肝細胞癌病變肝臟血管鑄型標本的制作及意義

·論著·

肝細胞癌病變肝臟血管鑄型標本的制作及意義

張文輝,莫木瓊,聶釗銘,鐘覺民,羅燦嶠

(中山大學附屬第一醫院,廣州510085)

摘要：目的制作有肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本，為科研和教學了解肝細胞癌的生長提供形態學依據。方法將肝細胞癌患者手術切除的新鮮成人肝組織用10%醋酸生理鹽水插管沖洗，徹底去除肝臟血管內的血液，分別用混合紅色、藍色和黃色油畫顏料的過氯乙烯-自凝牙托粉材料填充劑依次灌注肝固有動脈、肝門靜脈和肝靜脈，通過聚合反應塑化成型，經插管→灌注→腐蝕→沖洗→修整→裝瓶密封,制成有肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本進行觀察。結果肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本能清晰顯示肝門靜脈、肝動脈、肝靜脈、肝腫瘤及其周圍血管分布。顯示的血管充盈飽滿，粗細、疏密合理，色澤鮮艷，立體感強，精致美觀。結論 肝細胞癌病變的肝臟可制成血管鑄型標本，制成的標本能直觀顯示肝細胞癌病變的肝臟內血管、腫瘤區域及其周圍血管分布。

關鍵詞：肝腫瘤；血管；鑄型；標本

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.001

中圖分類號：R735.7文獻標志碼：A

基金項目：國家自然科學青年

作者簡介：第一 張文輝(1980-)，男，技師，主要研究方向為病理解剖技術與組織模型制作。E-mail:448596761@qq.com

作者簡介：通信羅燦嶠(1971-)，男，副主任技師，主要研究方向為病理解剖技術與組織模型制作。E-mail:13650832351@163.com

收稿日期：(2015-07-11)

Preparation of vascular corrosion casting mould specimen of liver

with tumor and its clinical significance

ZHANGWen-hui,MOMu-qiong,NIEZhao-ming,ZHONGJue-min,LUOCan-qiao

(TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat-SenUniversity,Guangzhou510085,China)

Abstract:ObjectiveTo prepare the vascular corrosion casting mould specimen of liver with hepatocellular carcinoma and to provide reliable morphological evidence for clinical activity, teaching and scientific research of liver tumor. MethodsA fresh hepatocellular carcinoma specimen obtained by surgical resection was injected with 10% acetic acid saline to thoroughly remove blood within the liver. Then the hepatic artery, hepatic portal vein and hepatic vein were perfused with mixtures of perchlorovinyl resin and polymethyl methacrylate resin with red, blue and yellow coloring agent, respectively. Vascular corrosion casting mould specimen of the liver with primary tumor was obtained by intubation, perfusion, corrosion, flushing, trimming and sealing to the container. ResultsThe method could clearly showed the hepatic artery, hepatic portal vein and hepatic venous system and the distribution of blood vessels in and around the tumor area. The vessels were full filling, in reasonable size and density. Meanwhile, they had bright color, a great three-dimensional sense with delicacy. ConclusionThe specimen of hepatocellular carcinoma can be made into vascular corrosion casting mould and this method can display its blood vessel, tumor and peripheral vascular distribution.

Key words: liver neoplasms; blood vessels; casting mould; specimen

血管鑄型法是通過向器官的某些血管灌注可塑材料,使其在血管腔內塑化成型,然后用強酸、強堿或自然腐蝕等方法,將器官的其他組織除去,保留器官血管的形態和分布的器官模型制作方法。血管鑄型標本在顯示器官內部血管方面有獨到之處。肝臟血管鑄型標本能清晰地顯示肝門靜脈、肝動脈和肝靜脈的形態、位置及之間的相互關系。但目前尚無相關文獻報道肝細胞癌病變肝臟血管鑄型標本的制作。2013年6月～2015年6月，我們采用有肝細胞癌病變的肝臟制成血管鑄型標本，了解肝內血管和腫瘤區域及腫瘤周圍血管的分布情況，為臨床、科研和教學提供可靠的形態學依據。

