自動免疫組化染色與人工染色對CerbB—2的影響

陳國艷+盧翔宇+陳瑩瑩+劉遠歡

【摘要】目的：觀察在全自動免疫組化染色和人工操作中對CerbB-2的影響。方法：選取34例乳腺癌免疫化組病例標本為研究對象，采用CerbB-2一抗，使用全自動免疫組化染色和人工操作兩種方面進行免疫組化染色，對比試驗結果，以此分析和探討兩種方法的優勢和不足。結果：CerbB-2應用于全自動免疫組化染色和人工染色過程中，手工免疫組化染色結果背景淺、較強特異性、有邊緣效應、著色不均、陽性定位不佳，而全自動免疫組化染色背景清晰、特異性較強、無邊緣效應、著色均勻，且陽性定位準確，與手工免疫組化染色相比較，優勢明顯。結論：CerbB-2在全自動免疫組化染色和人工操作中應用，全自動免疫組化染色總體優勢較多，標準化程度優良，提示全自動免疫組化染色可廣泛應用于臨床病理診斷。

【關鍵詞】 CerbB-2；全自動免疫組化染色；人工操作；病理診斷

【中圖分類號】R446.62 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）16-0090-03

Abstract： Objective To investigate the effect CerbB-2 application in automated immunohistochemical staining and manual operation. Methods 34 cases of breast cancer patients immunized samples for the study， using CerbB-2 antibody， immunohistochemical staining， comparative test results using automated immunohistochemical staining and manual two kinds of aspects， in order to analyze and explore the advantages and disadvantages of the two methods. Results CerbB-2 used in automatic and manual immunohistochemistry staining process， manual immunohistochemical staining background light， strong specificity， there are edge effects， uneven coloring， poor positive positioning and automatic immunity staining clear background， strong specificity， no edge effects， color uniformity， and the positive positioning accuracy compared with manual immunohistochemical staining， have obvious advantages. Conclusion CerbB-2 immunohistochemical staining in automatic and manual applications， automated immunohistochemistry overall benefit more excellent degree of standardization， prompt automatic immunohistochemical staining can be widely used in clinical pathology.

Keywords：CerbB-2； Automatic Immunohistochemistry； Manual Operation； Pathological Diagnosis

免疫組化技術是廣泛應用于臨床病理鑒別診斷的一種現代化科學手段，在評估腫瘤預后及耐藥監測等諸多方面發揮著重要作用。但是在實際人工操作過程中，操作者個體手法、天氣、環境、方法及時間等不可控制因素均會對檢測結果產生影響，從而難以取得穩定的結果。全自動免疫組化染色儀的應用彌補了人工操作的不足，利于測定結果標準化，近些年來一些醫院病理科也逐步將這項技術應用于臨床[1]?；诖搜芯勘尘?，本次研究分別采用全自動免疫組化染色和人工操作對檢測標本進行免疫組化染色，對比試驗結果，以此分析和探討兩種方法的優勢和不足?，F將本次研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2016年1月期間我院病理科收集的乳腺癌免疫化組病例標本（包括手術切除標本和活檢小標本）共34例，均由Fish確定為++以上的病例，標本均為4μm的石蠟切片。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與設備 Benchmark GX全自動免疫組化染色儀、CerbB-2均由邁新公司提供，全自動免疫組化染色其余試劑均由羅氏公司提供，人工操作試劑全由邁新公司提供。

1.2.2 檢測方法 每份標本切2張，厚3μm，分A、B組，65℃烤片1h。A組用BenchMark GX進行染色，一次20張玻片。具體操作如下：①打開電腦和機器，雙擊“ventana”，點擊“PROTOCOLS”，選好染色方案，錄入病理號，打印標簽，將玻片貼好標簽，放入機器的玻片操控臺；②裝上DAB試劑盒（由北京諾博萊科技有限公司供應）、蘇木素（由上海寶曼生物科技有限公司供應）、靛藍試劑瓶（由徐州誠裕玻璃制品有限公司供應）；③檢查1號液（脫蠟清洗緩沖液）、2號液（封蓋清洗緩沖LCS）、3號液（氯化鈉檸檬酸鈉清洗緩沖液）、4號液（清洗緩沖液）、5號液（細胞前處理清洗緩沖液）試劑量是否足夠，廢液瓶低水位。上述5種溶液均購于美國Fisher；④點擊“Run”，填好玻片數，確定即可開始運行；⑤程序結束后，收齊玻片，用含少量洗潔精的自來水清洗玻片，再用自來水洗干凈，常規脫水、透明封片。B組用人工操作進行免疫組化染色，常規脫蠟，檸檬酸鹽微波熱修復，Envision二步法，復染，鏡下觀察。

