劍葉龍血樹組織培養與快速繁殖的研究

楊春燕

（云南開放大學云南國防工業職業技術學院 云南昆明 650500）

劍葉龍血樹組織培養與快速繁殖的研究

楊春燕

（云南開放大學云南國防工業職業技術學院 云南昆明 650500）

用劍葉龍血樹的腋芽、頂芽或莖段作外植體，構建了劍葉龍血樹組織培養再生體系。試驗結果如下：劍葉龍血樹腋芽、頂芽或莖段誘導愈傷組織的最佳培養基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L，誘導率達95%；選擇MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養基有利于芽的分化和增殖，在1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA0.4mg/L+活性炭的培養基中誘導生根效果最好。

劍葉龍血樹 組織培養 快速繁殖

劍葉龍血樹（Dracaena cochinchinensis）是百合科龍血樹屬植物。莖粗大，分枝多，樹皮灰白色，光滑，葉聚生在莖、分枝或小枝頂端，花序軸密生乳突狀短柔毛，花絲扁平，莖部有紅棕色疣點；花柱細長。龍血竭為劍葉龍血樹的樹脂類藥材，是我國的傳統名貴中藥，內服可以活血化瘀，止痛，主要用于治療冠心病、腦梗死等血栓性疾??；外用能止血，生肌斂瘡，主要用于各種皮膚或粘膜疾患。為了獲得更多的劍葉龍血樹的資源，我們采用組織培養的快速繁殖方法，可以很好的解決這個問題，各種資料報道的組織培養方法［1.2.3］，多數以海南龍血樹為材料，我們研究的主要對象是劍葉龍血樹，看是否也有同樣的效果。

1 材料和方法

1.1 外植體來源：

實驗材料劍葉龍血樹采自廣西憑祥，并在云南昆明移栽成活。在取龍血樹的外植體之前，先對龍血樹的整棵植株進行消毒處理，方法是用1g/L的70%甲基托布津可濕性粉劑水溶液進行噴灑，每隔3天噴一次，看到植株及盆土淋濕為止，連續噴灑3次。選取接種材料為優良的腋芽或頂芽和莖段作為外植體。

1.2 外植體的消毒

外植體采集前控制水分、淋殺菌劑的預處理方法可降低材料的污染率，提高誘導的成功率。把取來的外植體在自來水上沖洗干凈后，在加有少量洗潔精的水中浸泡5min，自來水沖洗20min，再用75%的乙醇浸泡30s，隨后用無菌水沖洗3-4次，再放在飽和漂白粉水中消毒10min，無菌水沖洗4-5次；最后在0.1%升汞中消毒4min，用無菌水沖洗5次。在無菌條件下，借助手術刀，將消過毒的材料（用無菌濾紙吸干水分），切成0.5cm大小備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 MS培養基的配方與配制方法：

在實驗過程中，大量元素：K N O3、N H4N O3、M g S O47 H2O、KH2PO4、CaCl22H2O，大量元素按照擴大20倍來配制母液。微量元素：M n S O44 H20、Z n S O47 H2O、H3B O3、K I、N a2M o O42 H2O、CuSO45H2O、CoCl26H2O，微量元素母液擴大100倍。鐵鹽：Na2-EDTA、FeSO47H2O；有機物質：肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素（VB1）、鹽酸吡哆醇（VB6），鐵鹽和有機物質也是按照擴大100倍來配制母液。

1.3.2 植物生長調節劑的配制：

6-BA（母液）：濃度為1mg/mL（溶于少量1mol/L鹽酸后以蒸餾水定容）；NAA（母液）：濃度為1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸餾水定容）。

1.3.3 誘導培養基的配制：

分別取擴大20倍的大量元素母液50ml，擴大100倍的微量元素10ml，鐵鹽母液10ml，有機物質母液10ml，6-BA母液3ml，NAA母液0.5ml，蔗糖20g，瓊脂8g，把馬鈴薯削皮切成小塊放在鍋里煮爛后，連同汁一起和上述物質全部混合配制成1000ml的誘導培養基，煮沸后分裝滅菌。無菌檢測后，把外植體接種到誘導培養基上進行培養。

