黔產莪術和種子中提取揮發油的具體成分異同比較＊

許政旭，朱詩國，羅 俊，潘年松，劉英波

藥 學

黔產莪術和種子中提取揮發油的具體成分異同比較＊

許政旭，朱詩國，羅 ?。?，潘年松，劉英波

目的 研究黔產莪術和莪術種子中揮發油質控成分的檢定方法與含量范圍。方法 建立高效液相色譜法（HPLC）同時測定黔產莪術與莪術種子中吉馬酮和呋喃二烯含量方法：色譜柱為C18（4．6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～20 min，60%A～95%A；20～35 min，95%A），流速為1 ml／min，檢測波長為216 nm，柱溫35℃，進樣量10 μl。結果 吉馬酮和呋喃二烯的檢測濃度分別在4．18～83．6 μg／mL（r=0．9999），10．21～204．2 μg／ml（r=1．0000）范圍呈現良好的線性關系；吉馬酮和呋喃二烯的平均回收率 （n=6）分別103．2%（RSD=1．44%，102．2%（RSD=1．28%），重復性實驗（n=6）RSD分別為0．90%，2．10%。結論 黔產莪術與莪術種子中提取的揮發油的質量，可以用揮發油中所含吉馬酮和呋喃二烯含量進行控制?？刂品秶牵呵a莪術揮發油中吉馬酮，呋喃二烯含量依次是85．87%～100．10%，59．07%～78．92%；黔產莪術種子揮發油中吉馬酮，呋喃二烯含量依次是65．69%～80．47%，59．94%～68．41%。

HPLC；黔產莪術；黔產莪術種子；揮發油；吉馬酮；呋喃二烯

黔產莪術和莪術種子來源于四川崇州引種的莪術種子，由遵義綠普森農業有限公司在遵義市湄潭縣種植并提供研究用樣品，經遵義市食品藥品檢驗所鑒定為廣西莪術（Curcuma Kwangsiensis S．G．Lee et C．F．Liang）種，黔產莪術和莪術種子為同株異位：其根莖中的主根（大頭）是黔產莪術，側根（二頭、三頭、奶頭）是種子；須根末端膨大的塊根是黔產郁金。本文對黔產莪術和莪術種子經水蒸氣蒸餾法提取的揮發油進行進一步定量研究，建立了同時測定黔產莪術和莪術種子揮發油中吉馬酮和呋喃二烯2種有效成分的高效液相色譜法，并檢定黔產莪術和莪術種子揮發油中吉馬酮和呋喃二烯含量。報告如下。

1 材料與方法

1．1 實驗材料Agilent 1100系列高效液相色譜儀（G1379A脫氣機，G1316A柱溫箱，G1311A四元梯度泵，G2171A自動進樣器，G1313A二極管陣列檢測器）和Agilent Chemstation工作站；TB-215D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。

呋喃二烯對照品，供含量測定用99．4%計，中國藥品生物制品檢定所，批號：111824-210002；吉馬酮對照品，供含量測定用99．8%計，中國藥品生物制品檢定所，批號：111665-201103；乙腈為色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司 （批號：20150112）；水為娃哈哈純凈水；無水乙醇為分析純；黔產莪術和種子揮發油樣品（自制）來源信息見表1。

表 1 莪術油樣品來源信息

1．2 方法

1．2．1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（4．6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～20 min，60%A～95%，20～35 min，95%A）；流速：1 ml／min；檢測波長：216 nm；柱溫：35℃；進樣量：10 μl；對照品及樣品色譜圖見圖1。

圖 1 對照品（A）及樣品（B）HPLC色譜圖

1．2．2 溶液的制備 （1）對照品溶液的制備。分別精密稱取吉馬酮和呋喃二烯適量，至10 ml容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為0．418 mg／ml，1．021 mg／ml的混合對照品溶液。（2）供試品溶液的制備。精密稱取莪術油0．1 g于50 ml量瓶中，加無水乙醇定容，搖勻，精密量取5 ml至25 ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，取續濾液。