2 結果

切片染色結果顯示：與手工免疫組化染色相比較，全自動免疫組化染色背景清晰，無邊緣效應，著色均勻，且陽性定位準確，優勢明顯。對比情況詳見表1及圖1。

3 討論

近些年來，免疫組化技術因其在良惡性腫瘤的診斷和鑒別中具有較高特異性、敏感性而受到重視，其深入研究和推廣運用為臨床疾病的診斷和治療提供了強有力依據。但是隨著免疫組化技術應用范圍的拓延，及其它診斷技術的開發和運用，免疫組化標準化問題難以解決成為了阻礙其臨床應用和發展的主要因素[2-3]。既往多數研究資料表明，免疫組化技術的實驗結果極易受操作者個體手法、溫度、天氣、環境、方法及時間等外界因素的干擾、影響，從而出現試驗誤差，質量控制難以保證，且手工操作工作效率低，劣勢明顯[4-5]。

本次研究以常用診斷用抗體CerbB-2為一抗，分別采用使用全自動免疫組化染色和人工操作兩種方面進行免疫組化染色。結果顯示：手工免疫組化染色具有背景淺、較強特異性、有邊緣效應、著色不均、陽性定位不準確的特點，而全自動免疫組化染色背景清晰、特異性較強、無邊緣效應、著色均勻，且陽性定位準確，兩者結果比較，全自動免疫組化染色優勢明顯，與肖剛等學者研究結果一致[6]。提示全自動免疫組化染色優勢顯著，標準化程度優良，可廣泛應用于病理診斷臨床。

筆者結合本次研究結果及多年臨床工作經驗，將全自動免疫組化染色儀的優勢予以歸納總結。①Benchmark GX全自動免疫組化染色儀可由一臺微主機附帶多臺子機[7-8]，設定標準化的染色流程，全自動運行，并可過夜處理，節省人力成本，提高工作效率，具有良好的重復性；②Benchmark GX全自動免疫組化機采用了獨立溫控技術，使每一個項目均可實現個性化的染色方案（同一輪染色可采用不同的抗原修復/一抗時間/溫度等）；③Benchmark GX全自動免疫組化染色儀采用噴射式清洗技術，使每次清洗非常徹底，減少了非特異性著色。并且使用了液體封蓋膜技術及空氣渦流混勻技術，使試劑均勻的分布到整張玻片上，又因油膜的覆蓋防止了試劑蒸發而干片的可能，從而減少了背景著色，提升了實驗結果的準確性、可靠性；④它使用了環保型脫蠟液和LCS，不使用二甲苯等有毒試劑，極大減少對人體的傷害；⑤Benchmark GX全自動免疫組化染色儀除可進行全自動免疫組化染色，還可進行多種實驗方案，如：ISH、DISH、FITC。由此可見，全自動免疫組化染色和人工染色相比較，前者運用優勢更為顯著；⑥全自動免疫組化染色儀切片染色結果無邊緣效果、著色均勻。

近些年來，隨著病理檢測要求的提升，臨床病理學對于病理檢測結果的標準化和質量控制也提出了更高要求。2000年，國際標準化組織已經明確雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）免疫組織化學染色的質量體系，明確了臨床病理診斷和疾病鑒別中的免疫組化技術的標準化要求。提升免疫組化技術的準確性和標準化對于CerbB-2在全自動免疫組化染色和人工操作中應用具有指導意義。

綜上所述，與手工免疫組化染色相比較，CerbB-2在全自動免疫組化染色中的運用，染色背景清晰，無邊緣效應，著色均勻，陽性定位準確，且較之于人工操作，具有省時省力及操作簡便的優點，優勢明顯。在病理學界倡導標準化及質量控制的社會環境下，全自動免疫組化染色技術可作為臨床病理診斷方法得以廣泛運用。

參考文獻

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[8]張富琴，張玉蘭，南海燕，等.全自動免疫組化染色儀的應用體會[J].診斷病理學雜志，2013，20（12）：799.

（編輯：程鵬飛）