乳腺癌患者癌組織中lincRNA-ROR的表達變化及臨床意義分析

張曉申 唐煒 鄭文博 潘凌霄 高進 陳倫

【摘要】 目的：探討乳腺癌患者癌組織中lincRNA-ROR的表達變化及臨床意義。方法：選取2018年5月-2019年5月本院收治的乳腺癌患者160例為研究組，選取同時間段在本院接受檢查的正常人群160例為對照組。比較兩組血清中lincRNA-ROR表達情況，研究組癌組織、癌旁正常組織中lincRNA-ROR表達情況。分析乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR表達情況與臨床特征的關系。結果：治療前，研究組血清中lincRNA-ROR水平高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后，兩組lincRNA-ROR水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）。研究組癌組織中lincRNA-ROR水平為（2.2±0.8），癌旁正常組織中lincRNA-ROR水平為（0.8±0.2），研究組癌組織中lincRNA-ROR水平高于癌旁正常組織（P<0.05）。乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR水平升高與患者年齡、腫瘤TNM分期、人表皮生長因子受體-2（HER2）、細胞增殖指數（Ki-67）無關（P>0.05），與淋巴結轉移、PR、ER有關（P<0.05）。結論：乳腺癌檢查中，lincRNA-ROR在乳腺癌患者血清中的水平明顯升高，癌組織中的LincRNA-ROR水平顯著高于癌旁正常組織，且lincRNA-ROR水平與PR、ER受體的狀態、淋巴結轉移情況存在明顯的關系，可以將lincRNA-ROR作為乳腺癌診斷中的潛在分子標記物。

【關鍵詞】 乳腺癌 癌組織 lincRNA-ROR 表達變化 臨床意義

Expression Changes of lincRNA-ROR in Breast Cancer and Its Clinical Significance/ZHANG Xiaoshen， TANG Wei， ZHENG Wenbo， PAN Lingxiao， GAO Jin， CHEN Lun. //Medical Innovation of China， 2021， 18（01）： 0-066

[Abstract] Objective： To explore the expression changes and clinical significance of lincRNA-ROR in breast cancer patients. Method： A total of 160 cases of breast cancer patients admitted to our hospital from May 2018 to May 2019 were selected as the study group， and 160 cases of normal people who were examined in our hospital during the same period were selected as the control group. The expression of lincRNA-ROR in serum of the two groups was compared， and the expression of lincRNA-ROR in cancer tissues and adjacent normal tissues of the study group was compared， the relationship between the expression of lincRNA-ROR in serum and clinical features of breast cancer patients was analyzed. Result： Before treatment， the serum level of lincRNA-ROR in the study group was higher than that in the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. After treatment， there was no statistically significant difference in the lincRNA-ROR level between the two groups （P>0.05）. The lincRNA-ROR level in the cancer tissues of the study group was （2.2±0.8）， and that in the adjacent normal tissues was （0.8±0.2）， the lincRNA-ROR level in the cancer tissues of the study group was higher than that in the adjacent normal tissues （P<0.05）. The serum level of lincRNA-ROR in breast cancer patients was not correlated with age， TNM stage， human epidermal growth factor receptor-2 （HER2）， and cell proliferation index （ki-67） （P>0.05）， but was correlated with lymph node metastasis， PR， and ER （P<0.05）. Conclusion： During breast cancer examination， the level of lincRNA-ROR in serum of breast cancer patients was significantly increased， and the level of lincRNA-ROR in cancer tissues was significantly higher than that in adjacent normal tissues， and lincRNA-ROR was significantly correlated with the status of PR， ER receptor and lymph node metastasis， so lincRNA-ROR could be used as a potential molecular marker in breast cancer diagnosis.