1.3.4 芽體的增殖培養基以及壯芽培養基的篩選

以從誘導培養基上長出來的芽作近一步增殖繼代培養篩選試驗的材料，選用基本培養基MS，分別加上濃度為0，0.5，1.0，1.5，2. 0，2.5mg/L的細胞分裂素6-BA和濃度為0.2mg/L 的NAA，蔗糖30g/L，共6種處理；放在（25士2）℃的培養室中培養，每天光照10h，光照強度為1500-2500lx。培養28天后觀察試驗結果，查看分化出芽的總數、生長反應情況。

2 實驗結果和分析討論

2.1 初代培養

把消過毒后的材料接種于誘導培養基上，外植體培養15天后，外植體邊緣開始萌動出現愈傷組織，長勢快；初代培養30天后愈傷組織為顆粒狀，繼續培養，顆粒狀的組織最終形成叢生的小芽。將叢生的小芽和嫩綠色的愈傷組織轉接到誘導培養基。培養基的配方為：MS十6-BA 3.0 mg /L + NAA 0.5 mg/L的培養基。

2.2 增值、繼代培養基篩選結果

經實驗結果得出結論，培養基中添加不同濃度的6-BA對芽的增殖影響很大，同時還影響芽的分化、增殖、伸長和生長。隨著濃度升高增殖倍數也在增加，芽的長度則表現為隨濃度升高而降低。當6-BA增加的濃度達到一定值，如達到2.5mg/L時，芽的生長開始表現不正常，部分出現玻璃化現象。從表2的試驗數據，我們可以看到，在接種芽數一定的情況下，隨著6-BA濃度的增加，增殖芽樹在不斷的增加，增殖的倍數也在增加，但是平均的芽長在逐漸的減少。最后，從總體的情況看，我們選擇2號培養基做為繼代培養基效果最好，在該培養基中培養出來的苗芽伸長快，并且有一定的增值倍數。5號培養基為增殖培養基，因為在該培養基中培養出來的苗芽生長情況和增值倍數高。

2.3 根誘導培養基篩選結果

以1/2 MS培養基為基本培養基，分別加入NAA0.5 mg/L、IBA 0-1.0 mg/L的植物生長調節劑，將增殖獲得的叢生芽剪切成約2cm的莖段，接種于6種不同生根培養基上，每種培養基各接種20瓶，每瓶接種10株。接種約4周開始生根，30天后統計芽苗出根情況。以上培養基都添加蔗糖30.0 g/L，瓊脂0.8% ，活性炭0.1%， pH 5.5。

經實驗結果得出結論，僅添加NAA的培養基上，根較細，出根早，植株生長較弱，在一定濃度NAA條件下，隨著IBA濃度的不斷升高從0.2 mg/L到0.6 mg/L，根變粗壯、根量變多，且植株生長健壯；隨著IBA濃度的進一步提高到1.0 mg/L，根的生長被抑制，根數降低，植株生長也一般。因此，從試驗結果可以看出，劍葉龍血樹的最適生根培養基為1/2MS+ IBA 0.4 mg/L +NAA 0.5 mg/ L生根率達100.0%。

3 結論

通過用劍葉龍血樹的頂芽或腋芽、莖段作外植體，建立了劍葉龍血樹的組織培養和再生體系。結果表明：劍葉龍血樹腋芽、頂芽或莖段誘導愈傷組織的最佳培養基為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0. 5mg/L，誘導率達95%。選擇MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/ L+3 0 g/L的蔗糖+8 g/L瓊脂培養基有利于壯芽；選擇M S+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養基有利于芽增殖繼代；培養45d左右，每個外植體分化形成的再生小植株數達8～20個；在1/2MS+ IBA0.4mg/L + NAA0.2mg/L +活性炭0.1%的培養基中誘導生根效果最好。

［1］靳靜晨，卜媚，羅雪楓，陳雄進，譚家壯.A tissue culture technique for rapid propagation of Dracaenacambodiana Pierre ex Gagnep.廣西農業科學，2010.41（8）：755-757.

［2］何旭君，劉善輝，馮遠來 林曉萍，張華通.海南龍血樹組織培養快速繁殖技術研究.廣東林業科技，2006，22（1）：22-25

［3］吳繁花 朱文麗 莫饒 符常明.海南龍血樹的組織培養.植物生理學通訊，2005，41（2）：186-187.

Q945

A

1674-2060（2016）02-0030-02

楊春燕（1969- ），女，副教授，云南開放大學化學工程學院生物技術及應用專業，主要從事生物技術及組織培養方面的研究工作。