2 結果

2．1 標準曲線的繪制精密量取對照品的溶液適量，吉馬酮和呋喃二烯分別配成濃度為4．18～83．6 μg／ml，10．21～204．2 μg／ml的系列溶液，并按色譜條件分別進樣10 μl，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標，濃度（X）為橫坐標進行線性回歸，得吉馬酮和呋喃二烯的回歸方程分別為：Y=24．891X+30．217（r= 0．9999）；Y=26．132X+75．118（r=1．0000）

2．2 精密度試驗分別精密吸取對照品溶液吉馬酮（33．44 μg／ml）和呋喃二烯（81．68 μg／ml）各10 μl，按色譜條件重復進樣6次，測定吉馬酮和呋喃二烯的峰面積，結果分別為RSD=0．41%（n=6），RSD= 0．17%（n=6），表明儀器精密度良好。

2．3 穩定性試驗精密吸取同一供試品溶液（編號001）10 μl，制備后0，2，4，8，12，18，24 h進樣，吉馬酮和呋喃二烯峰面積的RSD分別為0．16%，1．00%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2．4 重復性實驗取同一批樣品，共6份，制備供試品溶液，按色譜條件進樣測定，分別計算含量和RSD，吉馬酮和呋喃二烯的平均含量（n=6）分別為80．47 mg／g，59．94 mg／g；RSD分別為0．90%，2．10%。

2．5 加樣回收率取已經測定含量的樣品6份，約10 mg，精密稱定，按樣品中各成分的含有量精密加入混合對照品溶液（吉馬酮0．400 mg／ml，呋喃二烯0．333 mg／ml）2 ml，制備供試品溶液，依法測定峰面積并計算回收率，吉馬酮和呋喃二烯的平均回收率（n=6）分別為103．2%，102．2%，RSD分別為1．44%，1．28%。

2．6 樣品含量測定取各批次莪術油，制備供試品溶液，依法進樣測定，用外標法計算吉馬酮和呋喃二烯的含量，結果見表2。

表 2 莪術油中吉馬酮、呋喃二烯的含量測定結果（mg／g，n=2）

3 討論

莪術為姜科植物蓬莪術 （Curcuma phaeocaulis Val）、廣西莪術 （Curcuma Kwangsiensis S．G．Lee et C．F．Liang）或溫莪術種子 （Curcuma wen yujinY．H．Chen et C．Ling）的干燥根莖［1］。具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化，調劑免疫，促進傷口愈合等作用，臨床應用十分廣泛［2-4］。揮發油中主要含有倍半萜類物質，被確定的有莪術醇、吉馬酮、莪術二酮、莪術烯、莪術內酯等有效成分［5］。目前，吉馬酮，呋喃二烯，莪術醇，莪術二酮等倍半萜類成分被認為是莪術油的主要藥理活性成分，莪術油的含量測定多以吉馬酮，莪術醇，莪術二酮，呋喃二烯為指標［6-9］。莪術油主要為單貼，倍半萜及其衍生物，其中不同成分如吉馬酮，呋喃二烯，莪術二酮等具有較強的揮發性［7-9］，可以采氣相色譜法（GC）進行測定，但由于呋喃二烯等為熱敏性在高溫下易轉化為莪術烯［8］，GC法無法測定其真實含量。本實驗參照相關文獻［1-7］建立了HPLC梯度洗脫法，為同時測定黔產莪術和種子揮發油中吉馬酮和呋喃二烯的含量提供了方法學參考。

根據2010版《藥典》［1］中規定：三種莪術品種只要求了揮發油總量不少于1．5%，對揮發油的具體成分，僅注明了溫莪術揮發油中吉馬酮和呋喃二烯含量不少于7．5%和10．0%，其余品種沒有要求。本實驗研究所得結果，為黔產莪術及其種子中揮發油的進一步質量控制提供了實驗數據。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：一部［M］．北京：中國醫藥科技出版社，2010：257-258，388．

