鹽酸萬古霉素產品質量與貯存環境的相關性研究

劉春艷

摘 要：本文采用高效液相法研究貯存環境對鹽酸萬古霉素原料的質量影響。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（284mm×4.6mm，5μm），三乙胺緩沖液（用磷酸調節pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動相，檢測波長為254nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。鹽酸萬古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系（r=0.99995）。鹽酸萬古霉素平均回收率分別為98.9%。結論：本法簡便、準確，可用于鹽酸萬古霉素原料的產品質量研究。

關鍵詞：鹽酸萬古霉素原料；質量；研究

萬古霉素是一種糖肽類抗生素。鹽酸萬古霉素為萬古霉素鹽酸鹽。鹽酸萬古霉素用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌及其它細菌所致的感染：敗血癥、感染性心內膜炎、骨髓炎、關節炎、灼傷、手術創傷等[1-2]。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography＼HPLC）以液體為流動相，采用高壓輸液系統在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。本文采用高效液相法研究貯存環境對鹽酸萬古霉素原料的質量影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：GW-UN超純水器（北京普析通用儀器有限責任公司）；DOA-P504-BN無油隔膜真空泵（上海洽姆儀器科技有限公司）；LAB-UPF-10T分析型實驗室專用純水機（臺上式）（四川蘭博環保設備有限公司）；KQ-100KDB高功率數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；GX-2050高溫循環器（上海市百典儀器廠）；電子分析天平（上海魅宇儀器設備有限公司）；GI-3000-12二元高壓梯度液相色譜儀（通用（深圳）儀器有限公司）；GENESYS 180紫外可見分光光度計（上海力晶科學儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（284mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：鹽酸萬古霉素購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇（廣州艾欣科學儀器有限公司）、三乙胺（廣州艾欣科學儀器有限公司）、磷酸（廣州艾欣科學儀器有限公司）、乙腈（瀅寶科學儀器（上海）有限公司）、四氫呋喃（瀅寶科學儀器（上海）有限公司）、磷酸氫二鈉（廣州艾欣科學儀器有限公司）、三乙胺（廣州艾欣科學儀器有限公司）。

1.5 試藥：鹽酸萬古霉素原料

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[3-6]。流動相：三乙胺緩沖液（用磷酸調節pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動相，檢測波長：254nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按鹽酸萬古霉素峰計算應不得低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸萬古霉素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。

2.3 樣品的制備

取本品，置容量瓶中，精密加入流動相20mL，超聲處理5分鐘，放冷并加流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，按2.1項下的色譜條件，取續濾液10μl，注入液相色譜儀。

2.4 精密度試驗

精密稱取鹽酸萬古霉素對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為0.5mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取鹽酸萬古霉素對照品85mg，置50ml容量瓶中，加入流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5、1、2、3、4mL，置于5mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。結果表明，鹽酸萬古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 重現性試驗

稱取同一批的鹽酸萬古霉素原料樣品6份，按測定方法項下的方法測定并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.88%，結果表明此方法的重現性良好。

2.7 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知純度的原料9份，置量瓶中，分別精密加入鹽酸萬古霉素對照品，按項下方法制備成80%、100%、60%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.2%，RSD為0.86%。

2.8 樣品穩定性試驗

取同一批鹽酸萬古霉素原料樣品，按2.3項下的方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1.5、2小時，精密吸取供試品溶液10？滋l注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定鹽酸萬古霉素原料中鹽酸萬古霉素的RSD=0.82%。結果表明供試品2小時內穩定。

2.9 貯存環境

本文通過將鹽酸萬古霉素原料藥分別進行常規包裝、充高純氮包裝、充高純氧包裝，分別存放于2-8℃和40℃兩種溫度條件下，考察儲存條件對質量的影響。

3 討論

分別考察甲醇-水-三乙胺（18∶85：0.1）；三乙胺緩沖液（用磷酸調節pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（90∶9∶1）；0.01mol/L磷酸氫二鈉-磷酸緩沖液（p H=2.2）-水（80：20）；三乙胺緩沖液（用磷酸調節pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動相，不同比例的流動相，結果以三乙胺緩沖液（用磷酸調節pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用三乙胺緩沖液（用磷酸調節pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動相為流動相。本實驗表明此方法可用于鹽酸萬古霉素原料中鹽酸萬古霉素的含量測定。本法操作簡便，結果準確可靠，可用于本品中鹽酸萬古霉素的質量控制。實驗結果表明鹽酸萬古霉素充氮包裝后貯存在2-8℃可以大大抑制產品的降解。

參考文獻

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[2]范洪偉，李華茵，焦力，許瑩，曹彬，黃紹光，何禮賢，張杰，田丁，陳惠德，王愛霞.國產鹽酸萬古霉素治療耐藥G～+球菌感染的有效性和安全性臨床研究[J].中國新藥雜志，2010（05）.

[3]趙瑞柯，曹俊華.高效液相色譜法同時測定萬古霉素和去甲萬古霉素的血藥濃度[J].海峽藥學，2017（11）.

[4]陳唯，夏宗玲，陳榮，郁蕾蕾，鄒素蘭.高效液相色譜法測定人血清中鹽酸去甲萬古霉素含量[J].海峽藥學，2009（12）.

[5]張敏，張遠，楊勇，李剛，龍恩武，閆峻峰.國產與進口注射用萬古霉素與兩種溶媒的配伍研究[J].中國臨床藥理學雜志，2016（16）.

[6]戴智勇，李新中，尹桃，羅健.反相高效液相色譜法測定人血漿中萬古霉素濃度[J].中國抗生素雜志，2002（10）.