上海地區厭氧菌檢驗室間質量評價

陳 蓉， 劉學杰， 徐 蓉， 葛 平， 王敬華

（上海市臨床檢驗中心，上海 200126）

厭氧菌是一類只能在無氧條件下生長的細菌，其感染可發生于任何部位和臟器，以胸腔、腹腔和盆腔感染多見，占感染的70%～90%，其中1/3～2/3為混合感染[1]。在心內膜炎中厭氧菌的感染率為1.5%～10.0%，在血流感染中厭氧菌的感染率為10.0%～15.0%，在牙源性口面部感染性疾病中厭氧菌的感染率為90.0%～100.0%[2]，在吸入性肺炎中厭氧菌的感染率為90.0%，在腹膜炎、腹腔內膿腫中厭氧菌的感染率為95.0%，幾乎所有非性傳播造成的女性生殖道感染均與厭氧菌有關，由厭氧菌引起的尿路感染占1.0%～9.0%[2-4]。因此，厭氧菌檢驗在細菌性感染中占有十分重要的地位。廣泛、深入地開展厭氧菌檢測的實驗室檢查，為臨床提供及時準確的診斷和治療依據極為必要。

上海市臨床檢驗中心（Shanghai Center for Clinical Laboratory，SCCL）是上海市臨床檢驗質量控制組織評價機構。2012年9月，SCCL順利通過了ISO 17043能力驗證提供者的現場評審。SCCL每年按計劃向各實驗室發放未知樣本，對檢驗人員的技術水平進行考核，并對檢測結果作出總結[5]。SCCL自2014年開始開展厭氧菌檢驗室間質量評價（簡稱“室間質評”）活動，本研究旨在通過統計歷年厭氧菌檢驗室間質評活動反饋結果，了解目前上海地區醫療機構厭氧菌檢測的開展情況及檢測質量。

1 材料和方法

1.1 室間質評樣本制備

脫脂牛奶（光明牌）經110 ℃ 15 min高壓蒸汽滅菌冷卻后，分裝0.3 mL到無菌凍存管中備用。選取美國標準菌種庫菌株（American type culture collection，ATCC），將其保存到脫脂牛奶保存管內，置-80 ℃冰箱冷凍后，經冷凍干燥機制備成凍干品，低溫保存。低溫狀態下細菌新陳代謝受到抑制，細菌不繁殖、不死亡。

1.2 方法

1.2.1 室間質評方案設計 對上海市開展厭氧菌檢驗項目的醫療機構發放室間質評樣本。每年進行2次室間質評活動，每次發放5份樣本。為了考察實驗室對厭氧菌的檢出能力和鑒定準確性，設計部分樣本為陰性（不含厭氧菌），部分樣本為陽性（含有厭氧菌），要求實驗室運用日常檢測系統進行樣本檢測，并在規定日期內（自樣本接收后10日之內）將檢測結果上報至SCCL數據庫，超過規定時間系統將不再接收數據。

1.2.2 結果評價與分析 依據回報的檢測結果與預期結果的符合性統計各實驗室的得分。對含有厭氧菌的陽性樣本正確鑒定到種水平得20分；正確鑒定到屬水平，而種水平錯誤，得10分；未檢測到厭氧菌不得分。每次活動總成績≥80分為合格，對成績進行匯總并對錯誤的檢測結果進行統計分析。

2 結果

2.1 實驗室回報情況

厭氧菌檢驗室間質評活動開展至今共發放樣本40份（陰性15份，陽性25份），陽性樣本中的厭氧菌涉及5個屬15個種，發放的種類和次數見表1。最新的2017年上海地區醫療機構厭氧菌檢驗項目的開展情況見表2，檢測系統見表3。

表1 厭氧菌發放種類及次數

2.2 實驗室檢測能力評價

2014—2017年共開展了8次厭氧菌檢驗室間質評活動，2014年第1次室間質評的合格率為96.2%（25/26）（有1家醫院成績不合格），之后3年室間質評的合格率均達到100.0%，尤其是2015年和2016年成績優秀率（滿分100分為優秀）達到了100.0%，見表4。上海地區開展厭氧菌檢驗項目的醫療機構由2014年的26家逐年增加到2017年的43家，增加了60.5%。

表3 2017年上海地區醫療機構的厭氧菌檢測系統

在25株厭氧菌中有17株鑒定結果的符合率為100.0%，其中消化鏈球菌屬100.0%（1/1）、丙酸桿菌屬100.0%（1/1）、梭狀芽孢桿菌屬88.9%（8/9）、擬桿菌屬46.2%（6/13）、普雷沃菌屬100.0%（1/1），擬桿菌屬的鑒定符合率偏低。鑒定結果不符的樣本見表5。

表4 2014—2017年厭氧菌檢驗室間質評成績 [實驗室數（%）]

表5 鑒定結果不符的樣本

3 討論

臨床厭氧菌感染非常普遍，需要通過細菌培養、鑒定明確診斷。由于厭氧菌生化反應項目陰性較多，故依據細菌傳統表型特征來鑒定厭氧菌是一個難題，僅能滿足臨床部分厭氧菌的鑒定需要，新型的Bruker MS和Vitek MS全自動快速微生物質譜檢測系統未在臨床工作中普及[6-8]，因此厭氧菌檢測過程的質量保證工作十分重要。室間質評活動能夠有效地監測實驗室檢測能力，發現日常檢測工作中存在的問題，是質量保證的重要手段。

