膽清膠囊的薄層色譜研究

孫明玉+萇玲+舒柯+王定兵+龍建丹+朱丹

【摘要】目的：探討膽清膠囊中牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別方法。方法：采用薄層色譜法。結果：薄層色譜鑒別斑點清晰，陰性對照無干擾。結論：該方法簡便、準確、重復性好，可用于膽清膠囊中牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別。

【關鍵詞】膽清膠囊；牛膽汁；鳳尾草；薄層色譜鑒別

【中圖分類號】R2841【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）05-0035-02

膽清膠囊由虎耳草、鳳尾草、大黃、牛膽汁等四味藥材組方，具有清熱利濕、舒肝利膽的功效，臨床主要用于肝膽濕熱所致的脘肋疼痛、呃逆嘔惡、口干口苦、大便秘結、以及膽囊炎、膽石癥見上述證候者[1]。在實驗中發現現行標準中牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別[1]，斑點不清晰，分離度不好，而且現行標準中鳳尾草的薄層鑒別所使用的展開劑中含有劇毒化學物質苯，對檢驗人員危害大。筆者通過深入研究，對牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別方法進行了改進，使得斑點清晰，分離度好，且陰性無干擾，改進了該品種的質量標準，建立了可用于膽清膠囊質量控制的新的薄層色譜鑒別方法。

1儀器與材料

11儀器超聲波清洗器（北京醫療設備廠，功率250W，頻率33kHz）；電子分析天平（梅特勒XPE205）；薄層色譜硅膠G（青島海洋化工有限公司）。

12材料膽酸（批號：100078-201415）、木犀草素（批號：111520-200504）購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純、水為超純水，其他試劑為分析純。樣品由廠家提供，陰性樣品自制。

2方法與結果

21牛膽汁的薄層色譜鑒別取本品內容物15g，加甲醇20mL，超聲處理20min，濾過，棄掉濾液，濾渣揮干溶劑，加入三氯甲烷20mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2mL使溶解，作為供試品溶液，另取膽酸對照品，加乙醇制成1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（3∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色熒光斑點。結果表明，樣品斑點清晰，分離度好，陰性無干擾，方法具有專屬性。見圖1。

22鳳尾草的薄層色譜鑒別取本品內容物2g，加75%乙醇50mL，超聲處理45min，濾過，濾液蒸干，殘渣依次用石油醚（60～90℃）、二氯甲烷各5mL，分別浸漬5min，棄去石油醚（60～90℃）液與二氯甲烷液，揮干，殘渣加水5mL使溶解，以2000r/min的速度離心5min，取上清液通過AB-8大孔吸附樹脂（50g，濕法裝柱，內徑為15cm），用水120mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇120mL洗脫，棄去洗脫液，繼用75%乙醇70mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；另取木犀草素對照品，加甲醇制成1mL含02mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取供試品溶液3μL、對照品溶液2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱數min， 置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色熒光斑點。同時，3批樣品斑點清晰，分離度好，陰性無干擾，方法具有專屬性。見圖2。

23溫度的考察對室溫、低溫（5℃）和高溫（40℃）進行了考察，結果展開溫度為室溫、5℃和40℃時，供試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點，且斑點清晰，分離度好，陰性無干擾，表明不同溫度展開條件對本試驗建立的方法無明顯影響。

24濕度的考察對高濕度（88%）、中等濕度（47%）和低濕度（32%）進行了考察，結果在展開溫度為室溫、濕度分別為88%、47%和32%時，供試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點，且斑點清晰，分離度好，陰性無干擾，表明不同濕度展開條件對本試驗建立的方法無明顯影響。

25 薄層板的考察選用青島海洋化工廠分廠硅膠G預制板（批號20100702），自制硅膠G板2種薄層板，斑點清晰，陰性無干擾，表明不同薄層板展開對本試驗建立的方法無明顯影響。

3討論

實驗過程中根據膽酸的性質，曾使用乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸（25∶25∶02）、乙酸乙酯-甲醇-稀乙酸（5∶3∶2）、異辛烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶7∶5）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（4∶5∶1）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（2∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸-甲醇（6∶32∶1∶1）等展開系統，經過反復試驗，最后采用本研究所使用的展開系統，結果斑點清晰，分離效果最優。

文獻表明鳳尾草主要含黃酮類有效成分[2]，本文采用AB-8大孔吸附樹脂對鳳尾草醇提物中黃酮類成分進行純化后，再進行薄層色譜鑒別，使得斑點清晰，分離度更好。

由于鳳尾草薄層鑒別現行標準中的展開系統含有苯，對檢驗人員有很大的危害，本文通過反復試驗，曾使用了三氯甲烷-甲醇-乙酸（6∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶2∶02）、環己烷-乙酸乙酯-甲酸（10∶5∶2）、環己烷-乙酸丁酯-乙酸（15∶5∶04）等展開系統，最后采用本文方法所使用的展開系統，結果斑點清晰，分離效果最優，陰性無干擾。

綜上，研究在原標準的基礎上，改進了牛膽汁和鳳尾草的薄層色譜鑒別方法，以使質控標準更趨完善，更有效控制了膽清膠囊的質量。

參考文獻

[1] WS-10049（ZD-0049）-2002-2011Z .國家藥品標準[S].

[2] 劉建群，劉健，蔣偉，等.鳳尾草藥材質量標準研究[J].中國中藥雜志，2015，40（10）：1855-1859.