HNL、PCT、CRP及膜聯蛋白A1對COPD合并呼吸系統感染的診斷價值

黃志衛，陸玲

(1欽州市第一人民醫院，廣西欽州535000；2北海市第四人民醫院)

HNL、PCT、CRP及膜聯蛋白A1對COPD合并呼吸系統感染的診斷價值

黃志衛1，陸玲2

(1欽州市第一人民醫院，廣西欽州535000；2北海市第四人民醫院)

目的 探討血清中性粒細胞載脂蛋白(HNL)、降鈣素原(PCT)、C反應蛋白(CRP)及外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1表達對慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并呼吸系統感染的診斷價值。方法 選擇COPD患者152例，其中合并呼吸系統病毒感染47例(病毒感染組)、細菌感染63例(細菌感染組)、無感染42例(對照組)。分別采用ELISA法、化學發光法和免疫速率法檢測各組血清HNL、PCT、CRP，采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法檢測各組外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白表達。結果 細菌感染組血清HNL、PCT、CRP水平高于病毒感染組和對照組(P均<0.05)，病毒感染組HNL、PCT、CRP水平與對照組比較P均>0.05。細菌感染組HNL、PCT、CRP陽性率分別為94.58%、85.71%、73.02%，均高于病毒感染組和對照組(P均<0.05)，病毒感染組血清HNL、PCT、CRP陽性率與對照組比較P均>0.05。以對照組為陰性組，以細菌感染組為陽性組構建ROC曲線，HNL、PCT、CRP診斷細菌感染的靈敏度分別為91.43%、82.91%和78.22%，特異度分別為94.71%、91.35%和82.44%，陽性預測值分別為90.21%、70.81%和60.73%。細菌感染組及病毒感染組患者外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白表達水平較對照組均升高，病毒感染組高于細菌感染組(P均<0.05)。結論 聯合檢測血清HNL、PCT和CRP有助于COPD合并呼吸系統細菌感染和病毒感染的鑒別診斷，外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1的表達可作為其有力補充。

慢性阻塞性肺疾??；中性粒細胞載脂蛋白；降鈣素原；C反應蛋白；膜聯蛋白A1；呼吸系統感染

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣流阻塞為特征的慢性呼吸道疾病，易出現反復急性加重，導致肺功能惡化甚至呼吸衰竭[1，2]。COPD急性加重常由微生物感染誘發[3]，然而病原體培養等手段費用較高且耗時較長。因此，早期診斷COPD患者呼吸系統是否并發微生物感染及感染微生物的類型，有助于早期干預，預防感染急性加重。研究顯示，細菌感染患者血清中性粒細胞載脂蛋白(HNL)和降鈣素原(PCT)水平明顯升高，可用于細菌感染的早期診斷、預后判斷及療效監測[4]。膜聯蛋白A1是近年新發現的一種抗炎蛋白，在調節炎癥代謝產物及單核細胞黏附過程中發揮重要作用[5]。本研究根據COPD患者感染的微生物類型(細菌感染和病毒感染)進行分組，比較其血清HNL、PCT、CRP及外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白的表達，探討上述指標在COPD患者合并呼吸系統感染的診斷價值，為臨床鑒別診斷提供快速、準確、方便的實驗室指標。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年6月～2016年6月我院收治的COPD患者152例，男91例、女61例，年齡40～90歲。均符合2014版GOLD中的診斷標準。合并呼吸系統細菌感染63例(經細菌培養證實)，男39例、女24例，年齡(67±12)歲；病毒感染47例(經相關病毒抗體檢測證實)，男28例、女19例，年齡(69±10)歲；無感染42例，男24例、女18例，年齡(65±8)歲。入選者近期未給予抗生素或抗病毒藥物治療。排除孕婦、合并其他感染性疾病、惡性腫瘤、嚴重肝腎功能不全等疾病患者。

1.2 血清HNL、PCT、CRP檢測 采集空腹靜脈血，離心分離血清，使用Rayto RT-6000全自動酶標儀檢測HNL，全自動生化分析儀檢測PCT、CRP。所有操作均嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA表達檢測 采用實時熒光定量PCR方法。使用總RNA提取試劑盒提取外周血單個核細胞中的總RNA，逆轉錄合成cDNA。以cDNA為模板，按照qPCR試劑盒說明書配制反應體系，進行擴增反應。采用Premer Premier軟件設計引物，引物序列：上游5′-CCTGGATCGCATAATGAAGA-3′；下游5′-CTAAGCCACCCATCAGATTGAGA-3′。反應條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環。以GAPDH為參照進行相對定量分析，用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達量。

1.4 外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1蛋白表達 使用蛋白提取試劑盒提取外周血單個核細胞全蛋白，取20 μL進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺SDS-PAGE凝膠電泳，半干轉15 V 6 min，5%脫脂奶粉封閉2 h，加入一抗4 ℃搖床孵育過夜，加入HRP標記的二抗，室溫搖床孵育2 h。凝膠成像分析儀上成像并進行分析。以β-actin為內參，計算膜聯蛋白A1與β-actin內參灰度值的比值。

