二色波羅蜜對血瘀模型大鼠血液流變學的影響

□盧海嘯，馮春鋒，黃美玲，王艷華，何小芳

（1. 玉林師范學院 生命科學與技術學院，廣西 玉林，537000；2. 玉林市婦幼保健院，廣西 玉林，537000）

二色波羅蜜對血瘀模型大鼠血液流變學的影響

□盧海嘯1，馮春鋒2，黃美玲1，王艷華1，何小芳1

（1. 玉林師范學院 生命科學與技術學院，廣西 玉林，537000；2. 玉林市婦幼保健院，廣西 玉林，537000）

目的：觀察二色波羅蜜提取物對血瘀模型大鼠血液流變學指標的影響.方法：采用持續力竭性游泳血瘀模型，檢測全血黏度、血漿黏度、紅細胞聚集指數、血小板數、TT、PT、APTT、FIB，觀察二色波羅蜜提取物對血瘀模型大鼠血液流變學指標的影響.結果：與模型組相比，二色波羅蜜提取物能顯著改善血液流變學指標.二色波羅蜜提取物能降低全血黏度、血漿黏度、紅細胞聚集指數、血小板數、TT、FIB ，提高PT、APTT.結論：二色波羅蜜提取物具有改善血液流變學指標的作用，其活血化瘀的有效部位為乙酸乙酯提取物.

二色波羅蜜；血液流變學；有效部位

二色波羅蜜Artocarpus styracifolius Pierre為?？疲∕oraceae）波羅蜜屬（Artocarpus）植物，具有祛風除濕、舒筋活血的功效[1]，臨床上主要用于風濕性關節炎，類風濕性關節炎、腰肌勞損、風濕痹痛、偏癱、跌打損傷等[2，3].初步研究發現，其化學成分主要為黃酮類化合物[4-7].現代研究顯示，二色波羅蜜具有抗抑郁[8]，抗瘧原蟲、錐蟲、細胞毒[5]，抑制中性粒細胞爆發[6]等活性.為了明確二色波羅蜜的傳統功效——活血化瘀的作用機制，本實驗檢測了二色波羅蜜提取物對血瘀模型大鼠血液流變學指標的影響.

1 材料與儀器

1.1 動物 SD大鼠130只，體質量為（220±10）g，雄性，清潔級，購于廣西醫科大學實驗動物中心.許可證號：SCXK桂2003-000.

1.2 藥物和試劑 二色波羅蜜采于廣西岑溪市吉太鄉.原植物經廣西林業勘查設計院鐘業聰高級工程師鑒定，為?？疲∕oraceae）波羅蜜屬（Artocarpus）植物二色波羅蜜Artocarpus styracifolius Pierre.采后粉碎，陰干備用；75 %消毒酒精、95 %乙醇（分析純）購于天津百世化工有限公司；0.9 %氯化鈉注射液（A130724H、貴州科倫藥業有限公司）；復方丹參片（130603、鄭州瑞龍制藥股份有限公司）.

1.3 儀器 MVIS-2035全自動血流變分析儀（重慶天海醫療設備有限公司），7180全自動生化分析儀（日本日立株式會社），XE-5000血液分析儀（日本sysmex公司），RE-2000A旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠），SHZ-D（III）循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司），電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）等.

2 方法

2.1 提取物的制備 稱取二色波羅蜜的干燥藥材粉末適量，用95 %乙醇熱回流提取2 h，過濾，得到二色波羅蜜提取液，重復3次，合并提取液，減壓濃縮，得到浸膏狀的二色波羅蜜粗提取物，取二色波羅蜜粗提取物加入適量蒸餾水，用超聲波助溶，成混懸液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓濃縮得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物，備用.使用時用生理鹽水配制成混懸液.

2.2 二色波羅蜜活性部位的篩選

2.2.1 動物分組與給藥 采用單純隨機法進行分組（空白對照組、模型組、丹參片組、石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、正丁醇提取物組、水提取物組），每組10只.除空白對照組外，其余各組均進行造模.采用灌胃給藥，1次/d，給藥劑量：丹參片組100 mg·kg-1，其余各給藥組200 mg·kg-1，空白對照組、模型組給予等容生理鹽水.

2.2.2 血瘀模型的制作 根據“勞則氣耗”的中醫學理論，選擇游泳力竭法[9]制備大鼠氣虛血瘀狀態.先適應性游泳訓練3天，然后每天力竭性游泳1次，持續21天.

2.2.3 血液流變學指標的測定[10]于實驗第21天，各組大鼠以10 %水合氯醛，按0.35 mg·kg-1體重腹腔注射麻醉后腹主動脈采血.檢測血液流變性、紅細胞流變性及凝血相關血液學指標.包括全血黏度、血漿黏度、紅細胞聚集指數、血小板數、凝血時間（TT）、凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APPT）、纖維蛋白原（FIB）含量.