1材料與方法

1.1材料手術切除的新鮮完整成人肝臟1個，CT定出腫瘤位置，細針穿刺活檢，病理學檢查證實為肝細胞癌。肝臟的使用經中山大學附屬第一醫院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書，對其手術切除的肝組織使用和用途無異議。乙酸乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯購自天津市富宇精細化工有限公司；過氯乙烯、鹽酸購自廣州化學試劑一廠；自凝牙托粉、自凝牙托水購自上海新世紀牙科材料有限公司；黃色、藍色和紅色油畫顏料購自上海實業馬利有限公司。特制玻璃插管3支，止血鉗數把，手術剪刀數把，帶蓋塑料桶2個，搪瓷大托盤1個，特制密封有機玻璃容器1個。

參考文獻1.2肝動脈、肝門靜脈及肝靜脈填充劑的調配[1]方法，將20 g過氯乙烯充分溶解于100 mL乙酸乙酯中，再加入3 mL增塑劑，充分混合，加入5 mL的紅色油畫顏料。將上述物質均勻調和，充分溶解后備用作肝動脈填充劑。將70 g自凝牙托粉溶于70 mL的自凝牙托水中，再加入25 mL鄰苯二甲酸二丁酯和5 mL的黃色油畫顏料，將上述物質均勻調和，充分溶解后備用作肝門靜脈填充劑。將80 g自凝牙托粉溶于80 mL自凝牙托水中，再加入25 mL鄰苯二甲酸二丁酯和5 mL的藍色油畫顏料，將上述物質均勻調和，充分溶解后備用做肝靜脈填充劑。

1.3肝動脈、肝門靜脈及肝靜脈填充劑的灌注填充劑充分攪拌均勻后立即灌注。根據不同的臟器和灌注目的不同，選擇不同的灌注顏色和灌注量；灌注量的多少會影響臟器血管枝干的疏密。本實驗肝動脈填充紅色填充劑60 mL，肝靜脈填充藍色填充劑100 mL，肝門靜脈填充黃色填充劑90 mL。①插管：將肝臟的表面和大血管腔充分沖洗干凈,灌注前，徹底去除血管內的血液和水分，保證鑄型效果。分離出肝門靜脈、肝動脈和肝靜脈開口，插上大小相適應的與管腔相配的特制玻璃管，膽道不予插管。②灌注：插管固定后，將肝臟放入注滿水的塑料桶中，用紗布將肝托起，并將紗布固定于塑料桶邊緣，使肝臟漂浮于水中，借助水的浮力，防止肝臟受壓變形。然后用50 mL的注射器將調配好的黏稠度適宜的混有紅色油畫顏料的過氯乙烯-自凝牙托粉材料填充劑灌注到肝動脈。灌注時，壓力要適中，保證填充劑在管道內的移動和滲透速度，隔4 h補注1次，共2次。同時用10%的中性甲醛水溶液灌注門靜脈、肝靜脈，直至肝臟由軟到硬、由紅褐色變為灰白色為止。2 d后，再用混有藍色油畫顏料的過氯乙烯-自凝牙托粉材料的填充劑灌注肝靜脈，用混有黃色油畫顏料的過氯乙烯-自凝牙托粉材料的填充劑灌注門靜脈，灌注壓力足以讓肝臟表面飽滿即可。灌注完畢后，將肝臟放置清水中浸泡24 h以上，讓填充劑充分吸水反應凝固。牙托粉凝固需1～2 h，過氯乙烯凝固則需24 h以上。

