逍遙散含藥血清對未孕大鼠離體子宮平滑肌的作用研究

海青山++楊榆青++鄭梅

摘要：目的觀察逍遙含藥血清對正常大鼠離體子宮平滑肌運動的影響，并探討其作用機制。方法運用Powerlab生物信號系統記錄大鼠離體子宮肌標本的活動，觀察不同濃度組逍遙散含藥血清對子宮平滑肌收縮時間、最大張力、子宮活動力的影響。結果：逍遙散含藥血清對正常大鼠離體子宮肌有明顯的興奮作用，可增強其收縮時間、最大張力和子宮活動力（與空白血清組比較，P<0.01），且興奮作用強度與含藥血清的濃度有相關性（高濃度和低濃度血清組比較P<0.05）。逍遙散含藥血清的這一作用可被異搏定和阿托品阻斷（與血清組比較P<0.01）。結論逍遙散含藥血清在體外可增強正常家兔子宮平滑肌的收縮，該作用可能是通過L型鈣通道和M受體發揮作用。

關鍵詞：逍遙散；含藥血清；子宮肌標本

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2016）11-0077-03

逍遙散源于宋代《太平惠民和劑局方》，其方藥組成為：柴胡、芍藥、白術、茯苓、當歸、生姜、薄荷、甘草，具有疏肝解郁、養血健脾的作用。臨床上逍遙散廣泛用于治療肝郁血虛脾弱所致的各科疾病，尤其是各種婦科疾病[1-3]?，F代藥理研究發現逍遙散具有抗抑郁癥及腸易激綜合癥、抗癌、防治肝纖維化、調節神經內分泌等多方面作用[4-6]。本實驗用血清藥理學的方法研究逍遙散含藥血清對離體子宮肌的作用，并對其作用機制進行探討。

1制備逍遙散含藥血清

1.1材料

1.1.1藥品逍遙散原方不變，藥物劑量參考《方劑學》教材第六版：柴胡、當歸、芍藥、白術、茯苓各9 g，甘草4.5 g，燒生姜一塊，薄荷少許。所用生藥經鑒定，均為正品。

1.1.2動物SPF級未孕SD大鼠（昆明醫學院實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（滇）2011-2014），體重180±30 g，本院動物房飼養，普通飼料，自主飲食。

1.1.3儀器離心機、恒溫水浴鍋（DZKW-C；北京光明醫療儀器廠）。

1.2方法

1.2.1逍遙散水煎劑制備和濃縮上述八味藥用六倍于生藥量的水浸泡30 min，分別按20、15、15 min煎煮3次，用六層紗布過濾，并濃縮成每1 mL含5.2 g 、2.6 g生藥量的藥液，置于4℃冰箱中貯存備用。

1.2.2分組給藥SPF級未孕SD大鼠60只，隨機分為空白血清組，0.9%生理鹽水；含藥血清高濃度組，5.2 g/mL逍遙散水煎劑；含藥血清低濃度組，2.6 g/mL逍遙散水煎劑。經灌胃途徑給藥，1.5 mL/100 g/次，每天2次，連續3 d。

1.3.3逍遙散含藥血清制備于第3日末次給藥后腹腔注射25%烏拉坦（4 mL/kg），并于給藥后60 min腹子宮采血，靜置30 min后，以3000轉∕分速度離心10 min，取上清液，分裝，-20℃保存待用，用前56℃30 min滅活。

2逍遙散含藥血清對大鼠離體子宮肌的作用

2.1材料

2.1.1試劑垂體后葉素（上海第一生化藥業有限公司，批號：060403）、己烯雌酚（合肥久聯制藥有限公司，批號：060301）、消炎痛（山西太原藥業有限公司，批號：071202）、酚妥拉明（諾華制藥，批號：060156）、阿托品（天津藥業集團新鄭股份有限公司，批號：060413）、苯海拉明（天津藥業集團新鄭股份有限公司，批號：0702051）、異搏定（江蘇四環生物股份有限公司，批號：0707131）、洛氏液（NaCl 9g，KCl 0.42g，CaCl2 0.24g，NaHCO3 0.2g，Glucose.l 0g，蒸餾水1000mL）。

2.1.2儀器Powerlab/8s生物信號采集處理系統（澳大利亞埃德公司）、張力換能器（澳大利亞埃德公司，型號：ML784）、循環灌流恒溫平滑肌槽、離心機、冰箱、電子天平、哺乳動物手術器械等。

2.1.3動物SPF級未孕SD大鼠8只（昆明醫學院實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（滇）2011-2014），體重180±30g，本院動物房飼養，普通飼料，自主飲食。

2.2方法

2.2.1大鼠子宮平滑肌標本的制備將未孕雌性大鼠于實驗前兩天，每天皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg，促使動物處于動情期或動情前期，以提高動物對藥物的敏感性。第3天，末次促情1h后，用頸椎脫臼法迅速處死大鼠，剖腹取出子宮，立即將其浸入到盛有洛氏液的平皿中，漂洗，分離周圍的脂肪組織，制成長約1.0cm的子宮平滑肌條，放入洛氏液中待用。

2.2.2離體實驗將子宮肌標本懸掛于含（37.5士0.5℃，pH=7.4）洛氏營養液的恒溫平滑肌槽中，一端固定于浴槽底部，另一端與張力換能器連接。向恒溫平滑肌槽中通入含有95%O2和5%CO2的混合氣體，給予標本1 g的基礎張力，平衡30 min（每10min換液一次），先觀察標本的收縮情況，并用微機程控的Powerlab/8 s生物信號系統記錄收縮曲線，再依次加入所取的空白血清和含藥血清，觀察其對標本的影響，記錄收縮曲線。每進行一次試驗后，用洛氏液沖洗標本3次，使標本張力恢復至基線再進行下一次試驗。實驗中所用藥物濃度均以最終浴槽濃度計算。

