油性食品中脂溶性抗氧化劑快速檢測方法的建立及研究

李亮 劉榮利 別蓓蓓 胡曉佳 趙依梵 陳甜甜

摘 要：目的：建立一種可快速檢測不同濃度脂溶性抗氧化劑BHA、BHT的顯色方法;方法：以無水乙醇作為溶劑，篩選出合適的顯色劑，利用快速檢測法測定花生中BHA、BHT含量，并用氣相色譜法驗證快速檢測法。結果：經檢測1號花生中BHA、BHT濃度在0.15～0.20 g/mL，4號花生BHA、BHT濃度0.1～0.15 g/mL，其余3種花生并未檢測出BHA、BHT，氣相色譜的5種不同咸味兒花生檢測結果與快速檢測法相似。結論：實驗中5種不同咸味兒花生中的BHA、BHT并未超過國家標準可放心食用，實驗數據表明快速檢測法適用于大批量樣品的檢測，檢測速度快且靈敏度較高，滿足對BHA、BHT的檢測需求。

關鍵詞：BHA;BHT;快速檢測

1 概述

1.1 研究背景

多年以來由于食品安全問題引發的重大事故數見不鮮，要想有效防止這些事故的發生就要嚴格管控食品質量以及添加劑的添加等，而目前國家食品安全監督管理體系大多需要依靠儀器分析，儀器分析雖然精確度得到了有效提高，但是檢測周期較長，不能及時向有關部門反映。本研究研究出了一種快速并且高效的檢測方法，適用于大批量樣品的檢測，從而快速檢測出抗氧化劑（BHA、BHT）。目前國內外常見的檢測方法有：比色法、薄層色譜法（TLC）、氣相色譜法（GC）、液相色譜-質譜聯用法等，以上4種檢測方法需要的儀器比較昂貴，檢測成本比較高，操作比較繁瑣，而比色法操作雖然簡單，但是精度還有待提高，液-質聯用在我國還是并未普及[1]。

1.2 抗氧化劑性質及顯色原理

BHA：化學名為叔丁基-4-羥基茴香醚（結構見圖1），BHA是一種良好的抗氧化劑。單一使用時最大添加量為0.2 g/kg[2]。BHT與BHA混合使用時，總量不可以大于0.2 g/kg;BHA在動物脂肪中的抗氧化性強于植物脂肪，對不飽和植物油的抗氧化能力比較弱。并且還有較強抗菌作用，可抑制黃曲霉生長和黃曲霉毒素的產生[3]。

BHT（2，6-二叔丁基對甲酚）俗稱抗氧劑264，也稱T501，結構見圖2。BHT作為中國油脂類食品抗氧化劑開始使用于1940年，在果仁、精油、油脂食品中有很好的穩定性，它的抗氧化作用機理是通過自身發生反應而清除油脂類食品中的氧，屬于氧清除劑。對熱非常穩定，不與金屬離子發生反應，抗氧化性良好。

2 實驗部分

2.1 主要試劑與器材

BHA（西安德源和儀器設備有限公司），BHT（西安德源和儀器設備有限公司），2，6-二氯醌-4-氯亞胺（阿拉丁生化科技股份有限公司），納氏比色管，分析天平（上海舜宇恒平），旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠），索氏提取器，石油醚（AR bp.30～63 ℃），無水乙醇（AR）、咸味花生標準品（攪碎備用）。

2.2 確定顯色條件

配置氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣和硼砂的飽和無水乙醇溶液，標號備用。分別取等量BHA、BHT與4支納氏比色管，加入等量無水乙醇，振搖使之溶解，標號Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ[4]。對應加入緩沖溶液后振搖0.5 min，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四種溶液均不褪色，其穩定性效果較好。通過對顯色結果的對比，得出氫氧化鈉飽和乙醇溶液顯色效果最佳。

2.3 實驗操作

①配置氫氧化鈉飽和無水乙醇緩沖溶液，取10 mL無水乙醇于燒杯中，加入過量氫氧化鈉，邊加邊攪拌，直至不溶。②配置2，6-二氯醌-4-氯亞胺顯色劑，用分析天平稱取固體2，6-二氯醌-4-氯亞胺3 g，溶于10 mL無水乙醇中，作為顯色劑;本顯色劑為淡黃色，需在0～2 ℃中密封冷藏。③分別配置7組待測標準液，濃度為0～0.05、0.05～0.1、0.1～0.15、0.15～0.2、0.2～0.25、0.25～0.3 g/mL與0.3～0.35 g/mL。每個區間配置5組。將已配置好的待測標準溶液分別取5 mL于納氏比色管，加入1 mL飽和氫氧化鈉，后其加入3滴顯色劑（2，6-二氯醌-4-氯亞胺），并記錄顯色顏色。

2.4 樣品中BHA、BHT提取

將買來的花生用粉碎機粉碎好后備用并編號，稱取不同的備好的碎花生各2.0 g，用索氏提取器提取花生中脂肪，加入無水乙醇后加熱回流30～60 min，至提取液近乎無色后停止加熱。將回流的提取液用旋轉蒸發儀蒸濃縮至5 mL左右，標號作為待測溶液[5]。

