DcR3蛋白在鼻咽癌組織中表達的臨床意義及其與EB病毒關系的研究

杜玉曉+王彩紅+王軍+陳炳強+劉翠

【摘要】 目的 研究誘捕受體3（DcR3）蛋白在鼻咽癌中表達的臨床意義， 并探討在鼻咽癌組織中DcR3與EB病毒（EBV）的關系。方法 采用免疫組化SABC法檢測40 例鼻咽鱗狀細胞癌組織中DcR3蛋白的表達情況， 同時應用癌旁正常組織和40例鼻咽正常組織做對照。并用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測40例鼻咽癌組織中EBV的陽性率， 探討兩者之間的關系。結果 鼻咽癌組織中DcR3蛋白的陽性表達明顯高于癌旁正常組織及正常鼻咽組織（P<0.05）， 癌旁正常組織與正常鼻咽組織中DcR3的表達差異無統計學意義（P>0.05）；DcR3的表達與淋巴結轉移、臨床分期、病理分級有關（P<0.05）， 與患者年齡和性別無關（P>0.05）；鼻咽癌組織中EBV的陽性率為72.50%， DcR3在EBV陽性的鼻咽癌組織中呈高表達， 在鼻咽癌陰性的組織中呈低表達， 差異有統計學意義（P<0.05）。結論 DcR3蛋白在鼻咽癌組織的高表達， 可作為判斷鼻咽癌分化、浸潤、轉移的重要指標， 其與EBV共同作用促進了鼻咽癌的發生、轉移及不良預后。

【關鍵詞】 鼻咽腫瘤；誘捕受體3；EB病毒

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.20.028

DcR3是腫瘤壞死因子受體（TNFR）超家族的新成員。EBV是一雙鏈DNA病毒， 屬于皰疹病毒科。在鼻咽癌中DcR3的表達及與EBV的關系國內外鮮見報道， 本文作者采用免疫組化SABC法對鼻咽癌中的DcR3蛋白進行檢測， 并用RT-PCR的方法檢測EBV的陽性率， 探討DcR3在鼻咽癌發生、發展中的作用， 及其與EBV的關系， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 40例鼻咽癌組織及相應癌旁正常組織取自2010年1月～2015年12月在平煤神馬醫療集團總醫院耳鼻咽喉頭頸外科住院活檢的鼻咽癌患者， 40例鼻咽正常組織來源于行鼻內窺鏡手術的非腫瘤患者。術前均未接受放、化療， 診斷均經病理學檢查證實。

1. 2 主要實驗儀器及設備 ABI 7300 Real Time PCR system， Benchmark XT 全自動免疫組化染色儀。

1. 3 方法

1. 3. 1 免疫組織化學SABC法主要試劑：一抗， 鼠抗人免疫球蛋白（Ig）G 型 DcR3蛋白單克隆抗體（美國eBioscience公司）。即用型廣譜SABC組化試劑盒及顯色試劑盒均購自武漢博士德公司；具體操作按照試劑盒上的操作完整。DcR3陽性表達為胞漿著棕黃色。無著色或著色<25%為陰性（-）， 著色范圍25%～50%為陽性（+）， 著色范圍>50%為強陽性（++）。所有切片由病理科醫生協助閱片判讀。

1. 3. 2 RT-PCR方法：總DNA抽提試劑盒購于凱杰公司， 熒光定量PCR試劑盒購于中山達安公司。具體操作按照試劑盒上操作完成。所有檢測結果均由具備衛計委臨床檢驗中心PCR上崗證的工作人員協助判讀。

1. 4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件進行統計分析。實驗數據比較采用非參數檢驗法。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 DcR3在鼻咽癌組織、癌旁正常組織和正常鼻咽黏膜組織中的表達 鼻咽癌組織中DcR3蛋白的表達明顯高于癌旁正常組織和正常鼻咽組織（P<0.05）。見表1。DcR3在各鼻咽組織中的表達見圖1， 圖2， 圖3。

2. 2 DcR3在鼻咽癌組織中的表達與臨床病理參數的關系

DcR3的表達與淋巴結轉移、臨床分期、病理分級有關（P<0.05）， 與患者年齡和性別無關（P>0.05）。見表2。

2. 3 DcR3表達與EBV的關系 鼻咽癌組織中EBV的陽性率為72.50%， DcR3在EBV陽性鼻咽癌組織呈高表達， 在鼻咽癌陰性組織呈低表達， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

DcR3是一種新發現的TNFR超家族成員， 屬于分泌性的非膜聯接的蛋白分子， 廣泛存在于腫瘤組織中， 能抑制細胞凋亡， 并參與腫瘤細胞的免疫逃逸。文獻報道[1]， DcR3蛋白及基因在人類的許多惡性腫瘤如肝癌、胃腸道腫瘤、胰腺癌、乳腺癌等呈高度表達狀態， 提示DcR3具有高度的腫瘤特異性。Weissinger 等[2]研究發現在腎細胞癌中DcR3與integrinα4、MMP7、uPA均陽性表達， 與腎細胞癌的臨床病理參數密切相關， 導致了腎細胞癌的局部淋巴結轉移、遠處轉移及不良預后， 證實DcR3是通過PI3K/AKT途徑導致了腫瘤的發生發展。本次研究顯示DcR3在鼻咽癌組織中呈高表達， 在其臨近組織中無表達或偶爾低表達。DcR3與腫瘤的淋巴結轉移、臨床分期及病理分化程度等臨床病理參數密切相關， 與年齡和性別無關。

在一些病毒相關性腫瘤中， DcR3過度表達尤為顯著。自1996年Old等首先在鼻咽癌患者血清中檢測到EBV以來， 逐漸證實EBV在鼻咽癌的發病因素中的重要作用， 其拷貝數與其TNM分期密切相關。本次研究顯示在鼻咽癌組織中EBV的陽性率為72.50%， 在EBV陽性組織中DcR3的表達明顯高于EBV陰性組織， 差異有統計學意義（P<0.05）， 說明DcR3與EBV共同作用促進了鼻咽癌局部浸潤。這與Ho等[3]關于鼻咽癌中DcR3及EBV的研究結果相一致。其可能機制為EBV轉錄激活RTA， 通過結合到其啟動子上調DcR3的表達。也可能是EBV膜蛋白1 （LMP1） 通過NF-кB及PI3K途徑上調DcR3導致了腫瘤的發生[2]。

綜上所述， DcR3在鼻咽癌組織中高表達， 其與EBV共同促進了鼻咽癌的發生發展、浸潤及轉移。DcR3在許多惡性腫瘤組織及血清中呈陽性表達， 而其單克隆抗體的制備也在研究中， 本研究為鼻咽癌預防、生物治療提供了理論依據。

參考文獻

[1] Zhou J， Song S， Li D， et al. Decoy receptor 3 （DcR3） overexpression predicts the prognosis and pN2 in pancreatic head carcinoma. World J Surg Oncol， 2014， 12（1）：1-7.

[2] Weissinger D， Tagscherer KE， Macher-Gppinger S， et al. The soluble Decoy Receptor 3 is regulated by a PI3K-dependent mechanism and promotes migration and invasion in renal cell carcinoma. Molecular Cancer， 2013， 12（1）：3365-3370.

[3] Ho CH， Chen CL， Li WY， et al. Decoy receptor 3， upregulated by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1， enhances naso?pharyngeal carcinoma cell migration and invasion. Carcinogenesis， 2009， 30（8）：1443-1451.

[收稿日期：2016-04-20]