補骨脂果皮和種子中化學成分的分布規律研究*

李 敏，楊君君，楊 靜，王躍飛，柴 欣

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津市現代中藥重點實驗室，天津 300193）

補骨脂為豆科植物補骨脂（Psoralea corylifolia L.）的果實，是中國傳統中藥，臨床應用廣泛。補骨脂具有溫腎助陽、納氣平喘、溫脾止瀉的功效，內用治療腰膝冷痛、滑精、遺尿、虛寒咳嗽，外用治療白癜風[1]?，F代藥理研究表明，補骨脂具有增加心肌收縮力、增強免疫[2]、擴張血管、抗菌[3-4]、抗炎[5-6]、抗氧化[7]、抗腫瘤[8-9]、雌激素樣等作用[10-11]。生補骨脂由果皮和種子構成，果皮中含有壁內腺、維管束等；種子由種皮、子葉、胚等組成，具體結構見圖1[12]。文獻報道補骨脂中含有100多種化合物，主要包括香豆素、黃酮、單萜酚類化合物[13-15]。

中藥安全性問題日益引起人們的關注，關系中醫藥的健康持續發展[16]。隨著補骨脂的臨床應用不斷擴大，其肝臟毒性問題也倍受關注。周昆等研究表明補骨脂水提取液具有肝毒性，且水提液中主要成分為補骨脂苷、異補骨脂苷、補骨脂素和異補骨脂素[17]；Cheung等報道了補骨脂中相關化學成分可導致肝臟毒性[18]。補骨脂苷和異補骨脂苷在腸道菌群作用下轉化為補骨脂素和異補骨脂素，導致補骨脂素和異補骨脂素的大量吸收，可能是導致肝臟毒性的原因[19]。

圖1 補骨脂橫切面簡圖Fig.1 Cross-section diagram of Fructus Psoralea

本研究采用超高效液相色譜法系統研究補骨脂香豆素、黃酮、單萜酚等化學成分在果皮和種子中的分布情況，以期闡明其化合物的分布規律，為補骨脂的成分研究、加工炮制工藝研究奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器 超高效液相色譜儀：Waters ACQUITYTMUPLCsystem（美國沃特世公司），XS205型十萬分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司），AL 204型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司），SCIENTZSB 25-12DTN型超聲波清洗器（寧波新芝生物有限公司，功率：300 W，頻率：40 kHz），TGL-16C 型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠），Milli-Q型超純水系統（美國Millipore公司）。

1.2 藥品及試劑 補骨脂素（批號110738-201313）、異補骨脂素（批號 110739-201115）均購自中國食品藥品檢定研究院；補骨脂苷、異補骨脂苷、補骨脂香豆雌烷 B、補骨脂定、4″，5″-去氫異補骨脂定、補骨脂甲素、補骨脂乙素、新補骨脂異黃酮、巴庫查爾酮、補骨脂寧、Corylifol A、Corylifol C、補骨脂查爾酮、補骨脂酚均為實驗室自制[NMR、MS鑒定化合物結構，超高效液相色譜-紫外法（UPLC-UV）分析純度≥98%]。甲醇、乙腈均為色譜純，甲酸為分析純，水為超純水。

生補骨脂：由天津中醫藥大學李天祥教授鑒定為豆科植物補骨脂（Psoralea corylifolia L.）的干燥成熟果實，產地分別為廣西（GX）、河北 1（HB 1）、河北2（HB 2）、河南（HN）。

生補骨脂果皮、種子：取生補骨脂藥材，用刀片將果皮和種子剝離，備用。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7μm）；流動相：甲醇（A）-0.1%甲酸水（B）溶液，梯度洗脫（0～20 min，10%→74%A；20～25min，74%→90%A）；柱溫 60℃；流速 0.3mL/min；檢測波長：246 nm；進樣量：2μL。

表1 生補骨脂果皮和種子的質量Tab.1 Mass of pericarp and seed of Fructus Psoralea

2.2 對照品溶液制備 分別取補骨脂苷、異補骨脂苷、補骨脂素、異補骨脂素、補骨脂香豆雌烷B、Corylifol C、巴庫查爾酮、補骨脂甲素、新補骨脂異黃酮、補骨脂寧、補骨脂乙素、補骨脂定、4″，5″-去氫異補骨脂定、Corylifol A、補骨脂查爾酮、補骨脂酚標準品適量，精密稱定，制成質量濃度分別為1 mg/mL的對照品儲備液，備用。

分別取上述對照品儲備液適量，混勻，得對照品工作液，其濃度為補骨脂苷40.80μg/mL、異補骨脂苷41.20μg/mL、補骨脂素106.00μg/mL、異補骨脂素104.00μg/mL、補骨脂香豆雌烷B 40.83μg/mL、Corylifol C46.67μg/mL、巴庫查爾酮 42.92μg/mL、補骨脂甲素42.08μg/mL、新補骨脂異黃酮41.25μg/mL、補骨脂寧50.42μg/mL、補骨脂乙素47.08μg/mL、補骨脂定 45.00 μg/mL、4″，5″-去氫異補骨脂定43.33μg/mL、Corylifol A 44.17μg/mL、補骨脂查爾酮42.08μg/mL、補骨脂酚41.67μg/mL。

