郝一影
(河南省化工研究所有限責任公司,河南 鄭州 450052)
克百威是一種氨基甲酸酯類高毒性的殺蟲劑,具有高效、廣譜、殘留低、持效期較長的特點,可通過內吸、觸殺、胃毒多種致毒方式達到目的,同時還有一定的殺卵作用;既適用于防治多種大豆、水稻、棉花、煙草等作物上的害蟲,也可以作為專門的種子處理劑使用[1]。噻蟲嗪是一種全新結構的殺蟲劑,屬于第二代煙堿類,具有高效低毒的特點,在推薦用量范圍下使用對作物安全、無藥害,可以用于果樹、稻類、豆類、煙草、油菜、向日葵等多種作物[2]。不僅可以直接用于種子和莖葉處理,還可以用來進行處理土壤[3]。對噻蟲嗪和克百威的分析方法多有報道,但目前噻蟲嗪·克百威種子處理懸浮劑還未見關于高效液相色譜的分析方法[4-6]。本文使用高效液相色譜法,使用反相C18柱對試樣中的噻蟲嗪和克百威進行定量分析,該方法操作簡便、分析速度快,精密度和準確度均符合分析要求,可以滿足常規分析和生產中的質量控制。
試驗中的試劑和溶液如下:甲醇,色譜純;純凈水;標品有克百威(質量分數≥98.3%)、噻蟲嗪(質量分數≥98.5%),標準品均由國家農藥質量監督檢驗中心提供;噻蟲嗪·克百威種子處理懸浮劑,某公司提供。
試驗中的儀器如下:Agilent1200高效液相色譜儀;紫外檢測器; Caprisil-C18(5 μm,150 mm×4.5 mm ) 色譜柱;超聲波清洗器;過濾膜,0.45 μm。
室溫條件下,體積比55∶45的甲醇-水作流動相,以1.0 mL/min的流速進樣5 μL,在220 nm波長進行測試,各組分的保留時間分別為:噻蟲嗪約2.1 min,克百威約6.2 min,見圖1、圖2。
圖1 克百威和噻蟲嗪標準品液相色譜圖
圖2 噻蟲嗪·克百威懸浮種衣劑液相色譜圖
1.4.1標樣溶液的配制
稱取噻蟲嗪標準品0.030 g(精確至0.000 2 g),克百威標準品0.018 g(精確至0.000 2 g),置于同一50 mL容量瓶中,加入30 mL甲醇放置于超聲波清洗器中,超聲使其充分溶解,取出后冷卻至室溫,用甲醇定容,搖勻后靜置,備用。
1.4.2試樣溶液的配制
稱取0.60 g 樣品(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中,加入30 mL甲醇放置于超聲波清洗器中,超聲使其充分溶解,取出后冷卻至室溫,用甲醇定容,搖勻后靜置,過濾,備用。
1.4.3測定
在1.3所述條件下,當儀器基線運行平穩后,標樣溶液被連續注入幾次,比較各次的特征色譜峰的保留時間和峰面積,如果相鄰兩針的保留時間和峰面積的變化均小于1.5%,那么可以進樣進行測定,測試按照標樣、試樣、試樣、標樣的順序進行。
分別對測得的2針標準溶液和試樣溶液的各成分的特征峰的峰面積進行平均計算后,按下式計算噻蟲嗪、克百威的質量分數(X)。
式中:A1,標樣溶液中噻蟲嗪(或克百威)峰面積的平均值;A2,試樣溶液中噻蟲嗪(或克百威)峰面積的平均值;m1,噻蟲嗪(或克百威)標樣的質量,g;m2,試樣的質量,g;P,標樣中噻蟲嗪(或克百威)質量分數,%。
為了實現噻蟲嗪和克百威的有效分離,分別使用甲醇-水、乙腈-水作為流動相進行試驗,其中乙腈-水作為流動相時噻蟲嗪的峰形對稱性差,故流動相選擇甲醇-水。對不同比例的甲醇-水對分離效果的影響進行試驗,分別為80∶20、65∶35、55∶45、40∶60。結果表明:當流動相中甲醇比例過高時,流出時間過短,甲醇比例低時,克百威的保留時間較長,綜合考慮選擇體積比55∶45為試驗流動相。此時噻蟲嗪和克百威保留時間適中,峰形對稱,分離效果好,可以滿足分析要求。
通過Agilent 1200高效液相色譜儀的紫外光譜采集功能,經紫外光譜掃描噻蟲嗪在215、250 nm左右均有很好的吸收,克百威在210 nm有最大的吸收峰,考慮低波長時試劑的干擾較大,經優化試驗,采用220 nm為檢測波長。
分別稱取噻蟲嗪標準品0.030 4 g、克百威標準品0.018 4 g置于同一50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容后,用移液管分別準確移取2.0、5.0、10.0、15.0 mL于20 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容后進行測定。測試結果被繪制成標準曲線,如圖3、圖4所示,其中橫坐標表示各成分的進樣濃度,縱坐標表示其特征峰的峰面積。各有效成分的線性回歸方程分別為:噻蟲嗪y=11 020x+17.419,相關系數為0.999 9;克百威y=8 471.5x-38.873,相關系數為0.999 3。
圖3 噻蟲嗪標準曲線
圖4 克百威標準曲線
按1.3所述操作條件對同一樣品進行平行試驗,測定5次。測定結果如表1所示,噻蟲嗪、克百威的標準偏差分別為0.024、0.023,變異系數分別為0.44%、0.88%。
一定量的標準品被添加到樣品(含量已知)中后,在1.3所述條件下測試,測定結果如表2所示。
表1 精密度的測定結果
測得噻蟲嗪的回收率為99.84%~100.06%,平均回收率為99.92%;克百威的回收率為99.64%~100.07%,平均回收率為99.85%。
表2 回收率的試驗測定結果
通過試驗表明,本方法能夠滿足定量分析的要求,準確快速地對噻蟲嗪·克百威種子處理懸浮劑進行含量測試。