1.4腐蝕、沖洗將灌注好的肝臟放入盛有足量25%鹽酸的塑料桶中加蓋腐蝕，1周后取出，自來水充分沖洗，徹底沖洗干凈黏附于血管枝上的殘余肝組織。沖洗時，按鑄型標本血管支的粗細程度調節水壓，將黏附于血管枝上的殘余組織沖洗干凈。如果未腐蝕徹底，可將其重新浸入或更換新的鹽酸液再浸泡→腐蝕→沖洗，沖洗與腐蝕可交替進行，徹底將其他組織腐蝕沖洗干凈。腐蝕和移動的過程動作要輕柔，以免將肝臟鑄型標本的管腔枝扯斷。腐蝕、沖洗完畢后，用肥皂水浸泡鑄型標本48 h以上，然后再用自來水充分泡洗，防止鑄型標本變脆和變色。

1.5修整鑄型標本沖洗完畢后要修整，用酒精燈燒熱鑷子或用剪刀剔除從破漏部位漏出的填充劑凝塊。鑄型標本修整的好壞直接影響其外觀和質量。

1.6封裝 修整完畢后，根據鑄型標本的外形和尺寸大小，制作合適的有機玻璃容器，待標本干燥固定成型后，移入有機玻璃容器中適當固定，用10%的甲醛水(蒸餾水配制)溶液注滿容器，最后封口密封。

2結果

2.1肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本形態 制成的肝臟血管鑄型標本血管充盈飽滿，粗細、疏密合理，色澤鮮艷，立體感強，精致美觀，可直觀顯示腫瘤病變的肝組織內血管分布和肝腫瘤區域及腫瘤周圍血管的分布。制成的有肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本見圖1，圖中清晰可見肝靜脈、門靜脈、肝動脈。肝右葉下段可見2 cm×2 cm×1 cm,右葉上段2 cm×1 cm×1 cm、左葉內段1 cm×1 cm×1 cm大小紅色結節，是肝腫瘤病變區域；肝右葉下段可見兩粗大的肝靜脈吻合支，肝靜脈間在肝內存在部分細小的交通支實屬正常，但本例如此粗大的交通支較罕見。

2.2肝腫瘤穿刺活檢、HE染色結果 CT定位，細針穿刺活檢，HE染色，400倍鏡下見肝細胞彌漫水樣變性，部分脂肪變性，部分肝細胞層次增多，細胞極具明顯的異型性，細胞核增大、深染。病理學檢查證實為肝細胞癌，見圖2。

圖1　有肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本

圖2　肝腫瘤穿刺活檢、HE染色結果(×400)

3討論

近年來，由于科學技術的高速發展,出現了數字減影血管造影技術及精確的腫瘤定位技術， 組織器官血管的三維立體重建技術水平不斷提高，人們對組織器官的血管分布及腫瘤的研究更加方便。但這些技術不可能完全取代組織及器官血管鑄型技術，組織及器官血管鑄型技術經40多年發展,已臻完善和成熟,其可更加直觀地顯示有肝細胞癌病變的肝臟血管和腫瘤區域及腫瘤周圍的血管。為肝細胞癌病變的教學和科學研究提供可靠的、直觀的形態學依據。血管鑄型標本在顯示器官內部血管方面有獨到之處[2]。

本實驗利用過氯乙烯-自凝牙托材料填充劑快速成型灌注術，經插管→灌注→腐蝕→沖洗→修整→裝瓶密封制成的有肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本，能清晰顯示肝靜脈、門靜脈、肝動脈、肝細胞癌病變區域。肝細胞癌病變肝臟血管鑄型標本的質地、彈性、顏色、光澤度等均達到理想效果。過氯乙烯-自凝牙托材料填充劑為一次性快速成型鑄型劑，配制和灌注要及時快速，保證鑄型效果[3]。肝細胞癌血管分布稠密、管徑細小，彎曲成團，灌注難度大，必須控制好填充劑的黏稠度和灌注量及填充時的灌注壓力，保證灌注效果。鑄型前，根據CT影像所示，用細針穿刺肝組織條進行病理檢查，以明確腫瘤組織的性質，并測量腫瘤大小。制成有肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本的右葉下段可見2 cm×2 cm×1 cm,右葉上段2 cm×1 cm×1 cm、左葉內段1 cm×1 cm×1 cm大小的紅色球狀血管球，是肝腫瘤病變區域，與CT影像所示的結果相符。

