牛病毒性腹瀉疫苗的免疫效果觀察

高祥軍

摘要：目的：觀察牛病毒性腹瀉疫苗對牛病毒性腹瀉病的免疫效果;方法：選取BVDV檢測顯示陰性的健康牛8頭，用制備好的成品實驗疫苗為8頭健康牛注射，不同時間段采集血清進行抗體檢測并觀察其臨床變化與抗體水平增減情況;結果：該疫苗具有安全可行性，免疫后不同階段抗體水平都維持在有效保護范圍內，保護率非常高，具有良好的免疫原性，可用于牛病毒性腹瀉病的安全防控，為BVDV滅活疫苗自主研發提供了良好基礎。

關鍵詞：牛病毒性腹瀉病毒;疫苗;抗體;免疫效果

牛病毒性腹瀉?。?bovine viral diarrhea，BVD） 是由黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉病毒引起的，這種傳染病極其復雜，臨川表現繁復，多以腹瀉、發熱、呼吸道癥狀、流產、死胎或畸胎、黏膜潰爛等為主要表現，是一種會引起免疫機能障礙的急、熱性傳染病。牛病毒性腹瀉病在我國流行很廣泛[1]。這種病毒進入動物機體后會引起長期的持續性的感染，同時引起免疫抑制[2]，這種感染可以持續很長時間甚至終身攜帶并持續不斷向外界排出可致病性的牛病毒性腹瀉病病毒，致使本病的防治難度大大提高并造成了長期的危害[3]。連續幾年，牛病毒性腹瀉病毒都對我國養殖戶特別是規?；B殖場造成了不小的影響，蔓延迅猛，造成的經濟損失日益嚴重[4]。目前，對牛病毒性腹瀉病的防控措施還主要是有效的疫苗接種，只是國內關于牛病毒性腹瀉病的商品化疫苗缺口很大，因此，本研究旨在制備出具有有效免疫效力的牛病毒性腹瀉病滅活疫苗，對牛病毒性腹瀉病病毒檢測陰性的牛進行接種并觀察其是否具備安全性與免疫效果，希望可以為牛病毒性腹瀉病的防治提供些許參考。

1? 材料與方法

1.1? 試驗動物

青海民和縣地區8頭健康牛，試驗組6頭（1月齡2頭、4月齡4頭），對照組2頭，牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測都為陰性。

1.2? 牛病毒性腹瀉疫苗

南京某生物技術有限公司提供的牛病毒性腹瀉疫苗Ⅰ型疫苗，所提供疫苗為試驗后期成品。

1.3? 安全性測試

1.3.1 免疫注射

選取1月齡健康犢牛2頭，注射前，先將疫苗拿到室溫下平衡溫度，達到室溫后充分搖勻，每頭牛進行頸部肌肉注射疫苗2mL，首免注射后21日再進行第二次加強免疫注射，每頭牛接種2mL。

1.3.2? 臨床觀察

疫苗注射后，觀察牛的精神狀態、體溫、采食飲水等情況，查看注射部位是否有異常變化。

1.3.3? 采集血清

免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，分別用真空采血管進行頸靜脈采血，分離血清后-20℃凍存待檢。

1.3.4? 抗體檢測

采集的血清用ELISA方法檢測抗體，直接使用牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測，記錄結果。

1.4 免疫原性測試

1.4.1 免疫注射

選取4月齡健康牛4頭，注射前，先將疫苗拿到室溫下平衡溫度，達到室溫后充分搖勻，每頭牛進行頸部肌肉注射疫苗2mL，首免注射后21日再進行第二次加強免疫注射，每頭牛接種2mL。對照組2頭健康牛不注射疫苗，正常飼養。

1.4.2? 臨床觀察

疫苗注射后，觀察牛的精神狀態、體溫、采食飲水等情況，查看注射部位是否有異常變化。

1.4.3? 采集血清

免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，分別用真空采血管進行頸靜脈采血，分離血清后-20℃凍存待檢。

1.4.4? 抗體檢測

采集的血清用ELISA方法檢測抗體，直接使用牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測，記錄結果。

