不同劑量配伍的三黃瀉心湯總蒽醌含量比較研究

魏江存 秦祖杰 歐和生 謝臻 陳勇 李金洲 陳子雋 韓倩

摘要：建立紫外分光光度法測定不同劑量配伍的瀉心湯中總蒽醌的含量。以大黃素為對照品，用濃度為1%的醋酸鎂甲醇溶液作為顯色劑，在512 nm波長處測定吸光度，計算不同劑量配伍的瀉心湯總蒽醌的含量，最后比較其差異。結果表明，不同劑量配伍的瀉心湯總蒽醌含量有差異，這可能與配伍后不同劑量的黃芩與黃連對大黃總蒽醌溶出率的影響有關，該方法可作為不同劑量配伍的中藥方劑質量控制方法，為今后綜合開發和利用不同劑量配伍的中藥方劑提供參考依據。

關鍵詞：瀉心湯;劑量配伍;紫外分光光度法;總蒽醌

中圖分類號：O657.32? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）09-0098-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.09.022? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： To establish a UV spectrophotometric method for the determination of total anthraquinones in Xiexin decoction with different doses. The content of total anthraquinone in Xiexin soup at different doses was calculated by determining at 512 nm wavelength and the solution of magnesium acetate with a concentration of 1% as a colorant. The content of the total anthraquinone in Xiexin soup with different doses was calculated， and the difference was compared. This method reveals the change of total anthraquinone content in Xiexin soup with different dosage. The content of total anthraquinones in Xiexin soup with different doses is different， which may affect the dissolution rate of total anthraquinone with different doses of Scutellariz baicalensis and Coptis chinensis. This method can be used as the quality control method of traditional Chinese medicine prescription in different dosages， and the combination of different dosage of traditional Chinese medicine in the future.

Key words： Xiexin decoction; dose compatibility; ultraviolet spectrophotometry; total anthraquinone

中藥復方是中國中醫臨床治療的基礎，也是中醫理論的體現。本試驗的三黃瀉心湯來自張仲景的《金匱要略》[1]，方劑中君藥大黃主要活性物質成分為蒽酮類、番瀉苷類等[2]，黃芩主要活性成分有黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等黃酮類成分[3，4]，黃連主要活性成分物質有小檗堿、黃連堿、巴馬汀等生物堿物質[5-7]。三黃瀉心湯主要有抗菌[8-11]、抗細菌內毒素[12]、降血糖[13]、保護胃黏膜[14]和瀉下[15]等藥理作用，還對心血管系統及血液系統有影響[16-20]，對腦缺血再灌注也有很好的抗損傷作用[21]。

常將大黃與其他藥物配伍使用，如大黃與黃芩、黃連、厚樸、枳實等中藥材配伍使用，從而改變其化學活性成分、降低肝毒性等[22，23]。研究發現，大黃和黃芩配伍時，蒽醌類成分溶出率增加，而與黃連配伍時，蒽醌類成分溶出率降低，三者合煎時，總蒽醌的溶出率增加。大黃、黃連、黃芩配伍組合成瀉心湯來降低大黃的毒性，并通過與不同劑量黃連、黃芩的配伍來改變蒽醌類成分的溶出率，從而進一步篩選出不同劑量配伍的總蒽醌含量較高的劑量配伍比例，具有一定的科學意義。

1? 材料與方法

1.1? 藥材與試劑

大黃（批號：161008891、170307001）、黃連（批號：161106631）、黃芩（批號：161105141），3種藥材均購于廣州康美藥業股份有限公司;甲醇（色譜純，Fisher）、醋酸鎂、氯仿購于國藥集團化學試劑有限公司;大黃素對照品（批號：170224），純度≥98%，購于上海融禾醫藥科技有限公司。

1.2? 儀器

島津UV1780型紫外;純水儀，法國密理博;電子分析天平，賽多利斯科學儀器有限公司;UV-1800 型紫外分光光度計，日本島津公司;全波長酶標儀，美國BIOTEK-Epoch;ZH-B6型代謝籠，安徽正華有限公司;PYX-190H-B型育溫箱，廣東科力有限公司;離心機，德國Thermo Fisher;HWS12型水浴鍋，上海一恒公司;DZTW型電熱套，北京市永光明醫療儀器有限公司。

1.3? 方法

1.3.1? 對照品溶液的配制? 取大黃素對照品10.08 mg，置于25 mL容量瓶中，加1%醋酸鎂甲醇至刻度，搖勻，即得0.403 2 mg/mL。

1.3.2? 供試品的制備? 按照劑量配伍比例分別精密稱取4組瀉心湯藥材：①大黃∶黃芩∶黃連=1∶0.97∶0.028;②大黃∶黃芩∶黃連=1∶1.70∶0.096;③大黃∶黃芩∶黃連=1∶1.18∶0.61;④大黃∶黃芩∶黃連=1∶0.5∶0.5。

精密稱取適量藥材，加10倍量的純水浸泡30 min后加熱至微沸，持續微沸狀態煎煮20 min，過濾后13 000 r/min離心10 min，隨后取上清液5 mL，加8%鹽酸10 mL超聲3 min，再加20 mL氯仿超聲30 min，氯仿分層，酸液再用氯仿萃取3次，每次10 mL，合并氯仿溶液并揮干，殘渣加1%醋酸鎂甲醇溶液定容至50 mL，備用。