2 結果

2.1 三組血清HNL、PCT、CRP水平比較 細菌感染組血清HNL、PCT、CRP較病毒感染組和對照組升高(P均<0.05)，病毒感染組各指標與對照組比較，P均>0.05。見表1。

表1 各組血清HNL、PCT、CRP水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與病毒感染組比較，#P<0.05。

2.2 各組HNL、PCT、CRP陽性率比較 以HNL>55.9 μg/L、PCT>0.05 μg/L、CRP>10 mg/L為陽性。各組HNL、PCT、CRP陽性率見表2。細菌感染組HNL、PCT、CRP陽性率高于病毒感染組和對照組(P均<0.05)，病毒感染組與對照組比較，P均>0.05。

表2 各組HNL、PCT、CRP陽性率比較(%)

注：與對照組比較，*P<0.05；與病毒感染組比較，#P<0.05。

2.3 HNL、PCT、CRP對COPD合并呼吸系統感染的診斷價值 由于病毒感染組血清HNL、PCT、CRP水平及陽性率與對照組比較無統計學差異，故本研究以細菌感染組為陽性組、對照組為陰性組構建ROC曲線，結果顯示，HNL和PCT的敏感性、特異性和陽性預測值均高于傳統檢測指標CRP，具有更好的診斷價值。見表3。

表3 血清HNL、PCT、CRP對COPD合并呼吸系統細菌感染的診斷價值

2.4 各組外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白表達比較 細菌感染組及病毒感染組外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白表達較對照組升高(P<0.05或<0.01)，病毒感染組高于細菌感染組(P均<0.01)。見表4。

表4 各組外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白表達比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與細菌感染組比較，#P<0.01。

3 討論

COPD急性加重指疾病過程中，患者短期內咳嗽、咳痰、氣喘和(或)喘息加重，痰量增多，呈膿性或黏液膿性，可伴發熱等炎癥明顯加重的表現，易導致肺功能惡化，甚至呼吸衰竭，危及患者的生命[6]。COPD的急性加重常由微生物感染誘發，主要包括細菌、病毒和真菌等[7，8]。病原體的分離培養是診斷細菌感染的金標準，但細菌培養操作復雜，需要特定的生長時間和生長環境；對標本要求高，臨床上以不合格標本居多；檢出率較低，需多次留取樣本反復送檢，給患者和醫務人員造成負擔。由于以上種種原因，導致醫務人員不能及時制定治療方案，錯過最佳治療時間，延誤病情。病原體抗原或抗體檢測的敏感性和特異性均較高，但檢測試劑只針對一種病原體，臨床應用具有一定的局限性。因此，早期診斷COPD患者呼吸系統是否并發微生物感染及感染微生物的類型，有助于在感染早期對COPD患者進行診斷和干預，預防COPD急性加重。

HNL是載脂蛋白超家族成員，是中性粒細胞的脫顆粒產物，在天然免疫的鐵消耗抑菌策略中主要作為乳鐵蛋白的抗菌作用的補充[9]。文獻報道，HNL比WBC、ESR、CRP等更能用于細菌感染的早期診斷和動態監測，是近年來備受關注的感染性指標。PCT由116個氨基酸組成活性的降鈣素前體，主要在肝臟產生，其他如單核細胞也可產生。文獻報道，PCT能夠有效預測院內感染患者的病死率，與感染密切相關[10，11]。CRP的臨床應用廣泛，主要用于細菌和病毒感染的鑒別診斷，但其峰值出現常常滯后于炎癥的發生，且在類風濕活動期、腫瘤等疾病患者的體內亦有增高，因此CRP臨床應用效果并不理想。本研究結果顯示，COPD合并細菌感染組HNL、PCT、CRP水平顯著高于COPD合并病毒感染組及對照組，說明三者可用于細菌感染的早期診斷，并可用于COPD合并細菌感染和病毒感染的鑒別診斷。細菌感染組血清HNL和PCT的敏感性、特異性、陽性預測值均高于CRP，說明HNL和PCT對COPD合并細菌感染的診斷價值優于CRP，且以HNL更優。

膜聯蛋白A1是一種重要的炎癥調控蛋白，在炎性代謝產物生成、中性粒細胞、單核細胞與內皮細胞黏附的過程中起重要作用[5，12]，但膜聯蛋白A1的表達在COPD合并細菌或病毒感染患者外周血單個核細胞中的表達變化如何未見報道。本研究顯示，細菌感染組和病毒感染組外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 mRNA及蛋白表達均較對照組升高，且病毒感染組高于細菌感染組。說明膜聯蛋白A1的表達變化可作為鑒別細菌和病毒感染的指標。由于病毒感染時HNL、PCT、CRP表達無明顯變化，而膜聯蛋白A1表達顯著升高，因此膜聯蛋白A1可作為病毒性感染診斷的有力補充。文獻報道，miRNA、p38磷酸化狀態等可調控膜聯蛋白A1表達[13，14]，但在COPD合并細菌或病毒感染患者外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1的表達變化機制尚未可知，需進一步研究。

綜上所述，血清HNL、PCT聯合外周血單個核細胞膜聯蛋白A1檢測，有利于COPD合并細菌或病毒感染的鑒別診斷；且三者檢測操作簡單、耗時較短、適用性強，值得臨床推廣應用。

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