2 結果

2.1 安全性測試結果

2.1.1 疫苗注射后臨床觀察

注射疫苗后，2頭1月齡牛采食、飲水一切正常，體溫無明顯升高，精神良好，臨床表現未見異常?？勺C明疫苗的安全性很好。

2.1.2 抗體檢測

疫苗免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，2頭1月齡牛的血清ELISA抗體檢測都為陽性，2頭牛在各個時間段的OD280值檢測結果可見圖1。由圖1可以看出，疫苗免疫后的第5天開始產生抗體，抗體形成是在第15天達到最高，隨后抗體水平緩慢下降，但一直維持在一定高度，疫苗免疫后180天還可以檢測出牛病毒性腹瀉病毒抗體。

2.2 免疫原性測試結果

2.2.1 疫苗注射后臨床觀察

注射疫苗后，4頭4月齡牛采食、飲水一切正常，體溫無明顯升高，精神良好，臨床表現未見異常。與對照組無異。

2.2.2 抗體檢測

疫苗免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，4頭4月齡牛的血清ELISA抗體檢測都為陽性，2頭對照組4月齡牛的血清ELISA抗體檢測仍為陰性，4頭實驗組牛在各個時間段的OD280值檢測結果可見圖2。由圖2可以看出，疫苗免疫后的第5天開始產生抗體，抗體形成是在第15天達到最高，隨后抗體水平緩慢下降，但一直維持在一定高度，疫苗免疫后180天還可以檢測出牛病毒性腹瀉病毒抗體。

3 討論

牛病毒性腹瀉病具有高度傳染性，防控困難，早年間的傳播速度驚人，國內、國外多地都有相關報道，集約化養殖場發病率居高不下，調研表明此病長期存在于我國各地大中型牛場，在養牛業中造成的經濟及其他損失不計其數[5-6]。目前，牛病毒性腹瀉病的防控措施還主要是有效的疫苗接種，但有效且長期具有保護效力的疫苗屈指可數，需要疫苗在刺激機體的細胞免疫的同時又可以剌激機體產生體液免疫，牛在注射疫苗后可以快速產生抗體，并且抗體可以持續較長時間的免疫保護[7]。目前，我國多地區都在努力研發有效的BVDV疫苗，本文所用疫苗為試驗后期成品，我們對其進行了安全性測試及免疫原性測試，結果表明，1月齡犢牛接種后各方面體征正常，無明顯臨床癥狀，表明其安全性有所保證;常規免疫4月齡易感染牛時，各方面體征正常，無明顯臨床癥狀，抗體檢測水平結果良好，正常劑量即可正常產生抗體且保護時間長達半年?？勺鳛榉揽嘏２《拘愿篂a病的優質候選疫苗。

參考文獻：

[1]黃慧文，劉芳芳，張學成，李真光，武華.2型牛病毒性腹瀉/黏膜病流行病學及其疫苗的研究進展[J].中國獸醫學報，2018，38（10）：2025-2027.

[2]陶潔，洪天旗，王亨，張信軍，劉惠莉，朱國強.我國牛病毒性腹瀉流行現狀與防控策略[J].微生物學通報，2019，46（07）：1850-1858.

[3]姜玲玲，周思旋，徐洪忠.牛病毒性腹瀉-黏膜病核酸疫苗的研究現狀[J].黑龍江畜牧獸醫，2015（15）：86-88.

[4]張國華，吳丹丹，周玉龍，范春玲，任亞超，樸范澤.牛病毒性腹瀉病毒黑龍江分離株的分離鑒定[J].中國預防獸醫學報，2015，37（10）：805-807.

[5]劉芳芳，師新川，孟相秋，趙建增.牛病毒性腹瀉的準確診斷及預防[J].中國乳業，2016（03）：42-45.

[6]蘭宇，孟相秋，趙建增.牛病毒性腹瀉的免疫預防[J].中國動物保健，2016，18（02）：29-31.

[7]陳云波.牛病毒性腹瀉及其防控措施[J].中國畜牧獸醫文摘，2015，31（12）：94-95.