高效液相色譜儀的常見故障種類及維護

謝子健

（上虞新和成生物化工有限公司，黑龍江綏化 312300）

1 高效液相色譜的相關含義

高效液相色譜是以典型的液相色譜為前提，在高壓背景下的液體為流動相的色譜期間。 其運用的固定向粒度十分小， 范圍是5～10μm， 具備傳質迅速、柱效佳等特點。 高效液相色譜方法是在六十年代后期成長起來的主要的剖析手段之一。近些年,在各方面得到了普及運用, 例如保健食品成效組成要素、維生素類、營養強化劑以及分離測算蛋白質等方面。 全球大約有80%的有機類型的化合物能夠通過HPLC 進行剖析測定。 高效液相色譜儀涉及到輸液體系、分類體系、收集體系以及分離體系等內容。輸液體系包含了貯液器以及高壓泵等、分離體系包含了進樣器以及色譜柱等、收集體系包含了餾分收集儀器以及主動收集裝置等、檢測體系包含了檢測等內容。 這些體系之間互相聯系、互相依靠，每個系統出現問題都會影響剖析測定結果的真實與可靠。所以, 排查液相色譜存在的故障并落實好常規的維護保養工作是增加色譜運用期限的核心[1]。

2 高效液相色譜儀存在的故障類型和對應的維護措施

2.1 檢測儀器方面存在的故障和維護措施

液相色譜儀經常運用的檢查儀器包括電化學、紫外以及熒光檢測儀器。 這些檢測儀器的功能就是把流經色譜分離柱的各組成要素在檢測儀器中的信訊收集起來, 按照組成成份分光吸收值、熒光的強弱程度、電極外部電流的變化狀況測算出組成要素的質量分數。 檢測儀器經常出現的故障和解決措施主要有以下兩方面。

2.1.1 檢測儀器被污染及其解決措施

管線污染出現阻塞狀況是檢測儀器經常出現的故障類型。 在流動相運用了緩沖鹽替換流動相不恰當之時， 經常會讓檢測儀器管路中出現沉淀現象， 可以先運用五倍柱體積的非緩沖液逆向流動相沖洗體系， 接著運用十倍柱體積的強溶劑如乙腈來流通， 再運用五十倍的柱體積的異丙醇進行沖洗， 最終替換上逆向流動來進行平衡[2]。

當檢測儀器管線出現堵塞現象時，通常展現成柱內的壓力上升。 這個時候可以切斷柱子，直接連接檢測儀器。 假如泵內壓力依然很高，可以判定壓力上升是因為檢測儀器管線堵塞導致。 檢測儀器進口是經常出現阻塞的位置，正向沖洗成效并不佳。 我們可以對調檢測儀器進出口，運用6mol/L 硝酸溶液來反復沖洗檢測儀器，這樣才可以快速把阻塞沖開，但是要重視運用低流速進行沖洗，同時觀察壓力的變化狀況[3]。

2.1.2 基線噪聲大及其處理措施

面對紫外檢測儀器，氘燈光源在打開之后至少要預熱30min，基線才可以穩固下來。 氘燈用的時間太久，靠近運用期限的極限，也就是運用氘燈長達1000h 的時候， 基線的噪聲會顯著上升，要第一時間用新的氘燈進行替換。 除了光源之外，線路中的氣泡也會出現噪聲。 所以，如何評判基線噪音的變大是因為光源燈的老化還是由于線路里的氣泡。 第一，可以把泵關掉接著走基線，假如噪聲馬上停止了, 基線呈現出一條直線的狀態,表明基線噪聲來源于流動的氣泡，這時候就要想辦法進行排氣。 第二，假如泵停止了之后依然有噪聲，就要考慮是燈出現了問題。 氣泡對電化學類型的檢測儀器中的操作電極也特別敏感，儀器平衡運用的時間很長， 假如流路里存在氣泡，不但基線會產生尖峰信息，還會作用在檢測工作上。 所以，在落實電化學檢測期間，流動相的配制需很嚴謹。 水要超純，除了要做好還原物外配之外，之后必須要過濾脫氣，還要現用現配。 假如泵體系不是YK 原料，也就是電化學剖次專用儀器，而是一般的高效液相色譜不銹鋼類型的泵，在剖析之前要對體系中的輸液泵、進樣器以及管道運用6mol/L 硝酸溶液鈍化， 此時要重視斷開分離柱。 或者在流動相中加上EDTA 離子隱蔽劑就能夠減縮基線的平衡時長。 假如有很大的氣泡進入到檢測儀器中， 僅僅依靠泵沖有時速度會太慢，可以暫時使泵停止下來， 關掉電化學檢測儀器，把操作電極拆下來， 運用超純水來沖洗電極外部，但是不熟練運作的技術工作者要小心運作液相色譜工藝，不適宜重復進行拆卸工作[4]。

