32個居群滇龍膽地上部分龍膽苦苷的含量測定

黃福榮

[摘 要]目的：云南范圍內有各個地州都有龍膽科植物分布，為綜合利用滇龍膽地上部分資源，充分發揮地方資源優勢，為擴大藥用部位提供依據。方法：通過現代研究手段，明確滇龍膽中基本化學成分，以高效液相色譜法測定云南省內不同居群的滇龍膽地上部分龍膽苦苷的含量。結論：經高效液相色譜法測定表明，不同居群的滇龍膽地上部分龍膽苦苷含量在0.15%～4.70%之間，平均含量1.79%，具備開發利用價值，可為地方經濟服務。

[關鍵詞]滇龍膽；龍膽苦苷；高效液相色譜法

[中圖分類號]R284 [文獻標識碼]A

龍膽草，中藥名，為龍膽科植物龍膽、條葉龍膽、三花龍膽和滇龍膽、的根和根莖。龍膽草在我國具有比較悠久的使用歷史，具有清熱、瀉肝、定驚之功效?！侗静菥V目》記載：“性味苦，澀，大寒，無毒。主治骨間寒熱、驚病邪氣，繼絕傷，定五臟，殺蟲毒?！鼻叭N主產于東北地區，藥材俗稱關龍膽，是全國范圍內的主流品種；后一種主產于云南，藥材俗稱堅龍膽、滇龍膽，是西南和華南地區的主流品種，分布于湖南、廣西、貴州、四川、云南等地。龍膽最早記載于《神農本草經》，列為上品，記其：“龍膽，一名陵游。味苦澀，主骨間寒熱，驚癇邪氣，續傷疤，定五臟，殺蠱毒。久服益智不忘，輕身耐老”。后世歷代本草也均收載本品。在中醫藥應用中，龍膽味苦性寒，能清熱燥濕，瀉肝膽火。以龍膽為主要藥物的經典方劑有龍膽瀉肝湯、瀉青丸、當歸龍薈丸等。而在國外植物藥應用中，龍膽也是常用品種，主要用作苦味健胃劑。龍膽根莖呈不規則的塊狀，長1～3cm，直徑0.3～1cm；表面暗灰棕色或深棕色，上端有莖痕或殘留莖基，周圍和下端著生多數細長的根。根圓柱形，略扭曲，長10～20cm，直徑0.2～0.5cm；表面淡黃色或黃棕色，上部多有顯著的橫皺紋，下部較細，有縱皺紋及支根痕。質脆，易折斷，斷面略平坦，皮部黃白色或淡黃棕色，木部色較淺，呈點狀環列。氣微，味甚苦。堅龍膽 表面無橫皺紋，外皮膜質，易脫落，木部黃白色，易與皮部分離。龍膽瀉肝湯是龍膽在臨床上應用最為廣泛，瀉肝膽實火和清利肝經濕熱。隨著臨床研究的深入，應用面不斷地擴大，主要的有以下幾個方面：治療肝膽疾病、高血壓、急性腎盂腎炎、病毒性角膜炎、皮膚病、急性咽炎、慢性支氣管炎、上呼吸道感染、結膜炎等。在民間，龍膽草泡水喝是比較常見的應用，不僅操作簡單，同時還可以有效的促進這種藥材對身體的保健以及治病作用。

1 儀器與試藥

主要儀器和設備 VI500型高效液相色譜儀，FA3204B電子分析天平（上海精科---上海天平儀器廠），HCP-18超聲清洗器；多功能恒溫超聲波提取機。

主要試劑和藥品 龍膽苦苷對照品，甲醇（色譜純溶劑），純化水（超濾膜過濾）；提取處理等用分析純試劑。采集于云南省內不同地區的滇龍膽藥材的地上部分，共32份樣品，生藥鑒定均為龍膽科植物堅龍膽G. rigescens Franch.

2 方法與結果

2.1 色譜條件

GP-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）：甲醇—水（35：65）為流動相，1.0ml/min流動速度；30℃柱溫；270nm為檢測波長；10μl的進樣量。色譜顯示龍膽苦苷對照品吸收峰保留時間約12min，拖尾因子1.05，理論板數大于3000，分離度大于2，符合含量測定要求（如圖1）。

2.2 對照品溶液配制

用電子分析天平精密稱取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成濃度為5mg/ml的溶液，濃度測定后作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

依次稱取滇龍膽地上部分材料，50℃下烘干，粉碎，過7號篩，精密稱取0.5g，加甲醇10ml，放置過夜，超聲提取40min，初濾，微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續濾液為供試品液。

2.4 線性關系的考察

精密稱取龍膽苦苷對照品用甲醇制成儲備液（5mg/ml），分別精密吸取儲備液各1ml，甲醇稀釋成0.01mg/ml，0.05 mg/ml，0.1 mg/ml，0.5 mg/ml，1 mg/ml，1.5 mg/ml，2 mg/ml，2.5 mg/ml濃度的對照品溶液，濾過，取10μl進樣，按照1.2.1項色譜條件進行HPLC分析，以峰面積Y對進樣量X進行回歸處理，得線性回歸方程：Y=803383.36*X-10226.04，r=0.9999，即龍膽苦苷進樣量在0.1μg～25μg時，峰面積和進樣量呈現良好的線性關系。

2.5 重現性考查

取同一居群供試藥材粉末5份，平行制備5份供試品樣品溶液，在GP-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）：甲醇—水（35：65）為流動相，1.0ml/min流動速度的色譜條件測定測得結果為RSD1.35%（n=5）。

2.6 樣品測定

取各居群的供試品樣品粉末0.5g，制成樣品溶液，按上述色譜條測定，各居群供試品中，龍膽苦苷含量如下：（表一）

3 結果與討論

含量測定結果顯示，各居群的滇龍膽地上部分均含有一定量龍膽苦苷，最低含量0.15%，最高含量4.70%之間，平均含量1.79%，具有可開發利用的價值。

目前，云南省內有很多地州都在人工栽培龍膽草，有的地方栽培面積都較大，但目前主要是用其根及根莖，地上部分只是在民間有些應用，但都沒有系統規范的開發利用，使有限的藥材資源浪費了。若能有規模的加以開發利用，將會大大改善生態環境，還能為農村增加經濟收入，帶動農村和社會經濟的進一步發展；提高資源的綜合利用，促進生態環境良性發展，從一定程度緩解資源匱乏的狀態。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中國藥典2005年版（一部）[M].北京化學工業出版社，2005，64

[2] 謝觀.中國醫學大辭典第四冊[M].北京：中國書店出版社，1988