HPLC法測定環孢素膠囊的含量及有關物質

陳燕 齊衍超 郎益鵬 趙海鵬 楊麗蓉

濰坊市食品藥品檢驗檢測中心 山東濰坊 261105

環孢素是一種可以對機體免疫反應起到抑制作用的藥物，它能有效抑制免疫相關細胞的增殖和功能，降低抗體的免疫反應，常用來作為器官移植后的抗排異反應藥物。環孢素的發明是近幾十年來醫學領域對器官移植研究取得的重要進展。而環孢素中包含了多種雜質，要想發揮環孢素的治療作用，確保用藥安全性就必須精確控制環孢素中各種雜質的含量?；诖?，本文參考相關研究資料，采用HPLC法測定環孢素膠囊中主要有效成分的含量及有關物質，為精確控制藥品質量提供參考。

1 儀器與材料

安捷倫1260型HPLC儀，1200系列自動進樣器、二極管陣列檢測器、四元泵（美國安捷倫公司）；XS-205DU型電子天平(瑞士梅特勒公司)。環孢素對照品（瑞士Nvoartis公司，批號：130495-200202）；環孢素B、環孢素C、環孢素H、環孢素G、異環孢素A、異環孢素H對照品（諾華制藥有限公司，批號分別為518-85、005-95、520-85、16-85、502-88、210-89）；環孢素膠囊（北京雙鷺藥業股份有限公司，批號：20090601）；四氫呋喃為色譜純；磷酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

填充劑為C18柱，用長1米、直徑0.25mm的不銹鋼管連接色譜柱、進樣閥，用于熱交換；流動相為四氫呋喃-0.05mol/L磷酸溶液(45:55)；流速為1.0ml/min；檢測波長220nm；色譜柱溫度、不銹鋼管溫度為75℃；進樣量10μL。

2.2 溶液的制取

(1)系統適用性溶液制取。使用電子天平分別稱取3毫克環孢素B、環孢素C、環孢素H、環孢素G、異環孢素A、異環孢素H對照品，稱取100毫克環孢素對照品，將它們放入50毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解稀釋到刻度制得系統適用性溶液。

（2）對照品溶液的制取。使用電子天平稱取50毫克左右的環孢素對照品，將其放入25毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋到刻度；精密量取1毫升置于200毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋至刻度，獲得對照品溶液。

（3）供試品溶液。取裝量差異項下的內容物適量(含環孢素約100mg)精密稱取，將其置于50毫升量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋至刻度，搖勻后獲得供試品溶液。

3 有關物質

3.1 系統適用性試驗

使用電子天平精密稱取適量的六種雜質對照品以及環孢素對照100mg，將它們放入50毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋到刻度作為系統適用性試驗溶液。

3.2 檢出限和定量限

使用逐步稀釋法測定，以S/N=3時計算出環孢素檢出限為3ng。以S/N=10時計算出環孢素以及六種雜質的定量限分別為：9.9、20.3、19.5、31.3、18.28、50.6、45.2ng。

3.3 校正因子

使用電子天平分別稱取適量的各雜質對照品、環孢素對照品配制對照品溶液，計算出環孢素及各種各雜質對應的校正因子。

4 含量測定

4.1 溶液的配制

供試品溶液的配制方法同上文所述。

對照品溶液：使用電子天平稱取50毫克左右的環孢素對照品，將其放入25毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋到刻度，搖勻后作為對照品溶液。

4.2 重復性試驗

取樣品根據上文所述方法配制供試品溶液、對照品溶液，根據上文所述的色譜條件開展分析，進行六次樣品測定，平均含量為97.5%，RSD值 0.1%。

4.3 溶液穩定性試驗

按照上述方法配制供試品溶液，在0、2、4、6、8h測定峰面積，得到峰面積均值16499，RSD0.2%。檢測結果顯示8小時之內供試品溶液穩定。

4.5 樣品含量測定

精密稱取環孢素膠囊樣品，制備供試品溶液、對照品溶液，根據上文給出的色譜條件分析，根據外標法用峰面積計算環孢素膠囊樣品含量。

5 討論

環孢素生產、儲存過程中存在的雜質主要包括環孢素G、異環孢素A、環孢素B、環孢素D等，含量都極少。本次研究對環孢素B、環孢素C、環孢素H、環孢素G、異環孢素A、異環孢素H這六種雜質進行控制。試驗顯示流動相為四氫呋喃-0.05 mol/L 磷酸溶液（45：55）時，環孢素與六種雜質的均能達到基線分離。

6 結語

綜上所述，使用HPLC法對環孢素膠囊含量及有關物質的測定可以獲得精準可靠的結果，可以為環孢素膠囊質量控制提供有價值的參考。