3結果

3.1不同濃度逍遙散含藥血清對未孕大鼠子宮平滑肌收縮的影響在離體子宮肌自發收縮的基礎上，分別加入空白血清組、高濃度逍遙散含藥血清組（含生藥5.2 g/mL）、低濃度逍遙散含藥血清組（含生藥2.6 g/mL）及垂體后葉素，觀察大鼠離體子宮肌收縮時間（s/10 min）、張力（g）、活動力（g·s/10 min 活動力=張力×收縮時間）的變化（結果見表1）。

3.2阻斷劑加逍遙散含藥血清對大鼠離體子宮平滑肌活動的作用以高濃度逍遙散含藥血清組作用為對照，分別加入阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和異搏定，每組加入阻斷劑后5min待收縮活動平穩后，再加入0.5ml的高濃度逍遙散含藥血清。觀察上述阻斷劑對未孕大鼠離體子宮平滑肌收縮時間（s/10 min）、收縮張力（g）、活動力（g·s/10min 活動力=收縮幅度×收縮時間）的作用（結果見表2）。

結果表明：異搏定（L型Ca2+通道拮抗劑）、阿托品（M型受體阻斷劑）均可部分阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用，減少子宮平滑肌的收縮時間、張力和子宮活動力，與含藥血清組相比，差異有顯著性意義（P<0.05或P<0.01）。苯海拉明（Hl型受體阻斷劑）、酚妥拉明（α受體阻斷劑）均未能阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用。

4討論

逍遙散為疏肝解郁的代表方，肝藏血，主舒泄，喜條達，婦科疾病多從肝論治。逍遙散在臨床廣泛應用于月經不調、痛經、功血等婦科疾病的治療。據此推斷該方對子宮平滑肌的運動具有調節作用，通過中藥復方含藥血清對離體器官的作用，能更好地反映藥物在體內環境中產生藥理效應的真實過程[7]。

實驗結果表明，逍遙散含藥血清的確可以興奮未孕大鼠子宮肌的運動，在子宮最大收縮張力和收縮時間方面都表現明顯，在解除子宮收縮無力、子宮收縮遲緩等方面有作用。排出血清中原有的物質干擾，這種作用仍然存在，說明該作用是逍遙散本身或者代謝產物或者刺激機體產生的內源物質導致的[8]。而且，具有濃度依賴性，在給藥濃度增高時，作用也加強。

在高濃度逍遙散含藥血清導致離體子宮平滑肌收縮加強的基礎上，分別以阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和異搏定等阻斷劑干擾。子宮肌屬于內臟平滑肌，其收縮呈現一定的節律性，子宮收縮時需要細胞外Ca2+通過鈣通道內流，與肌鈣蛋白結合，促使粗細肌絲滑行，引起收縮。應用異搏定（L型Ca2+通道拮抗劑）可部分阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用，減少子宮平滑肌的張力證明逍遙散可以通過興奮L型Ca2+通道起作用。子宮肌存在乙酰膽堿受體，乙酰膽堿通過子宮肌受體發揮興奮作用。阿托品是M型受體阻斷劑，對逍遙散含藥血清興奮離體子宮肌有抑制作用，說明逍遙散含藥血清中含有類似乙酰膽堿的刺激物，逍遙散可能刺激機體產生乙酰膽堿等內源性物質增多而興奮子宮。

苯海拉明和酚妥拉明未能阻斷逍遙散含藥血清的興奮作用說明組胺和去甲腎上腺素可能沒有參與逍遙散對子宮的調節作用。

5結論

上述研究結果表明，子宮是逍遙散作用的靶器官之一。逍遙散含藥血清對未孕大鼠離體子宮平滑肌具有興奮作用，可增加子宮平滑肌收縮的最大張力、收縮時間及子宮活動力。逍遙散含藥血清對離體子宮平滑肌的興奮作用存在量效關系。逍遙散含藥血清對未孕大鼠離題子宮平滑肌的興奮作用，可能是通過興奮L型Ca2+通道增加Ca2+內流，進而增加細胞內Ca2+濃度發揮作用。也可能與刺激機體產生乙酰膽堿，興奮M型受體發揮作用，與H受體和α受體無關。逍遙散促進子宮活動，可能是其治療產后子宮收縮不良性等疾病的基礎，具體作用途徑和機制有待于進一步研究。參考文獻：

[1]陳煜華.逍遙散加減治療婦科疾病[J].湖北中醫雜志，2005，27（11）：44.

[2]李永瓊.逍遙散加味治療子宮肌瘤78例[J].四川中醫，2003，21（12）：57.

[3]曹秀云，程愛萍.逍遙散臨床應用現狀[J].中國民間療法，2005，13（11）：60-61.

[4]吳麗麗，徐志偉，嚴燦，等.逍遙散和丹梔逍遙散抗抑郁作用的實驗研究[J].中醫研究，2003，16（3）：14-15.

[5]王迪，張虹，付士波，王珈.逍遙散對乳腺癌細胞抑制作用實驗研究[J].中醫藥學刊，2006，4（24）：643-644.

[6]黃莉，金若敏.逍遙散藥理研究概況[J].上海中醫藥雜志，2003，09（9）：61-64.

[7]楊彥芳，王玉芹 中藥復方血清藥理學方法規范化探討[J].中國中西醫結合雜志，2000，20（5）：380.

[8]劉建勛，韓笑，孫宇揚.含藥血清藥理作用與體內給藥的量效、時效關系研究[J].中國中藥雜志，2006，10（31）：859.