高效液相色譜法測定苯海拉明乳膏中鹽酸苯海拉明的含量

王英超，于 澤，王 鵬，馮婉玉

(北京大學人民醫院藥劑科，北京 100044)

苯海拉明乳膏是由鹽酸苯海拉明和二甲硅油石蠟乳膏組成的醫院制劑，主要作為抗過敏藥，用于治療過敏性皮膚病。長期的臨床實踐證實，該藥具有很好的療效，受到患者和醫師的普遍認可。本研究采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測定苯海拉明乳膏中鹽酸苯海拉明的含量[1-4]，為該制劑的質量控制提供依據。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1200型高效液相色譜系統，包括G1312A型二元輸液泵、G1329A型自動進樣器、G1316A型柱溫箱、G1379B型脫氣機及G1315D型檢測器(美國Agilent公司)；Mini-13 K型微型高速離心機(杭州奧盛儀器有限公司)；Vortex-Genie型渦旋儀(Scientific Industries公司)；GM-50過濾器(天津騰達過濾器件廠)；CPA225D型萬分之一天平(德國Sartorius公司)。

1.2 藥品與試劑

鹽酸苯海拉明對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100066-200807，純度≥99%)；苯海拉明乳膏(北京大學人民醫院；批準文號：京藥制字H20064300；批號：171208)；甲醇、乙腈(HPLC級，Fisher公司)；氨水(北京北化精細化學品有限責任公司，批號：20151009)；Direct-Q?超純水系統(美國Millipore公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Venusil XBP CN柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水-氨水(V∶V∶V=75 ∶25 ∶0.5)；檢測波長：258 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃；進樣量：5 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸苯海拉明標準溶液：精密稱定鹽酸苯海拉明對照品0.1 g，置于100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度并混勻，制得1 mg/ml的鹽酸苯海拉明儲備液。精密吸取1、2、4、6及8 ml置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為0.1、0.2、0.4、0.6及0.8 mg/ml鹽酸苯海拉明標準溶液。

2.2.2 質控樣品標準溶液：精密稱定鹽酸苯海拉明對照品0.01 g，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度并混勻，配制成1 mg/ml的鹽酸苯海拉明儲備液。精密吸取1、4 ml置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為0.1、0.4 mg/ml鹽酸苯海拉明質控樣品標準溶液。

2.2.3 供試品溶液：精密稱取5%苯海拉明乳膏1 g(相當于鹽酸苯海拉明50 mg)，置于100 ml燒杯中，加入甲醇40 ml，80 ℃水浴加熱10 min，攪拌，趁熱定量轉移至100 ml容量瓶中，放冷至室溫(25 ℃)，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，冰浴冷卻2 h以上，取出后迅速過濾，取續濾液作為供試品溶液進樣分析。

2.2.4 陰性樣品溶液：按處方比例，配制不含鹽酸苯海拉明的制劑，再按“2.2.3”項下方法制備即得。

2.3 方法專屬性試驗

取空白溶劑(甲醇)、鹽酸苯海拉明對照品溶液(0.6 mg/ml)、供試品溶液(0.5 mg/ml)、鹽酸苯海拉明-二苯酮溶液(0.5 mg/ml)及陰性對照品溶液(空白基質)各5 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結果表明，空白溶劑和供試品中的輔料不干擾鹽酸苯海拉明的測定，方法專屬性良好，見圖1。

A.空白溶劑；B.鹽酸苯海拉明對照品溶液(0.6 mg/ml)；C.供試品溶液(0.5 mg/ml)；D.鹽酸苯海拉明-二苯酮溶液(0.5 mg/ml)；E.陰性對照溶液A. blank solvent; B. diphenhydramine hydrochloride reference solution (0.6 mg/ml); C. test solution (0.5 mg/ml); D. diphenhydramine hydrochloride-diphenylketone solution(0.5 mg/m); E. negative reference solution

2.4 線性關系考察

取質量濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8及1.0 mg/ml的鹽酸苯海拉明標準溶液5 μl進樣分析，記錄色譜圖。以鹽酸苯海拉明的質量濃度為橫坐標(X)，鹽酸苯海拉明的峰面積為縱坐標(Y)，用加權最小二乘法(W=1/x2)進行回歸，得標準曲線的回歸方程。鹽酸苯海拉明的線性方程為Y=0.03X+24.96，R2=0.999 8；結果表明，鹽酸苯海拉明在0.1～1.0 mg/ml范圍內，質量濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取鹽酸苯海拉明低、中及高質量濃度(0.1、0.4及1 mg/ml)質控樣品溶液，分別連續進樣6次，得日內精密度；連續進樣3 d，得日間精密度[5-6]。記錄鹽酸苯海拉明峰面積，結果顯示，RSD均<0.5%，表明方法精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密稱定鹽酸苯海拉明對照品0.043 4 g，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成0.434 mg/ml鹽酸苯海拉明對照品溶液，分別于0、2、4、8及24 h取5 μl進樣分析，記錄鹽酸苯海拉明峰面積，結果RSD為0.25%，表明鹽酸苯海拉明溶液在24 h內穩定性良好。