2.3 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物的量效關系 將SD大鼠隨機分為6組：空白對照組和模型組(灌胃等容生理鹽水)；陽性對照組（按100 mg·kg-1灌胃丹參片溶液）；二色波羅蜜乙酸乙酯提取物低、中、高劑量組（分別灌胃給藥100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、300 mg·kg-1）.實驗方法同“2.2.2”、“2.2.3”項. 2.4 數據處理 所有數據以表示，數據統計分析采用SPSS17.0 for windows統計軟件進行分析，實驗結果采用單因素方差分析法進行分析，組間比較用t檢驗.P＜0.05為有統計學意義.

3 結果與分析

3.1 二色波羅蜜活性部位的篩選

3.1.1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度 結果如表1所示，與空白對照組比較，模型組的全血黏度和血漿黏度均增加（P＜0.01）.與模型組相比，各組全血黏度均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）.與模型組比較，各組血漿黏度差異均有統計學意義（P＜0.01），尤其是乙酸乙酯提取物組和水提取物組.

表1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

表1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

與空白對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比，#P＜0.05，##P＜0.01.

全血黏度（mpas）血漿黏度（mpas）高切200/S中切100/S低切3/S空白對照組等容6.28±0.18##7.04±0.20##12.50±0.28##1.49±0.06##模型組等容9.68±0.19**9.82±0.54**14.33±0.92**1.66±0.03**丹參片組1006.02±0.14##6.83±0.18##12.93±0.57#1.56±0.03*##石油醚提取物組2006.12±0.05##6.83±0.24*##12.09±0.90##1.55±0.03*##乙酸乙酯提取物組2005.66±0.24**##6.35±0.28**##11.92±0.43##1.48±0.02##正丁醇提取物組2006.13±0.17##6.95±0.21##13.12±0.75#1.54±0.01##水提取物組2005.65±0.22**##6.42±0.28##12.91±0.61##1.49±0.02##組別劑量（mg·kg-1）

3.1.2 各組大鼠紅細胞聚集指數 結果見表2，與空白對照組比較，模型組和乙酸乙酯組有統計學意義（P＜0.01）.與模型組相比，各組均有統計學意義（P＜0.01），尤其是二色波羅蜜乙酸乙酯提取物組（P＜0.01）.

表2 各組大鼠紅細胞聚集指數比較（±s）

表2 各組大鼠紅細胞聚集指數比較（±s）

與空白對照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）紅細胞聚集指數空白對照組等容8.48±0.39##模型組等容12.39±0.34**丹參片組1008.05±0.31##石油醚提取物組2007.96±0.58##乙酸乙酯提取物組2007.66±0.37**##正丁醇提取物組2008.72±0.27##水提取物組2008.66±0.39##

3.1.3 各組大鼠血小板數 如表3所示，與空白對照組比較，除乙酸乙酯提取物組外，各組均有統計學意義（P＜0.01）.與模型組比較，各組均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01），其中乙酸乙酯提取物組最接近正常值（P＜0.01）.

表3 各組大鼠血小板數比較（±s）

表3 各組大鼠血小板數比較（±s）

與空白對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比，#P＜0.05，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）血小板數（/L）空白對照組等容653.25±34.60##模型組等容971.67±80.87**丹參片組100833.33±24.95**##石油醚提取物組200809.33±46.82**##乙酸乙酯提取物組200690.50±53.57##正丁醇提取物組200855.67±27.02**#水提取物組200765.75±85.42*##

3.1.4 各組大鼠TT、PT、APTT及FIB 測定結果 結果見表4，與空白對照組比較，模型組TT、PT、APTT、FIB的差異有統計學意義（P＜0.01）.與模型組比較，各組的TT、PT、APTT、FIB均有統計學意義（P＜0.01）.尤其是乙酸乙酯提取物組（P＜0.01）.表中顯示模型組的TT時間延長可能是由于PT、APTT降低所致.

表4 各組大鼠TT、PT、APTT、FIB測定結果比較（±s）

表4 各組大鼠TT、PT、APTT、FIB測定結果比較（±s）

與空白對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）TT (s)PT (s)APTT (s)FIB (g/L)空白對照組等容22.15±0.35##11.70±0.34##27.35±0.70##1.53±0.34##模型組等容28.27±0.38**9.50±0.17**20.60±0.35**3.49±0.53**丹參片組10024.20±0.26**##10.90±0.30##24.47±0.50**##2.32±0.44**##石油醚提取物組20026.10±0.26**##10.57±0.15##24.53±0.31**##2.41±0.04**##乙酸乙酯提取物組20024.87±0.84**##10.93±0.39##26.53±0.40##2.10±0.43*##正丁醇提取物組20024.63±0.40**##10.90±0.50*##24.43±0.59**##2.27±0.14*##水提取物組20025.05±0.29**##10.53±0.37**##24.18±0.99**##2.43±0.21**##

3.2 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物量效關系

3.2.1 各組大鼠全血黏度及血漿黏度

如表5所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物對血漿黏度的影響隨著劑量的增大而增大（P＜0.01），呈現出一定的量效關系.