2.3 供試品溶液制備 取果皮，粉碎，取粉末0.3 g，精密稱定，置于100 mL的容量瓶中，加適量甲醇，密塞，60℃超聲處理（功率300 W，頻率 40 kHz）30 min，放冷，甲醇定容至刻度，搖勻，14 000 r/min離心10 min，取上清液1 mL，加1 mL 30%甲醇水溶液，搖勻，即得果皮供試品溶液，備用。

取種子，粉碎，取粉末0.25 g，精密稱定，置于100 mL的容量瓶中，加適量甲醇，密塞，60℃超聲處理（功率 300 W，頻率 40 kHz）30 min，放冷，甲醇定容至刻度，搖勻，14 000 r/min離心10 min，取上清液1 mL，加1 mL 30%甲醇水溶液，搖勻，即得種子供試品溶液，備用。

3 結果與討論

3.1 補骨脂果皮和種子質量分布情況 取4批生補骨脂藥材，按“1.2”項下方法處理生補骨脂，分離生補骨脂果皮和種子，分別稱取質量，結果見表1。

由表1可知，產地分別為廣西、河北、河南的生補骨脂，種子占生補骨脂總質量的54.29%～66.67%；果皮占生補骨脂總質量的33.33%～45.71%。

3.2 補骨脂果皮和種子中化合物分布規律研究 取生補骨脂果皮、種子，按“2.3”項下供試品制備方法制備果皮、種子供試品溶液，每種樣品稱取2份，按“2.1”項下方法分析供試品溶及對照品溶液中主要成分，每份樣品平行進樣2次，色譜圖見圖2。

為了獲得生補骨脂中化合物分布情況，分別讀取果皮和種子供試品溶液中各化合物的峰面積，按照下式計算生補骨脂果皮和種子中化合物的相對含量，分別標記為Pi%和Pi′%，計算公式如下：

其中，i代表化合物，Pi%為化合物i在果皮中的量占該化合物總量的百分比；M為生補骨脂的果皮質量；M′為生補骨脂的種子質量；A為果皮供試品溶液中化合物i的峰面積；A′為種子供試品溶液中化合物i的峰面積；m為制備果皮供試品溶液時的果皮粉末取樣量；m′為制備種子供試品溶液時的種子粉末取樣量。Pi′%為化合物i在種子中的量占該化合物總量的百分比。計算結果見表2。

由表2可知，生補骨脂種子中主要含有補骨脂苷、異補骨脂苷，分別占生補骨脂果實中補骨脂苷、異補骨脂苷總量的89.63%以上；補骨脂素、異補骨脂素、補骨脂定、4″，5″-去氫異補骨脂定分別占其總量的16.67%～63.39%；含有少量黃酮和單萜酚類化合物。果皮中主要含有黃酮和單萜酚類化合物，果皮中Corylifol C、巴庫查爾酮、補骨脂甲素、補骨脂寧、補骨脂酚等黃酮和單萜酚類化合物分別占其總量的80.86%以上；補骨脂苷、異補骨脂苷分別占其總量的10.37%以下，補骨脂素、異補骨脂素占其總量的36.61%～76.87%，補骨脂香豆雌烷B占其總量的63.33%，補骨脂定和4″，5″-去氫異補骨脂定占其總量的42.55%～83.33%。

圖2 對照品溶液（A）、補骨脂果皮（B）、種子（C）供試品溶液色譜圖Fig.2 Chromatograms of the standard solution(A)and sample solution of pericarp(B)and seed(C)of Fructus Psoralea

表2 生補骨脂果皮和種子中化合物的分布情況Tab.2 Distribution of compounds in pericarp and seed of Fructus Psoralea %

生補骨脂中補骨脂苷、異補骨脂苷主要存在于生補骨脂的種子中，而黃酮、單萜酚、脂溶性香豆素主要存在于生補骨脂的果皮中，因此可以通過分離補骨脂果皮和種子快速富集補骨脂中化學成分。此外，除去種子可去除大量補骨脂苷、異補骨脂苷，大幅減少提取物中補骨脂苷、異補骨脂苷的含量，從而減少補骨脂苷、異補骨脂苷在腸道菌群作用下轉化為補骨脂素、異補骨脂素[19]，降低肝臟毒性風險。

4 結論

本實驗采用超高效液相色譜法測定生補骨脂果皮、種子中化合物相對含量，闡釋香豆素、黃酮、單萜酚在果皮和種子中分布規律，研究發現補骨脂苷和異補骨脂苷主要存在于種子中，黃酮和單萜酚類化合物主要存在于果皮中，脂溶性香豆素類成分在果皮和種子中均有分布。