近年來，鑄型標本與教學、科研的結合越來越緊密，是分析和研究臨床影像學的形態學基礎，亦是介入和手術治療的形態學依據。利用有肝細胞癌病變的肝臟制成血管鑄型標本可直觀顯示肝腫瘤病變區域，了解肝臟腫瘤旁的血管形態、位置及其關系，為基礎研究、模擬手術和手術創新提供直觀的形態學依據。血管鑄型標本更能顯示器官內部動脈、靜脈管道的走向。為介入治療、手術切除腫瘤、血管疾病治療奠定形態學基礎和解剖學基礎[4]。本實驗突破制作血管鑄型標本的器官必須是沒有經過手術治療、沒有腫瘤包塊和潰瘍[5]的器官限制，填補了人體解剖學領域中經過手術治療的、有腫瘤包塊或有潰瘍的病變器官血管鑄型標本的空白。肝動脈和腫瘤血管非常豐富，其分支管壁厚，管腔小，不易變形，在灌注時，必須選擇流動性較好、凝結較慢的揮發性過氯乙烯填充劑，減少補注的次數；肝靜脈和門靜脈管壁薄、管腔大，易變形，宜選用凝結快、收縮率低、一次化學反應成型的自凝牙托材料的填充劑,使肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本的制作取得良好效果[6]。在肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本的制作過程中，維持肝臟的自然形態和充分的硬固塑型和腐蝕,是制作優質肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本關鍵。

肝臟是實質性器官，血管豐富而纖細，硬固塑型慢，灌注后，應充分放置使填充劑硬固再腐蝕，避免肝臟血管鑄型標本的血管由于纖細和硬固塑型不充分而柔軟無力，同時,腐蝕的過程中產生的熱量亦會將未反應硬化的血管枝軟化或腐蝕。因此，選用氯乙烯作填充劑，使血管末梢更具柔韌性，血管末梢不易折斷[7]。柔韌性差的自凝牙托材料，易造成細小血管枝折斷[8]。但在自凝牙托材料中加人鄰苯二甲酸二丁醋能增加其柔韌性, 使自凝牙托材料填充塑型效果更好,且一次灌注即可成型,成型后血管充盈飽滿,精細美觀[9]。肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本不僅提供三維立體構筑的血管模型，還為肝腫瘤血管分布研究、三維手術等提供技術支持，具有極高的臨床應用價值[10]。本實驗制成的肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本中有三處紅色結節狀小血管團，為腫瘤結節。肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本可全面顯示肝臟腫瘤病變的位置和大小，標本顏色絢麗多彩，富立體感，血管枝干飽滿，粗細、疏密合理，各血管的結構、層次，清晰可辨，能立體地、直觀地觀察到肝的腫瘤病變的部位和血管特征。肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本的血管枝是塑料材料構成，標本裝瓶密封后，經多年10%甲醛水溶液浸泡保存亦能保持色彩鮮艷，不褪色，不變形。本實驗制作的肝細胞癌病變的肝臟血管鑄型標本制作技術適用于其他器官的血管鑄型標本制作。肝細胞癌血管鑄型標本為教學、科研和臨床研究肝臟管道結構和肝臟解剖結構提供依據，為肝臟外科學的發展提供巨大幫助，許多復雜性肝腫瘤患者獲得手術治療的機會[11]。

綜上所述，肝細胞癌病變的肝臟可制成血管鑄型標本，制成的標本能直觀顯示肝細胞癌病變的肝臟內血管、腫瘤區域及其周圍血管分布。

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