藏酋猴類人ABO血型的鑒定與分析

楊 鋒，謝曉娟，周 亮，吳奇文，余曉君，曾 雅

（四川省醫學科學院·四川省人民醫院實驗動物質量檢測中心，四川 成都 610212））

發現藏酋猴與恒河猴、食蟹猴血型相比，具有顯著的獨特性，現將檢測結果報告如下，供同行參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康藏酋猴35只，雌性22只，雄性13只；健康恒河猴10只，雌性6只，雄性4只；健康食蟹猴10只，均為雌性。以上個體均來自四川省醫學科學院、四川省人民醫院實驗動物研究所養殖研究室，馴養繁殖許可證號“2004-馴繁-21-01”，生產許可證號“SCXK（川）2010-01”。

1.2 試劑及耗材

一次性血清采集管，批號121001，生產廠家：江蘇康健醫療用品有限公司；離心機：德國Eppendorf離心機，型號：5702；正常人O型紅細胞，由四川省醫學科學院，四川省人民醫院城東病區檢驗科提供；ABO血型反定型試劑盒（人血紅細胞），批號20130203，生產廠家：長春博訊生物技術有限責任公司；抗A抗B血型定型試劑（單克隆抗體），批號20120915，生產廠家：上海血液生物醫藥有限責任公司。

1.3 方法

1.3.1 動物準備 將藏酋猴用獸用氯胺酮（沈陽獸藥廠，批號20110908）麻醉，由飼養人員保定，暴露后肢靜脈，消毒后備用；

1.3.2 正定型樣本準備：用一次性紅頭血清采集管采集靜脈血2mL，3000r/min離心5min，棄去血清，吸取100μL紅細胞，加入生理鹽水，制成10%的紅細胞懸液待用；

1.3.3 反定型樣本準備：用一次性紅頭血清采集管采集靜脈血2mL，室溫靜置60min，4℃冰箱內靜置過夜，取出后室溫靜置30min，3800r/min離心10min，獲得新鮮血清備用；

1.3.3.1 人O型紅細胞制備 用移液器吸取新鮮人O型紅細胞適量，緩慢推入一次性離心管中，按1：9的比例等量加入0.9%的生理鹽水，輕微搖勻，1500轉/min，離心15min，棄去上清液，反復洗滌至上清液清亮后備用；

1.3.3.2 反定型檢測血清吸附處理 吸取制備好的200μL新鮮血清，與200uL洗滌后的正常人O型紅細胞混勻，輕微混勻，37℃恒溫孵育30min，1400r/min離心10min，取上清液備用；

1.3.4 實驗猴類人ABO血型檢定方法按《全國臨床檢驗操作規程》進行；

1.3.5 利用臨床已知血型的血清樣本進行平行比對檢測，做為方法驗證對照。

2 檢測結果

2.1 參考文獻報道的操作 本次檢測隨機選取4只藏酋猴，4只恒河猴進行正定型的平行檢測，用人抗A、抗B試劑與實驗猴紅細胞反應，無凝集反應出現，表明猴外周血紅細胞不表達A、B抗原，與文獻報道一致；

2.2 利用商品人ABO血型反定型盒，用標準人A、B紅細胞與制備好的待測血清反應，有明顯的特異性凝集現象出現，通過觀察反應結果，可明確的判斷藏酋猴的血型。

3 討論

動物的血型具有種屬的獨特性，在相關報道中顯示，各種動物均有特定的血型分類。非人靈長類獼猴屬動物血型在前期研究中發現，獼猴多為B型；食蟹猴有A型、B型和AB型，少數為O型；平頂猴有O型和B型。

試管法和卡式凝膠微柱法都是利用抗原抗體特異性結合反應進行血型的判斷，試管法觀察時間較長，出現凝集后的判斷需要一定的經驗積累；卡式微柱凝膠利用專用的離心機，在重力的作用下有效的將凝集紅細胞和游離紅細胞分離，方便觀察且利于標準化建立。

筆者認為，明確藏酋猴血型，建立非臨床靈長類動物“活體血庫”，在方案設計及科研試驗中做到“有針對性的”使用動物資源，具有非常重要的社會和經濟價值。