[Key words] Breast cancer Cancer tissue lincRNA-ROR Expression changes Clinical significance

First-authors address： The First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University， Guangzhou 510120， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.01.016

乳腺癌是臨床女性最常見的惡性腫瘤，近幾年，該惡性腫瘤的發生率明顯升高[1]。雖然乳腺癌的分子發生機制、早期診斷、治療均有了很大的提升，但是發病5年內依然有30%～40%的患者會發生復發與轉移，且侵襲、轉移是導致患者復發、死亡的主要因素[2]。因此，對乳腺癌侵襲、轉移機制進行分析對降低患者致死率、提高治療成功率非常重要。近幾年，臨床研究發現，lincRNA異常表達與乳腺癌等其他惡性腫瘤的發生、發展存在緊密的聯系，其可以通過多種途徑對乳腺癌細胞生長、繁殖、凋亡、侵襲、轉移進程造成影響[3]。隨著更深入的研究發現，lincRNA在多種生物學進程中發揮著關鍵性作用，比如蛋白質翻譯、轉錄后調節、基因轉錄、染色質重塑等[4]。當前臨床上關于這方面的研究還比較少。此次研究的目的是探討乳腺癌患者癌組織中lincRNA-ROR的表達變化及臨床意義，以便可以為臨床診斷、治療乳腺癌患者提供一定的參考價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月-2019年5月本院收治的乳腺癌患者160例為研究組，選取同時間段在本院接受檢查的正常人群160例為對照組。納入標準：（1）研究組均符合乳腺癌相關診斷標準;（2）均為非妊娠女性，年齡18～69歲;（3）術前穿刺活檢確診;（4）心電圖檢查無異常，心臟彩色超聲檢查心臟射血分數大于65%，平?；顒硬皇芟拗?，日?；顒硬粫l心絞痛、呼吸困難、心悸、疲乏;（5）均可以耐受治療;（6）意識清楚，可以理解講解的內容;（7）對照組人群經臨床檢查一切正常。排除標準：（1）合并有急性創傷或者是急性疾病者;（2）合并有其他惡性腫瘤疾病者;（3）心肝腎受到嚴重的損傷者。研究對象均知情研究，研究得到醫院倫理委員會審批并在其監督下進行。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 兩組均采集空腹靜脈血5 mL，離心分離取血清后放置保存備用。研究組患者手術切除的新鮮癌組織、癌旁正常組織各40例份放置到液氮中冷凍并保存備用。

1.2.2 主要的試劑、設備 血清RNA提取試劑盒由北京百泰克公司生產提供（bioteke）;擴增試劑盒（SYBR R Premix Ex TaqⅡ， TaKaRa）由大連寶生物公司生產提供;逆轉錄試劑盒（PrimeScriptTMRTⅡ， TaKaRa）由大連寶生物公司生產提供;PCR引物由上海生工生物公司生產提供;紫外分光光度計（UV-2450）由日本島津公司生產提供;電泳儀（XH600）由上海昕慧公司生產提供;熒光定量PCR儀器（ABI7500 Fast， ABI）由美國公司生產提供;凝膠成像儀（Gel Doc XR+， Bio-Rad）由美國公司生產提供。

1.2.3 總RNA的提取與cDNA合成 使用RNA提取試劑盒對血清中的總RNA進行提取，使用gDNA Eraser對基因組DNA去除，提取后的RNA使用紫外分光光度計進行純度、濃度檢測，對A260/A280值進行計算;同時使用瓊脂糖凝膠電泳對RNA的完整性進行檢測。使用逆轉錄試劑盒根據37 ℃（15 min）、85 ℃（5 s）、4 ℃（1 min）進行反應，將獲得的cDNA放置到-20 ℃條件下保存。所有的操作均按照說明書嚴格執行。

1.2.4 內參的選擇與引物的設計 根據文獻[5]設計引物，選擇β-actin作為內參。lincRNA-ROR引物、β-actin內參通過BLAST比對（上海生工生物公司生產提供）。引物序列見表1。

