淋巴細胞免疫治療對反復妊娠流產患者封閉抗體表達的影響及其臨床意義

陳偉才　李琳　何金勇　孔瑩

【摘要】 目的：探究淋巴細胞免疫治療對反復性流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）患者封閉抗體（blocking anti-bodies，BA）的表達影響及其臨床意義。方法：選取2015年1月-2016年1月本院確診為RSA患者269例，均行淋巴細胞免疫療法。檢測患者治療前后外周血BA表達、免疫球蛋白濃度、淋巴細胞亞群數量及相關比值，患者治療后均隨訪1年，記錄隨訪期間患者妊娠情況。結果：治療前BA陽性24例（8.92%），低于治療后的225例（83.64%），比較差異有統計學意義

（字2=324.51，P=0.000）；治療后IgA、IgM、IgG水平均低于治療前（P<0.05）；且治療后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于治療前，CD8+高于治療前，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；BA陽性孕婦妊娠成功率為92.18%（165/179），明顯高于BA陰性孕婦的60.00%（3/5），比較差異有統計學意義（字2=6.344，P=0.012）。結論：淋巴細胞免疫治療RSA有助于提高患者BA表達，調節患者免疫水平并增加妊娠成功率。

【關鍵詞】 淋巴細胞免疫療法； 反復性流產； 封閉抗體； 淋巴細胞亞群

【Abstract】 Objective：To explore the effect of lymphocyte immunotherapy on the expression of blocking anti-bodies（BA） in patients with recurrent spontaneous abortion（RSA） and its clinical significance.Method：A total of 269 patients with RSA diagnosed in our hospital from January 2015 to January 2016 were selected，they were treated with lymphocyte immunotherapy.The expression of BA，the concentration of immunoglobulin，the number of lymphocyte subsets and the relative ratio were measured before and after treatment，they were followed up for 1 year after treatment，and the pregnancy was recorded during the follow-up period.Result：Before treatment，BA positive was 24 cases（8.92%），lower than 225 cases（83.64%） of after treatment，the difference was statistically significant（字2=324.51，P=0.000）.After treatment，the levels of IgA，IgM and IgG were all lower than those of before treatment（P<0.05）.After treatment，CD3+，CD4+ and CD4+/CD8+ were all lower than those of before treatment，CD8+ was higher than that of before treatment，the differences were statistically significant（P<0.05）.The pregnancy rate of BA positive pregnant women was 92.18%（165/179），which was significantly higher than 60.00%（3/5） in BA negative pregnant women，the difference was statistically significant（字2=6.344，P=0.012）.Conclusion：Lymphocyte immunotherapy in treatment of RSA can help improve BA expression，regulate immune function and increase pregnancy success rate.

【Key words】 Lymphocyte immunotherapy； Recurrent spontaneous abortion； Blocking anti-bodies； Lymphocyte subsets

First-authors address：Shunde Hospital of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Foshan 528333，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.21.016

反復性流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指同一婦女連續發生3次及以上的自然流產，其發病率在育齡期女性中為1%～3%[1]，RSA發病與患者內分泌、生殖道異常、遺傳因素等多個方面均有關聯，但具體發病病因尚未闡明[2]。妊娠過程中，胚胎作為一種同種異體移植物被母體識別，正常情況下母體會產生封閉抗體（blocking anti-bodies，BA）以降低自身免疫系統對胚胎的攻擊[3]，但研究發現，40%～65%的患者存在不同程度的BA分泌缺陷導致發病[4]。而淋巴免疫治療是通過將患者丈夫或第三健康人的外周血中淋巴細胞注入患者皮下，進而產生類似于BA的IgG以達到保護胚胎，持續妊娠的作用[5]，但其療效仍存在很大的爭議，現筆者通過分析行淋巴細胞免疫治療的反復流產患者治療前后BA產生情況，以及患者體內免疫因子水平變化，以期為淋巴細胞免疫治療的推廣提供數據?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月-2016年1月本院確診為RSA患者269例。（1）納入標準：①均經歷3次或3次以上不明原因流產；②夫妻雙方染色體核型分析均正常；③血型和抗體為母胎ABO不相容；④丈夫精液常規檢查正常，抗精子抗體陰性；⑤患者凝血功能正常；⑥TORCH 4項（風疹病毒、單純皰疹病毒、弓形體、巨細胞病毒）陰性；

⑦抗心磷脂抗體、抗子宮內膜抗體、抗卵巢抗體、抗絨毛膜促性腺激素抗體、抗透明帶抗體、抗滋養細胞層抗體、抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體均呈陰性。（2）排除標準：近親婚配；有吸煙、酗酒、吸毒等不良習慣；存在生殖器異?；虿∽?。269例患者年齡21～37歲，平均（27.89±3.47）歲；孕次3～5次，平均（4.10±0.85）次?；颊呔辛馨图毎庖忒煼?，患者均簽署知情同意書，本研究經本院倫理委員會批準同意。

1.2 淋巴細胞免疫治療方法 首選患者配偶進行淋巴細胞主動免疫測試，如果存在梅毒螺旋體、艾滋病及肝炎病毒等疾病則采用健康第三者的淋巴細胞進行治療。抽取外周血30 mL，分離淋巴細胞制成懸浮液，抽取0.3 mL淋巴細胞懸液注射于患者前臂近腋窩分5～8點進行皮內注射，皮丘直徑0.5 cm左右，每2～4周1次，左右臂交替，4次為一療程。療程結束后復查BA，若轉為陽性則指導受孕；若BA陰性則進行第2個療程的治療，以此類推。若

3個療程后BA仍陰性者剔除出本研究。對BA轉陽者立即指導受孕，并每2～3個月進行1次維持治療，妊娠后每1～2個月進行1次治療，直至妊娠12周或超聲顯示胎盤形成良好。治療后均隨訪1年，記錄隨訪期間患者妊娠情況。