1.3.3? 波長的選擇? 精密取對照品溶液0.5 mL，置25 mL容量瓶，加1%醋酸鎂甲醇溶液至刻度，搖勻。以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白對照，按紫外-可見分光光度法，在400～800 nm波長范圍內掃描（圖1）。結果表明， 大黃素在512 nm處有較大吸收，且該波長不易受到溶劑和雜質的干擾，故選擇測定波長512 nm。

1.3.4? 測定? 以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白對照，于512 nm波長處測定其吸光度，計算總蒽醌的含量。

2? 結果與分析

2.1? 方法學考察

2.1.1? 標準曲線繪制? 精密取大黃素對照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50和2.00 mL分別置10 mL容量瓶，加1%醋酸鎂溶液至刻度，于512 nm波長處測定吸光度[24]。以大黃素濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得線性方程y=10.092x+0.009 8，R2=0.999 1，即大黃素在0.010 1～0.080 6 mg/mL內有良好的線性關系。

2.1.2? 精密度試驗? 以劑量①的比例稱取藥材，精密稱定，按照“1.3.2”方法制備樣品，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，于512 nm波長處連續6次測定吸光度，結果測得RSD為0.50%，表明該方法精密度良好。

2.1.3? 重復性試驗? 按照“1.3.2”方法各制備6份供試品，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，在512 nm處測吸光度，計算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③和劑量④水提取液的平均濃度分別為0.631 4、0.675 8、0.286 2和0.402 4 mg/mL;RSD分別為2.15%、1.46%、1.83%和1.27%，表明該方法重復性良好。

2.1.4? 穩定性試驗? 按照劑量比例稱取藥材，精密稱定，按照“1.3.2”方法制備供試品，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，于512 nm處分別在0、10、20、30、40、50、60、80、100、120 min測定吸光度，計算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③和劑量④的RSD分別為2.25%、0.91%、1.93%和 1.58%，表明樣品在2 h內穩定。

2.1.5? 加樣回收率試驗? 按“1.3.2”方法各制備6份供試品溶液，加入適量大黃素對照品溶液，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，于512 nm處測定吸光度，計算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③和劑量④的平均加樣回收率分別為101.63%、99.90%、98.39%、99.09%，RSD分別為1.22%、1.23%、2.72%和2.11%，表明該方法加樣回收率良好。

2.2? 樣品測定

精密稱取瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③、劑量④各3批，按“1.3.2”方法制備樣品溶液，在512 nm波長處重復測定3次吸光度，計算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③、劑量④的總蒽醌含量分別為0.626 8、0.685 6、0.288 7和0.399 5 mg/mL，RSD分別為1.14%、1.97%、1.73%和0.73%（表1）。

3? 討論

試驗選用紫外分光光度法來測定不同劑量配伍瀉心湯的總蒽醌含量，由于蒽醌類成分來自大黃，為了便于比較黃芩和黃連的量對瀉心湯總蒽醌的影響，通過固定大黃的劑量不變，考察大黃與不同劑量的黃連、黃芩配伍對瀉心湯總蒽醌類溶出率變化的影響。試驗過程中通過改變黃芩和黃連的劑量，觀察大黃總蒽醌含量在提取過程中是否受黃連、黃芩的影響及影響是否顯著。不同劑量配伍的三黃瀉心湯的總蒽醌含量各有差異，劑量①、劑量②的總蒽醌含量最高，其次是劑量④，最少是劑量③，適當增加黃芩的量或減少黃連的量有助于提高大黃總蒽醌的溶出率，引起這種變化可能與不同劑量配伍后化學成分的轉移或轉化有關，因此，想要提高復方中某一有效成分的溶出率，需要控制好復方中各藥之間的比例，才有可能提高某一臨床療效，但是復方中藥之間存在著相當復雜的協同療效和相互作用機制，要想完全了解最優劑量配伍比例對某有效化學成分的溶出率影響以及劑量配伍對有效成分的溶出率的規律，還需要從不同視角多學科研究。

大黃與不同劑量藥材配伍后都會引起蒽醌類成分含量的改變，有研究報道大黃蒽醌類成分對肝腎存在潛在毒性[25]。大黃與不同劑量藥材配伍后蒽醌類成分含量升高有助于減輕大黃的毒性作用，從而增強大黃的瀉下作用，但兩者的相關性有待進一步研究驗證。

在此基礎上，中藥復方的化學成分研究在復方配伍過程中是否有新成分的產生，是否由于新成分的產生才顯示出復方的獨特療效。復方配伍過程中各成分的含量變化規律，是否由于各化學成分的協同作用產生復方的獨特療效[26]。中藥的物質基礎極為復雜，包括黃酮類、有機酸、生物堿、無機元素、皂苷及蛋白質、多糖等。近年來復方配伍的化學成分研究主要集中在配伍前后個別化學成分的定量分析、復方配伍后質變研究以及配伍后多成分定量研究[27-30]。

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收稿日期：2018-09-30

基金項目：國家自然科學基金項目（81360524;81660701）;廣西自然科學基金項目（2016GXNSFAA380148）

作者簡介：魏江存（1989-），男，廣西賀州人，藥師，碩士，主要從事中藥、民族藥質量分析及其藥效機制研究，（電話）18177479182（電子信箱）WJC2553@163.com;通信作者，陳? 勇（1961-），男，江西南昌人，教授，主要從事中藥及其制劑質量分析研究，（電子信箱）cy6381@163.com。