本研究通過開展厭氧菌檢驗室間質評活動，對上海地區醫療機構厭氧菌的檢測能力進行了評價，結果表明上海地區該項目整體檢測能力較好，2017年2次室間質評未得滿分的實驗室分別占4.7%和2.3%，說明個別實驗室的檢測能力有待進一步提高。

實驗室回報結果發生錯誤的原因可能為：（1）多數厭氧菌菌落較小、形態易發生變化、特征不典型等導致識別困難；（2）厭氧菌的革蘭染色比需氧菌困難，一般培養24 h以上的厭氧菌容易染成革蘭陰性，此種現象尤其容易出現在梭菌屬、消化鏈球菌屬和真桿菌屬；（3）由于厭氧菌對氧氣極為敏感，整個鑒定過程必須在有限的時間內完成；（4）使用厭氧菌鑒定試劑鑒定時要求厭氧菌濃度必須達到3個麥氏單位。我們認為可從上述幾方面考慮，加強監管，提高檢測質量。

目前我國僅少部分醫院把厭氧菌檢驗作為常規項目并規范開展[9]，上海地區開展厭氧菌檢驗的醫療機構數雖然在逐年增加，但是到2017年底開展率也僅有31.4%，主要集中在三級綜合性醫院。未能廣泛開展厭氧菌實驗室檢測的主要原因有：（1）成本偏高。厭氧手套箱、厭氧工作站儀器較昂貴，培養鑒定成本高。（2）操作復雜。大氣中的氧對厭氧菌有毒性作用，需要盡量減少厭氧樣本在空氣中的暴露時間。因此，厭氧樣本需要應用厭氧袋等特殊厭氧裝置盡快運送，實驗室接收臨床樣本后需要在30 min內處理完畢。（3）厭氧菌培養報告時間長。厭氧菌實驗室檢測一般需要數天，臨床不能得到及時有效的反饋信息，故送檢的積極性不高，進一步影響了厭氧菌實驗室檢測的常規開展。（4）某些臨床醫生誤認為甲硝唑是治療厭氧菌感染的唯一選擇，無需進行厭氧菌檢查。但近年已出現耐甲硝唑厭氧菌[10]，單一經驗性治療藥物已無法取得滿意的治療效果，因此需要進行厭氧菌培養和藥物敏感性試驗，選用敏感抗菌藥物。

我們建議根據醫院規模，對厭氧菌檢測進行分級要求和分級報告，1級鑒定可根據耐氧試驗結果、革蘭染色反應、菌落特點，提供厭氧菌初步推斷報告。2級鑒定是在1級鑒定報告的基礎上，運用鑒定系統鑒定[11]。這將有利于提高厭氧菌實驗室檢測的普及率。

隨著醫療機構對厭氧菌檢測重視度的提高，越來越多的臨床實驗室逐步會開展厭氧菌檢測，相關質量保證工作對于保證結果的準確十分重要。我們希望通過室間質評項目的開展，幫助臨床實驗室及時發現檢測中存在的問題，保證檢測質量。

[1] 王左，蔣棟能. 厭氧菌內源性感染的臨床研究進展[J]. 檢驗醫學與臨床，2010，7（14）：1517-1519.

[2] 曾軍. 口腔厭氧菌感染的菌群分布及奧硝唑治療口腔厭氧菌感染的療效[J]. 中外醫療，2012，31（14）：122-123.

[3] 于巧亞，王雪濤. 臨床厭氧菌的研究現狀[J]. 世界最新醫學信息文摘（電子版），2014，21：123.

[4] 王菡僑，劉樹卿，楊敬芳，等. 192例肺部感染的厭氧菌菌譜分析[J]. 中華醫院感染學雜志，2001，11（1）：68-69.

[5] 張新秀. 微生物檢驗在臨床應用中的質量控制[J].臨床和實驗醫學雜志，2011，10（5）：396-397.

[6] GARNER O，MOCHON A，BRANDA J，et al.Multi-centre evaluation of mass spectrometric identification of anaerobic bacteria using the VITEK?MS system[J]. Clin Microbiol Infect，2014，20（4）：335-339.

[7] NAGY E. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry：a new possibility for the identification and typing of anaerobic bacteria[J]. Future Microbiol，2014，9（2）：217-233.

[8] BARBA M J，FERNáNDEZ A，OVIA?O M，et al.Evaluation of MALDI-TOF mass spectrometry for identification of anaerobic bacteria[J]. Anaerobe，2014，30：126-128.

[9] 蘇建榮，馬紀平. 實驗室開展厭氧菌檢查的重要性[J]. 中華檢驗醫學雜志，2007，30（1）：12-13.

[10] 何俊霖，俞立英，陳嘉臻. 牙周膿腫專性厭氧菌的分離及其對抗生素耐藥性的研究[J]. 中華口腔醫學雜志，2012，47（12）：719-724.

[11] 張秀珍. 要加強我國臨床細菌室厭氧菌的培養技術[J]. 中華檢驗醫學雜志，2002，25（3）：133-134.