取蟲齡一致的 1齡幼蟲,使用硬塑料杯,每杯底墊2層中速濾紙,滴加無菌水使濾紙保持濕潤,每孔放入1頭1齡幼蟲,并放入數塊馬鈴薯,每孔滴加1 mL相應濃度S. longicaudum X-7線蟲至蟲體上,每處理 10頭 幼蟲,重復3次,設置清水對照。24 h觀察1次,統計死蟲數目,及時補充更換飼料。飼養條件:溫度為(25± 2) ℃,相對濕度為80%~85%,無光照。連續觀察144 h,記錄幼蟲的死亡數目。
1.4.2不同侵染劑量對3齡幼蟲的毒力測定制備線蟲梯度濃度液配,濃度設置為1 000、1 500、2 000、2 500、3 000 IJs/mL。選取蟲齡一致的 3齡幼蟲,使用硬塑料杯,每孔墊2層中速濾紙,滴加無菌水使濾紙保持濕潤,每孔放入1頭3齡幼蟲,并放入數塊馬鈴薯,每孔滴加1 mL相應濃度S. longicaudum X-7 線蟲至蟲體上,每處理 5頭幼蟲,重復3次,設置清水對照,及時補充更換飼料。飼養條件:(25± 2) ℃,相對濕度為80%~85%,無光照。連續觀察10 d,觀察并記錄幼蟲的死亡數目。
2結果與分析
2.1S. longicaudum X-7線蟲不同侵染劑量對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死效果
由表1可知,144 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL 時,S. longicaudum X-7對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的較正死亡率分別為50.00%、53.58%、82.14%、9286%。線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率差異不顯著;線蟲劑量為 3 000、3 500 IJs/mL時,S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率差異不顯著,但顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL 時的致死率。當線蟲劑量大于 3 000 IJs/mL 時,線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲具有很高的致死率。
由圖1可知,24 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL 時,S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率分別為20.69%、27.59%、55.18%、4828%,其中3 000 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率極顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL時的致死率。48 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率分別為37.93%、41.38%、72.41%、82.76%,其中線蟲劑量為3 000、3 500 IJs/mL 時的致死率極顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL 時的致死率。144 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率分別為50.00%、53.58%、82.14%、92.59%,其中線蟲劑量為3 000、3 500 IJs/mL時小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率極顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL時的致死率??梢娫诟鱾€時間段線蟲濃度大對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率也較高,線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死時間主要集中在48 h之內。
2.2S . longicaudum X-7線蟲不同侵染劑量對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死效果
由表2可知,第10天線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500、4 000 IJs/mL時,S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為26.27%、26.67%、33.33%、40.00%、40.00%。線蟲劑量為3 000、3 500、4 000 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率顯著高于線蟲劑量為 2 000、2 500 IJs/mL時線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率,且隨著線蟲濃度的增加,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率有所提高,直至線蟲濃度為3 500 IJs/mL時,致死率最高達40%,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率不再隨濃度的增加而提高。S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率比較低,即S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的侵染力較低。
由圖2可知,當第2天線蟲劑量為1 000、2 000、3 000 IJs/mL 時,S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為13.33%、26.67%、26.67%,線蟲劑量為2 000、3 000 IJs/mL時線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率高于線蟲劑量為1 000 IJs/mL時的致死率,差異不顯著。第6天線蟲劑量為1 000、2 000、3 000 IJs/mL時,對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為26.67%、33.33%、40.00%,線蟲劑量為3 000 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率高于線蟲劑量為2 000 IJs/mL時的致死率,線蟲劑量為2 000 IJs/mL時線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率高于線蟲劑量為 1 000 IJs/mL 時的致死率,但差異不顯著。第10天當線蟲劑量為1 000、2 000、3 000 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為26.70%、40.00%、4000%,線蟲劑量為3 000、2 000 IJs/mL 時線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率極顯著高于線蟲劑量為1 000 IJs/mL時的致死率。第2—6天,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率呈緩慢提高趨勢,第6—10天,線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率幾乎不再提高。
2.3S. longicaudum X-7線蟲對不同齡期小云斑鰓金龜幼蟲的侵染效果
由圖3可知,線蟲劑量為2 000 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲、3齡幼蟲的致死率分別為53.33%、26.67%。當
線蟲劑量為2 500 IJs/mL時,S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡、3齡幼蟲的致死率分別為56.67%、26.67%,當線蟲劑量為3 000 IJs/mL時,線蟲對1齡、3齡幼蟲的致死率分別為83.33%、40.00%,其中線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲的致死率極顯著高于3齡幼蟲。當線蟲劑量為3 500 IJs/mL時,線蟲對小云斑鰓1齡、3齡幼蟲的致死率分別為93.33%、40.00%,其中線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲的致死率極顯著高于3齡幼蟲,可見隨著小云斑鰓金龜幼蟲蟲齡的增長,其抵抗線蟲的能力也在逐漸增強,說明齡期是影響線蟲侵染小云斑鰓金龜幼蟲的重要因素。
3結論與討論
本研究測定了不同濃度S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡、3齡幼蟲的致死效果,結果表明,增大線蟲濃度或延長施用時間對小云斑鰓金龜1齡、3齡幼蟲都會產生更高的致死率。劉樹森研究表明,不同線蟲品系對不同齡期線蟲具有不同的侵染效果[4]。本研究結果表明,S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的侵染率最高可達92.86%,極顯著高于對3齡幼蟲的侵染率,且線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲的致死率主要在48 h內,之后致死率變化緩慢。線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率較低,第10天濃度為 3 500 IJs/mL 時,致死率最高可達40%,當線蟲濃度增大到 4 000 IJs/mL 時,致死率不再變化,致死效果不明顯,因此選用線蟲防治時應根據小云斑鰓金龜幼蟲的生物學特性在1齡期進行防治。
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