1.3 觀察指標 （1）BA：每個治療療程前后，抽取患者排卵期間抽取晨起空腹靜脈血5 mL，高速離心后取上清液，采用ELISA法進行檢測，具體操作步驟按照所購買的試劑盒進行操作（BAELISA試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司）。（2）IgA、IgM、IgG表達水平：治療前后，抽取患者排卵期間抽取晨起空腹靜脈血5 mL，高速離心后取上清液，采用放射比濁法檢測IgA、IgM、IgG表達水平，操作步驟嚴格按照說明書進行操作（IgA、IgG和IgM試劑及校準品均購自美國Beckman公司）。（3）淋巴細胞亞群水平：治療前后，抽取患者排卵期間抽取晨起空腹靜脈血5 mL，采用流式細胞儀（CytoFLEX流式細胞儀購自美國Beckman有限公司）進行分析，計算其中CD4+、CD3+、CD8+淋巴細胞相對數目以及CD4+/CD8+。

1.4 統計學處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者治療前后BA陽性表達情況比較 治療前BA陽性24例（8.92%），低于治療后的225例（83.64%），比較差異有統計學意義（字2=324.51，P=0.000）。其中淋巴細胞免疫治療1個療程時，BA陽性率43.49%（117/269）；共有152例患者進行淋巴細胞免疫治療2個療程，BA陽性率為44.74%（68/152）；共84例進入淋巴細胞免疫治療3個療程時，BA陽性率為47.62%（40/84）。

2.2 患者治療前后IgA、IgM、IgG水平比較 淋巴細胞免疫治療后IgA、IgM、IgG水平均低于治療前（P<0.05），見表1。

2.3 患者治療前后淋巴細胞亞群表達比較 治療后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于治療前，CD8+高于治療前，比較差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.4 患者治療后隨訪1年的情況 269例患者中妊娠184例，妊娠率為68.40%，其中BA陽性妊娠179例，BA陰性妊娠5例。BA陽性225例中，

179例妊娠，妊娠率為79.56%，其中154例已足月分娩，11例已孕12周以上，14例自然流產，自然流產率為7.82%；BA陰性44例，5例妊娠，妊娠率為11.36%，其中2例已足月分娩，1例已孕12周以上，2例自然流產，自然流產率為40.00%。BA陽性孕婦妊娠成功率為92.18%（165/179），明顯高于BA陰性孕婦的60.00%（3/5），比較差異有統計學意義（字2=6.344，P=0.012）。

3 討論

自然流產占妊娠總數的15%左右，其中3次或3次以上自然流產即RSA，其發病率為1%～3%[6]，但RSA發病機制復雜，除了遺傳、解剖、內分泌、感染等因素后，仍有40%～80%的病例發病原因不明[7-8]。目前臨床認為，母體免疫系統將胚胎視為外來物進行攻擊導致的流產為主要因素[9]，BA是由機體白細胞抗原（HLA）、滋養層及淋巴細胞交叉反應抗原等刺激母體免疫系統所產生的一類抗體[10]，胚胎攜帶來源于父系的多態基因，作為半抗原可激活母體免疫應答[11]，但在正常情況下，母體的免疫系統對于胎兒的同種免疫反應受到了抑制，多種免疫因素通過有機協調達到母胎間的免疫平衡，避免胚胎受到免疫排斥[12-13]，使得妊娠得以進行。一旦這種平衡狀態被打破，胚胎極易受到母體免疫攻擊而發生流產[14]。

而淋巴細胞免疫治療是采用配偶或無關個體的淋巴細胞在患者前臂等處進行皮下注射，導母體產生同種免疫反應，并產生相應的BA[15-16]，以及微淋巴細胞毒抗體，降低母體免疫系統對胚胎的免疫排斥反應[17]，使得患者妊娠能夠繼續，本研究結果顯示，治療前BA陽性24例（8.92%），低于治療后的225例（83.64%），比較差異有統計學意義（P<0.05）。提示該方法對于大部分反復流產的患者可有效誘導BA增加，但仍有少數患者無法產生BA，其中具體原因仍不清楚。其中淋巴細胞免疫治療每個療程出現BA陽性的概率在40%～50%，這與患者個體實際情況有關。

此外研究結果顯示，治療后IgA、IgM、IgG水平均低于治療前（P<0.05）；且治療后，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于治療前，CD8+高于治療前，比較差異均有統計學意義（P<0.05）。說明淋巴細胞免疫治療對患者的免疫系統出現了一定的調整，研究發現女性子宮內膜中T淋巴細胞主要以CD8+為主[18]，CD8+細胞可分化為Tc2細胞分泌Th2有助于妊娠過程[19]，并抑制B細胞介導的體液免疫與抑制CD4+細胞介導的超敏反應[20]，淋巴治療后CD8+水平上升，有助于患者提高妊娠成功率。IgA、IgM、IgG水平的降低，說明了免疫淋巴細胞治療除了提高BA抗體數目，還可輕微抑制患者免疫系統，降低免疫系統對胚胎的殺傷風險。

隨訪發現，269例患者中妊娠184例，妊娠率為68.40%，其中BA陽性妊娠179例，BA陰性妊娠5例；BA陽性孕婦妊娠成功率為92.18%（165/179），明顯高于BA陰性孕婦的60.00%（3/5），比較差異有統計學意義（P<0.05）。說明免疫淋巴細胞治療可有效提高患者妊娠成功率。

綜上所述，淋巴細胞免疫治療RSA有助于提高患者BA表達，調節患者免疫水平并增加妊娠成功率。

參考文獻

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（收稿日期：2018-04-24） （本文編輯：董悅）