BHA、BHT的提?。喊?5 mL甲醇分3次加入含有脂肪殘渣的平底燒瓶中，每次用移液管加入5 mL甲醇，加入甲醇后漩渦震蕩2 min，讓脂肪殘渣在甲醇中充分溶解，然后將其轉入10 mL離心管進行離心，離心時應以8 000 r/min的速度進行10 min的離心，離心取出后吸取全部上清液放置于50 mL圓底燒瓶中，利用旋轉蒸發儀將離心后上清液蒸干，量取5 mL甲醇于圓底燒瓶中，溶液通過0.45 μm有機微孔濾膜過濾，標號后，所得濾液可用于氣相色譜分析。

2.5 氣相色譜檢測

GC-1120氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（FID），色譜柱型號為SE-30，50 m×0.32 mm×2.0 μm。

色譜柱初始溫度設為150 ℃，溫度到達2 min后，以30 ℃/min的速度升到280 ℃，升至280 ℃后保持30 min。進樣口和檢測器溫度為280 ℃，流量：氫氣40 mL/min，氮氣120 mL/min，空氣400 mL/min。進樣量為1 μL，分流比1∶10[6]。

2.6 顯色結果

取5支納氏比色管，分別加入2 mL5種不同花生提取液并且標號，向每支試管中加入1 mL氫氧化鈉飽和乙醇溶液，振蕩2 min后，加入3滴2，6-二氯醌-4-氯亞胺無水乙醇溶液后振搖0.5 min，加入顯色劑后瞬間顯色且0.5 min不褪色。對比5支不同花生顯色結果與標準色階可得出，2、3、5號花生中不含有BHA、BHT或所含BHA、BHT含量在0～

0.05 g/mL，而1號花生所含BHA、BHT在0.15～0.20 g/mL，而4號花生所含BHA、BHT在0.1～0.15 g/mL。通過與標準色階對比，可得出此1號、4號花生含有BHA、BHT且所含有量并未超過國家標準。因此以2，6-二氯醌-4-氯亞胺作為顯色劑，可用于脂溶性抗氧化劑BHA、BHT快速檢測。

根據表1可得，只有1號和4號花生檢測出BHA、BHT，其中1號花生中BHA、BHT含量高于4號花生，并且都小于標準含量，而2號、3號、5號花生并未檢測出BHA、BHT。

3 結果與分析

實驗以2，6-二氯醌-4-氯亞胺作為快速檢測的顯色劑，以不同濃度標準品BHA、BHT為待測液，對這7個顯色區間進行測定：0～0.05、0.05～0.、0.1～0.15、0.15～0.2、0.2～0.25、0.25～0.3 g/mL與0.3～0.35 g/mL，其中0～0.5 g/mL由于含有BHA、BHT少，基本不顯色（顯色劑顏色淡黃色）。利用快速檢測法測定5種不同花生咸味花生中BHA、BHT，顯色結果中1號、2號、3號、4號和5號花生中的BHA、BHT并未超過國家標準，而2號、3號、5號花生中不含有BHA、BHT或含量較少，1號花生、4號花生中的BHA、BHT含量分別在0.15～0.20 g/mL、0.1～0.15 g/mL。經氣相色譜法驗證，1號、4號花生中BHA、BHT并未超過國家標準，2號、3號、5號花生并未檢測出BHA、BHT，從而驗證出快速檢測法具有可靠性，2，6-二氯醌-4-氯亞胺可用于快速檢測的顯色劑。

4 結論

快速檢測法作為新的檢測方法樣品處理（只需從花生中提取出BHA、BHT混合溶液）、進行樣品檢測，快速檢測操作相對簡單，適用于大批量樣品的檢測，當其含量在0.2～0.25 g/mL時，再用大型儀器進行檢測，這樣既可以減少檢測所耗費時間，又可以更快速、更高效的得出檢測結果。

參考文獻

[1]朱臻怡，馮民，熊華萱，等.食品中抗氧化劑的應用及其檢測技術研究進展[J].化學分析計量，2013（5）：104-108.

[2]孫艷華，黃桂華，韓勇.氣相色譜法測定抗氧劑叔丁基茴香醚中異構體的含量[J].山東化工，2010（3）：44-45.

[3]楊杰，方從容，楊大進.液相色譜法和氣相色譜法測定食品中抗氧化劑叔丁基羥基茴香醚、2，6-二叔丁基對甲酚和特丁基對苯二酚的研究和比對[J].衛生研究，2013，42（1）：114-118.

[4]劉思龍，許智彪，鐘毅.氣相色譜法檢測食品中抗氧化劑BHA、BHT和TBHQ[J].中國高新區，2018（30）：45.

[5]畢志成.迷迭香精油和水溶性、脂溶性抗氧化劑的提取、分離及純化研究[D].長沙：中南林業科技大學，2013.

[6]王萍，郭金英，任國艷，等.氣相色譜法同時檢測含油脂食品中BHA、BHT和TBHQ的改進[J].食品與機械，2018，34（11）：79-81.

基金項目：西安培華學院2019年度校級科研項目“油性食品中脂溶性抗氧化劑快速檢測方法的建立及研究”（編號：PHKT19042）。

作者簡介：李亮（1990—），女，陜西西安人，碩士，講師。研究方向：食品藥品分析。