表5 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

表5 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠全血黏度及血漿黏度比較（±s）

與空白對照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）全血黏度（mpas）血漿黏度（mpas）高切200/S中切100/S低切3/S空白對照組等容6.67±0.13##7.47±0.14##14.25±0.20##1.58±0.04##模型組等容7.60±0.12**8.77±0.15**15.70±0.24**1.76±0.05**丹參片組1006.48±0.13##7.27±0.21##14.63±0.32##1.56±0.03##低劑量組1005.76±0.22**##6.67±0.16**##12.07±0.33**##1.52±0.06##中劑量組2005.36±0.12**##6.25±0.25**##10.68±0.14**##1.43±0.08**##高劑量組3005.16±0.14**##5.81±0.10**##9.95±0.24**##1.25±0.05**##

3.2.2 大鼠紅細胞聚集指數

如表6所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物隨著劑量的增大，其紅細胞聚集指數的呈現下降的趨勢（P＜0.01）.

表6 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠紅細胞聚集指數比較（±s）

表6 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠紅細胞聚集指數比較（±s）

與空白對照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）紅細胞聚集指數空白對照組等容9.28±0.10##模型組等容10.55±0.14**丹參片組1009.63±0.13**##低劑量組1008.36±0.06**##中劑量組2006.75±0.17**##高劑量組3006.24±0.19**##

3.2.3 大鼠血小板數

如表7所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物隨著劑量的增大，血小板數呈現下降的趨勢（P＜0.01）.

表7 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠血小板數比較（±s）

表7 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠血小板數比較（±s）

與空白對照組比，**P＜0.01；與模型組比，##P＜0.01.

組別劑量（mg·kg-1）血小板數（/L）空白對照組等容532.00±65.39##模型組等容1130.00±39.75**丹參片組100770.00±45.76**##低劑量組100804.75±42.95**##中劑量組200664.00±33.97**##高劑量組300543.00±41.06##

3.2.4 大鼠TT、PT、APTT及FIB 測定結果

如表8所示，二色波羅蜜乙酸乙酯提取物對TT、PT、APTT、FIB的影響（P＜0.01），呈現出一定的量效關系.

表8 二色波羅蜜乙酸乙酯提取物大鼠TT、PT、APTT、FIB測定結果比較（x±s）

4 討論

本實驗采用血液流變學的指標觀察二色波羅蜜不同提取物對血瘀大鼠的影響.全血粘度是一個綜合性指數，它是血漿粘度、紅細胞變形指數和聚集能力、血小板流變特性的綜合表現.全血粘度增高，反映血液的“粘”；血漿粘度增高，反映血液的“凝”；紅細胞聚集指數增高，反映血液的“聚”.如果紅細胞剛性增高、聚集性過強，則此時紅細胞會聚集成串成團，流動困難，使血粘度增高.本實驗以二色波羅蜜提取物應用于血瘀模型大鼠，觀測到其使大鼠血液粘、凝、聚狀態明顯改善，提示該藥能改善血瘀模型大鼠異常的血液流變性，這在一定程度上證實該藥具有較強的活血化瘀作用，而改善血液流變性可能是其活血化瘀機制之一.從綜合各指標的情況來看，二色波羅蜜的有效部位應該是二色波羅蜜的乙酸乙酯提取物，且二色波羅蜜的乙酸乙酯提取物呈現一定的量效關系.

本實驗研究了二色波羅蜜對改善血瘀模型大鼠血液流變學各項指標的作用，證實了其活血化瘀的藥效，為進一步研究其活血化瘀的具體作用機制及有效成分，從而最終將其開發成預防和治療血瘀疾病的藥物提供實驗依據. ■

Abtract: Objective: To observe the hemorheology effect of extracts from Artocarpus styracifolius Pierre on the blood stasis model rats. Methods: The whole blood viscosity, plasma viscosity, red cell assembling index, platelet number, TT, PT, APTT and FIB were tested by continual exhaustive swimming model rats. Results: Compared with the model group, the index of hemorheology was improved by the extracts of Artocarpus styracifolius Pierre. The whole blood viscosity, plasma viscosity, red cell assembling index, platelet number, TT and FIB were reduced by the extracts from Artocarpus styracifolius Pierre. The PT, APTT were increased by extracts from Artocarpus styracifolius Pierre. Conclusion: The extracts from Artocarpus styracifolius Pierre had effect of improving index of hemorheology and the active fraction came from the ethyl acetate extracts from Artocarpus styracifolius Pierre.

Key woeds: Artocarpus styracifolius Pierre; hemorheology; active fraction【參考文獻】

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【責任編輯 謝文?！?/p>

The Hemorheology Effect of Artocarpus styracifolius Pierre on the Blood Stasis Model Rats

LU Hai-xiao1，FENG Chun-feng2，HUANG Mei-ling1，WANG Yan-hua1，HE Xiao-fang1
(1. Yulin Normal University, Yulin, Guangxi 537000; 2. Yulin Maternal and Children Health Hospital, Yulin, Guangxi 537000)

R285.5

A

1004-4671（2015）02-0065-05

2014-03-01

廣西教育廳科研項目（2013YB203）。

盧海嘯（1974～），男，漢族，廣西百色人，玉林師范學院生命科學與技術學院副教授，博士，研究方向：天然活性物質。