1.2.5 lincRNA-ROR水平檢測 使用熒光定量PCR儀對每個SYBR（R） Green（擴增循環后）熒光信號水平進行檢測，共有20 μL反應體系，其中50×0.4 μL的ROXReference Dye，6 μL的RNase Free ddH2O，2 μL的cDNA溶液（RT產物），

0.8 μL的PCR Reverse Primer（10 μM），0.8 μL的PCR Forward Primer（10 μM），2×10 μL的SYBR（R） Premix Ex TaqTMⅡ;先95 ℃下預變性30 s，共進行40個循環反應：95 ℃（5 s）、60 ℃（34 s），通過溶解曲線對擴增產物的純度進行檢測。獲得CT值并分析，得到lincRNA-ROR水平[6]。

1.3 觀察指標 （1）比較兩組血清中lincRNA-ROR表達情況[7]。（2）比較研究組癌組織、癌旁正常組織中lincRNA-ROR表達情況[8]。（3）分析乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR表達情況與臨床特征的關系[9]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 18.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 對照組160例，年齡19～68歲，平均（60.7±2.2）歲。研究組160例，年齡18～69歲，平均年齡（60.3±2.3）歲;其中黏液癌6例、非特殊類型浸潤性乳腺癌4例、導管內癌9例、乳腺浸潤導管癌141例;早期檢查腫瘤直徑<3 cm，且早期患者73例，中晚期患者87例。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組血清中lincRNA-ROR表達情況對比 治療前，研究組血清中lincRNA-ROR水平高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后，兩組lincRNA-ROR水平比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.3 研究組癌組織、癌旁正常組織中lincRNA-ROR表達情況對比 研究組癌組織中lincRNA-ROR水平為（2.2±0.8），癌旁正常組織中lincRNA-ROR水平為（0.8±0.2），研究組癌組織中lincRNA-ROR水平高于癌旁正常組織（P<0.05）。

2.4 乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR表達情況與臨床特征的關系分析 乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR水平升高與患者年齡、腫瘤TNM分期、人表皮生長因子受體-2（HER2）、細胞增殖指數（Ki-67）無關（P>0.05），與淋巴結轉移、PR、ER有關（P<0.05），見表3。

3 討論

乳腺癌是臨床常見的腫瘤，發生率逐漸升高。有關統計顯示，我國乳腺癌發生率較高，且該疾病是導致女性死亡的主要疾病[10]。乳腺癌治療后復發、轉移是導致死亡的主要因素，且轉移死亡率高于復發患者。因此，尋找有效的指標盡早診治非常重要。當前腫瘤發展、發生機制研究已經從RNA基因著手，研究證實多種非編碼RNA與各種腫瘤的發生、發展存在緊密的聯系[11]。隨著研究的不斷深入，lincRNA已經成為臨床研究的重點。

近幾年，臨床研究發現，lincRNA的生物學功能較多，其表達異常與腫瘤發生、發展、轉移、侵襲之間存在緊密的聯系[12]。通過熒光定量逆轉錄PCR法對乳腺癌與正常人群血清中的lincRNA-ROR水平進行檢測發現，乳腺癌患者中lincRNA-ROR水平明顯升高，可能會成為乳腺癌早期診斷分子標記物，臨床價值較高[13]。

當前有研究發現，lincRNA-ROR與胚胎干細胞分化、特性維持之間聯系緊密，在誘導多種細胞形成、轉換、促使氧化應激反應發生、DNA損傷中發揮著關鍵性作用，且在肝癌、乳腺癌患者血清、組織中存在水平升高現象[14]。本次研究顯示，治療前研究組血清中lincRNA-ROR水平高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），治療后兩組lincRNA-ROR水平比較，差異無統計學意義（P>0.05），說明血清中lincRNA-ROR水平升高、癌組織中lincRNA-ROR水平升高是乳腺癌患者的重要特征，可以將其作為潛在診斷乳腺癌的分子標記物。

