四川省非洲豬瘟抗體檢測結果與分析

李麗+鄧飛+裴超信+張睿+周莉媛+邵靚

摘要：非洲豬瘟（African swine fever，ASF）已在全球多個國家發生和流行，是我國重點防范的外來動物疫病。加強監測對該病的防范有重要意義。采用美國Kernel公司的非洲豬瘟病毒抗體檢測試劑盒對來源于四川省阿壩州、廣元、巴中、達州、廣安、成都、內江、資陽、遂寧和雅安等地的540份豬血清樣品進行了檢測，結果顯示均為ASFV抗體陰性。

關鍵詞：四川??；非洲豬瘟；抗體檢測

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2016）10-0010-03

非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）又稱為非洲豬瘟疫、疣豬病，是由雙鏈DNA 病毒感染引起的豬的一種急性、高度傳染性疾病[1]。其臨床癥狀和病理變化與豬瘟相似，表現為發熱、皮膚發紺和淋巴結、腎、胃腸黏膜充血、出血，急性型死亡率高達100%[2]。該病1921年首先發現于非洲東部國家肯尼亞，然后一直存在于撒哈拉以南的中、南部及西部的非洲國家[3]，據OIE統計，截至2012年底，全球共有48個國家報道發生過非洲豬瘟疫情。由于該病危害嚴重，OIE將其列為A 類法定報告動物疫病[4]，我國將其列為一類動物疫病。

雖然目前我國尚無非洲豬瘟疫情，但由于該病具有高傳染性及高死亡率且缺乏有效疫苗防治，隨著經濟全球化的發展，ASF對我國養豬業具有潛在的高風險性。加之近年來，該疫情在俄羅斯南部和北高加索地區繼續擴散，我國與俄羅斯毗鄰，因此跨境傳播防控壓力更為巨大。四川省自2015年積極開展實驗室的血清學檢測工作，加強對該病的持續監測，鄧飛等曾對四川省北部及東北部的5個地級市豬血清進行抗體檢測，結果均為陰性[5]。本試驗持續監測上述5個地市的樣品并新增成都等四川中部及東部的5個地級市豬血清監測?，F將其報道如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

血清樣本來源于四川省阿壩、廣元、巴中、達州、廣安的規模場及散養戶90份以及成都、內江、資陽、遂寧、雅安的規模場、散養戶及屠宰場450份，共計540份。

1.2 檢測試劑

美國Kernel公司的非洲豬瘟病毒抗體檢測試劑盒，批號：160118。

1.3 檢測方法

（1）使用前所有試劑恢復至室溫。

（2）在ELISA反應板上每孔加50 μL稀釋液，以50 μL/孔加入待檢樣品和陰陽性對照。陽性對照（E12、F12）和陰性對照（G12、H12）各設置兩孔，檢測樣品設置一孔，每板檢測樣品90份。

（3）封膜，振蕩，37 ℃孵育60 min。

（4）棄酶標板中的液體于裝有NaOH的容器中，洗板機洗板4次，最后一次吸水紙上輕拍酶標板。

（5）每孔加100 μL稀釋好的酶標結合物，封膜，37 ℃孵育30 min。

（6）洗板5次，最后一次吸水紙上輕拍酶標板。

（7）每孔加100 μL底物，室溫避光孵育15 min。

（8）每孔加100 μL終止液，振蕩混勻，酶標儀450 nm讀取OD值。

1.4 結果判定

結果有效性確認：陰性對照（G12、H12）平均OD值/陽性對照（E12、F12）平均OD值≥4為有效，本試驗檢測的6個反應板結果均有效。

PI值計算：PI=1-（OD450 nm樣品值/OD450 nm陰性平均值）×100%

結果判定：PI<40%，ASFV抗體陰性；PI≥40%，ASFV抗體陽性；PI在40%～50%之間為可疑，建議重新檢測或以其他方法檢測。

2 結果與分析

檢測樣品原始OD450 nm值見表1至表6。由表1～6可見，樣品的ASFV抗體均為陰性。

3 小結與討論

雖然我國目前沒有ASF疫情，但從世界流行、傳播、分布的態勢來看，ASF 傳入我國的風險性在不斷加大。分析如下：一是引進種豬，這也是ASF傳入的重大風險因素，病毒如果隨著引種進入我國，一旦在豬群寄居，很快會在豬群蔓延、流行。二是中國同流行和散發非洲豬瘟各國頻繁的經貿往來，將可能通過人員或產品將疫情帶入。三是令人堪憂的養豬現狀，國內很多豬場規模小，散養密度高，飼養管理不規范，環境衛生及生物安全不到位，這為非洲豬瘟的傳播創造了良好的條件。第四，目前尚沒有有效的疫苗和藥物用于ASF 控制，惟一的控制方式是確保豬群健康，杜絕外來病發生。

4 意義

通過分析近年來ASF在世界范圍內的流行趨勢，該病從北方傳入四川省的風險較大。因此，本實驗室加強了對四川省北部、中部地區的監測。此項實驗，一方面實時掌握四川省重點防范地區ASF的感染情況，防患于未然；另一方面，一旦四川省突發ASF，為“早、快、嚴、小”處置疫情提供科學依據和技術儲備，盡可能減小ASF對四川省養豬業帶來的危害。

參考文獻：

[1] MURPHY F A，GIBBS E P J，HORZINEK M A，et al. Asfarviridae and Iridoviridae[A].MURPHY F A，GIBBS E P J， HORZINEK M A，et al. Veterinary virology[M]. 3rd. San Diego：Academic Press，1999.293-300.

[2] 殷 震，劉景華.動物病毒學[M].第二版.北京：科學出版社，1997.1197-1205.

[3] PENRIT H M L，THOMSON G R，BASTOS A S S. African swine fever[A].COETEZR J A W，TUSTIN R C. Infectious diseases of Livestock[M].Southern Africa：Oxford University Press，2005.1087-1119.

[4] OIE. Terrestrial Animal Health Code. Chapter 2.6.6. African Swine Fever[EB/OL]. http：//www.oie.int/eng/normes/Mcode/ en_chapitre_2.6.6.htm，2007.

[5] 鄧 飛，李 麗.阻斷ELISA法檢測非洲豬瘟抗體[J].四川畜牧獸醫，2016（6）：22-23.