2.7 絕對回收率試驗

按照低、中及高質量濃度分別精密稱取3份鹽酸苯海拉明原料藥，置于100 ml燒杯中，分別加入苯海拉明乳膏空白基質1 g，加入40 ml甲醇，置于80 ℃水浴加熱10 min，攪拌，趁熱定量轉移至100 ml容量瓶中，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，冰浴冷卻2 h以上，取出后迅速過濾，取續濾液5 μl進樣分析，記錄色譜圖，計算平均回收率[7-8]。結果表明，低、中及高3個級別質量濃度的絕對回收率在98.0%～102.0%范圍內，符合要求，見表1。

2.8 重復性試驗

準確稱取苯海拉明乳膏(批號：171208，標示含量5%)1 g(相當于鹽酸苯海拉明50 mg)，置于100 ml燒杯中，加入甲醇40 ml，置于80 ℃水浴加熱10 min，攪拌，趁熱定量轉移至100 ml容量瓶中，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，冰浴冷卻2 h以上，取出后迅速過濾，取續濾液5 μl進樣分析，平行操作6份，記錄色譜圖[9-10]。結果顯示，RSD為0.43%，表明本方法重復性較好。

表1 絕對回收率試驗結果Tab 1 Results of absolute recovery test

3 討論

本研究比較了不同溶劑如水、甲醇、乙醇及其混合液對樣品溶解效果的影響[11-13]。結果顯示，單用水做溶劑時，樣品不溶；常溫條件下甲醇溶解效果不佳。因此，考慮采用以加熱的方式促進本品在甲醇中溶解，并經放冷迅速過濾，綜合效果較好。本研究考察了流動相中水相與有機相的比例，結果顯示，二者比例為25 ∶75時，出峰時間較合適且不受雜峰干擾，而加入0.5%的氨水則可將峰形調至最佳[14-15]。

本研究建立的苯海拉明乳膏中鹽酸苯海拉明的含量測定方法準確度較高，重現性較好，操作簡便，為醫院制劑苯海拉明乳膏的質量控制提供了科學依據。

[1]李傍娣，程江.HPLC法測定鹽酸苯海拉明乳膏的含量[J].西北藥學雜志，2012，27(1)：41-43.

[2]郭美華，馬妍妍，劉世萍.鹽酸苯海拉明乳膏的制備及質量控制[J].中國藥師，2010，13(3)：392-393.

[3]張軍，李瑞林，翟青，等.高效液相色譜法測定鹽酸苯海拉明霜的含量[J].中國醫院藥學雜志，2003，23(4)：249-250.

[4]會書鈞.高效液相法測定復方樟腦乳膏中鹽酸苯海拉明的含量[J].藥品鑒定，2009，6(28)：48-49.

[5]魏鋒，劉薇，嚴華，等.我國中藥材及飲片的質量情況及有關問題分析[J].中國藥學雜志，2015，4(50)：277-283.

[6]于澤，鐘雪，李泰鋒，等.高效液相色譜法測定人全血中羥氯喹濃度[J].中國臨床藥理學雜志，2017，33(11)：1013-1015.

[7]朱雪妍.HPLC-ELSD法測定胃可寧片中貝母素甲和貝母素乙含量[J].中國醫院用藥評價與分析，2015，15(2)：165-167.

[8]安珍珍，楊云，任磊，等.RP-HPLC法同時測定復方苯海拉明滴鼻液中3種成分的含量[J].中國藥房，2017，28(18)：2573-2575.

[9]劉煒，曾蔚欣，劉禮斌，等.反相離子對高效液相色譜法測定復方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量[J].中國藥房，2011，22(41)：3894-3896.

[10] 顏挺，唐楊，晁若冰.反相離子對高效液相色譜法測定中藥橡膠膏中鹽酸苯海拉明的含量[J].藥物分析雜志，2008，28(3)：437-439.

[11] 植國繁，巫玲玲，藍彬，等.復方鹽酸苯海拉明糖漿質量控制研究[J].中國藥業，2016，25(6)：59-61.

[12] 胡立祿，高全清，劉振良.苯海拉明聯合潑尼松預防碘造影劑過敏反應的臨床觀察[J].中國藥房，2016，27(6)：765-767.

[13] 王心怡，張志榮.美吡拉敏敏感的、逆質子有機陽離子轉運體的研究進展[J].藥學學報，2016，51(6)：886-891.

[14] 賈恒明，張華峰，戴博，等.HPLC法測定止癢靈搽劑中鹽酸苯海拉明的含量[J].解放軍藥學學報，2016，32(6)：538-539.

[15] 余秀萍.RP-HPLC法測定玉真散膠囊中歐前胡素的含量[J].中國醫院用藥評價與分析，2016，16(s1)：275-277.