最新的研究顯示，激素受體中PR、ER在乳腺癌細胞生長、增殖、分化期間發揮著一定的調控作用，乳腺癌的發生、預后與激素受體情況之間存在緊密的聯系[15]。此次研究顯示，乳腺癌患者血清中lincRNA-ROR水平升高與患者年齡、腫瘤TNM分期、人表皮生長因子受體-2（HER2）、細胞增殖指數（Ki-67）無關（P>0.05），與淋巴結轉移、PR、ER有關（P<0.05），這與其他學者的研究結果基本相同，說明lincRNA-ROR水平與乳腺癌的發生發展存在緊密的聯系。且lincRNA-ROR水平與淋巴結轉移、PR、ER存在關系，淋巴結發生轉移的患者，lincRNA-ROR水平更高，患者發生乳腺癌后PR、ER等激素水平發生異常也導致了lincRNA-ROR水平升高。

lincRNA水平異常與惡性腫瘤的生長、繁殖、散播、侵襲、預后均有關系。有關研究顯示，lincRNA-ROR在細胞生長、分化、發育、代謝期間均發揮著生物學調節作用，在腫瘤發生、發展進程中發揮著癌基因或者是抑癌基因生物學特性，在乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌組織、細胞系中均存在水平異常升高現象，但是在膠質瘤組織、細胞系中均存在水平降低現象[16]。有學者對其進行研究發現，lincRNA-ROR的水平與乳腺癌疾病情況有很大的關系，沉默的lincRNA-ROR可以對腫瘤細胞的生長進行抑制，也可以對癌細胞的轉移進行抑制，同時可以通過調控miR-145、miR-205等對細胞的生長、分化、發育、代謝造成影響[17]。

核酸可以在人體外周循環中穩定表達，以lincRNA為代表的核酸可以作為乳腺癌最新診斷因子[18]。有研究顯示，外周血中的lincRNA-ROR水平可以對乳腺癌患者體內的腫瘤情況進行動態監測與反應，而水平顯著升高可以作為腫瘤轉移、患者死亡的獨立預測因子[19]。lincRNA-ROR可以通過沉默的miR-34a來抑制吉西他濱誘導乳腺癌腫瘤細胞自我吞噬、凋亡機制;lincRNA-ROR水平升高會使乳腺癌化療耐受發生，是乳腺癌多重耐藥的重要標志物[20]。此次研究顯示，研究組癌組織中lincRNA-ROR水平為（2.2±0.8），癌旁正常組織中lincRNA-ROR水平為（0.8±0.2），研究組癌組織中lincRNA-ROR水平高于癌旁正常組織（P<0.05），說明發生乳腺癌后，患者的血清、癌組織中均有lincRNA-ROR水平升高現象。而術后患者的lincRNA-ROR水平顯著降低，說明通過lincRNA-ROR水平可以動態的反映乳腺癌患者體內腫瘤情況，血清lincRNA-ROR水平也可以作為評估最終治療效果、疾病復發的重要因子，更有利于為臨床治療提供一定的指導價值。

此次研究中，筆者發現乳腺癌患者血清、癌組織中均有lincRNA-ROR水平升高現象，且通過lincRNA-ROR水平可以為臨床早期診斷乳腺癌、最終治療效果提供一定的參考價值。但lincRNA-ROR作為一種新型的早期乳腺癌診斷、潛在治療標志物，具體價值還需要臨床進一步進行研究證實，故在今后的研究中，筆者會進行進一步的探索，為臨床提供更準確的有用信息。

綜上所述，乳腺癌檢查中，lincRNA-ROR在乳腺癌患者血清中的水平明顯升高，癌組織中的lincRNA-ROR水平顯著高于癌旁正常組織，且lincRNA-ROR水平與PR、ER受體的狀態、淋巴結轉移情況存在明顯的關系，可以將lincRNA-ROR作為乳腺癌診斷中的潛在分子標記物。

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（收稿日期：2020-05-12） （本文編輯：姬思雨）