［2］項秀娣，呂圭源，陳素紅，等．莪術油質量控制及藥理研究進展［J］．中國現代應用藥學，2010，27（11）：979-982．

［3］吳海霞，孫志明，王 勤．莪術油的藥理學研究及臨床應用研究進展概況［J］．中國中醫藥導刊，2011，13（1）：79-83．

［4］曾建紅，黃鳳香，廖 迎．莪術油的含量測定和抗腫瘤作用的新進展［J］．腫瘤藥學，2012，2（1）：19-22．

［5］展曉日，曾昭武，孟凡莉，等．莪術油藥學研究進展［J］．杭州師范大學學報，2011，10（5）：454-458．

［6］王佳麗，王 秀，夏 泉，等．莪術油中3種倍半萜類化合物對肝癌HepG2細胞增殖抑制作用的研究［J］．中成藥，2014，36（7）：1535-1539．

［7］張 鵬，祝 明，唐登峰，等．HPLC同時測定莪術油中3種倍半萜類成分的含量［J］．藥物分析雜志，2009，29（11）：1825-1827．

［8］姚慧娟，姚慧敏，卜書紅，等．RP-HPLC法同時測定莪術油自乳化軟膠囊中6種倍半帖成分的含量［J］．中國藥房，2013，24（11）：1010-1012．

［9］牛 沖，張冬梅，劉明潔．復方莪術油栓中呋喃二烯及莪術醇的測定［J］．中國藥品標準，2013，14（2）：131-133．

［2015-09-21收稿，2015-10-20修回］ ［本文編輯：李思睿］

Comparison on the components of extracted volatile oil from Guizhou curcuma zedoary and from their seeds

XV Zheng-xu①，ZHU Shi-guo，LUO Jun，et al．①Department ofPharmacologyofGuizhou Medical University，Guizhou，Guiyang 550025，China

Objective To study the methods of the quality control and the content ranges on Guizhou curcumazedoaryand seedsextracted volatileoil．Methods HPLC simultaneousdetectinggermacroneand furanodiene contents in Guizhou curcuma zedoary and its seeds was taken：The column was Diamonsil C18analytical column（4．6 mm×250 mm，5 mm）with gradient elution （60%A-95%A，20-35 min，0-20 min，95%A）of acetonitrile（A）-water（B）at the flow rate of 1 ml／min；Detection wave length was 216 nm，and the column temperature was maintained at 35℃，injected 10 μl．Results The detected concentration on germacrone and furandiene respectively were 4．18-83．6 μg／ml（r=0．9999），10．21-204．2 μg／ml（r=1．0000）which showed a good linear relationship；the average recoveries were（n=6）103．2%（RSD=1．44%），102．2%（RSD=1．28%），The experimental repeatability of RSD（n=6）were 0．90%，2．10%．Conclusion From Guizhou curcuma zedoary and its seeds extrated volatile oil quality can be controlled by controlling the germacrone and furanodiene contents．Controlling area on germacrone and furanodiene in Guizhou curcuma zedoary extrated oil respectively were 85．87%-100．10%，59．07% 78．92；Germacrone and furanodiene in its seeds extrated oil respectively were 65．69%-80．47%，59．94%-68．41%．

HPLC；Guizhou curcumazedoary；The seed ofGuizhou curcuma zedoary；Germacrone；Furanodiene

R944．1

A

10．14172/j．issn1671-4008．2016．03．025

貴州省廳校聯合項目（黔科合LG字［2011］006號）；貴州省社會發展項目（黔科合SY（2008）3027號）。

550025貴州貴陽，貴州醫科大學藥理教研室（許政旭，朱詩國，羅?。?；563002貴州遵義，遵義醫藥高等?？茖W校（潘年松，劉英波）

羅俊，Email：724730885＠qq．com