2.2 泵壓方面經常出現的故障類型以及維護措施

2.2.1 體系壓力太高或者超壓的動因及處理舉措

首先是泵頭中PTFE 濾芯也就是過濾白芯出現堵塞狀況。 這時候要把泵頭拆下取出金屬片，查看PTFE 濾芯有沒有因為污染而出現變黑狀況，如果是要第一時間更換。 其次是連通泵、色譜柱和檢測儀器等方面的管路出現堵塞狀況。 運用逐段排查的方法來檢查管路是否出現堵塞。 如果流動相常常運用高質量分數的緩沖鹽，時而會產生緩沖鹽析出的狀況，造成壓力變大。 這時就要運用60～80℃的熱水來沖洗管線。 另外，流動相試劑瓶中的玻璃過濾頭出現堵塞現象。 就要把過濾頭拆下再運用35%質量分數的硝酸溶液浸泡1h，接著運用超純水來沖洗干凈。 再次，色譜柱假如出現堵塞現象，就會造成功能的下降，壓力升高。反沖色譜柱，假如沒有改進，就需要替換一個全新的色譜柱。 此外，還有檢測儀器流通池被污染。就可以運用30%質量分數的磷酸水溶液來沖洗，接著運用超純水清洗管線使其到中性[5]。

2.2.2 體系壓力太低或者無壓力的動因及其處理措施

一是高壓泵中的黑色Purge 閥門出現松動現象。 可以通過手動操作擰緊黑色Purge 閥來解決。二是體系的漏液。 將泵和柱溫箱等模塊打開，并查詢是否出現漏液現象。 三是泵密封圈會出現磨損狀況。認真依據相應的儀器參數來替換密封圈。四是體系中出現氣泡現象。 就要打開黑色Purge 閥門，運用大流速通常是3～5min 來排出氣泡，并且全部流動相在運用之前要先狀況超聲脫氣操作。

2.3 圖峰形經常出現的故障類型以及維護措施

2.3.1 色譜響應方面沒有出峰的動因以及處理措施

一是樣品太少，造成進樣針沒有吸入，就不能出現相應的反應。 這時就要增添樣品數量，重新引進樣品。 二是樣品放置的時間太長，造成降解。 核查樣品配制時間，重新展開前處理運作，第一時間進樣。 三是主動進樣器出現故障。 這時候就要排查進樣器狀況。 四是檢測儀器參數設定出現失誤。 就要重新設定正確的檢測儀器的參數[6]。

2.3.2 液相色譜峰拖尾的動因和處理措施

一是流動相篩選不適宜。 替換流動相或者設定適宜的流動相配比。 二是色譜柱篩選不適宜。就要按照檢測規范挑選出適宜的色譜柱。 三是色譜柱裝置不恰當，造成死體積太大。 最大限度地縮減連接頭的數量，再次裝置色譜柱，保證接頭的固定地點適宜。 四是色譜柱污染或者出現塌陷信息，造成功能下降。 這時就要清洗色譜柱，必要時可以替換新的。

2.3.3 液相色譜峰變得更寬泛的動因和處理措施

一是流動相的流動速度較慢。 這時就要適當把流速調大。 二是體系出現漏液現象，特別是在柱子與檢測儀器之間出現漏液。 檢查連接頭、泵閥門等方面是否出現漏液、 是否有鹽析出現，假如漏液現象嚴重，就要替換密封圈。 三是假如流動相中存在緩沖液， 可能是緩沖液質量分數不夠。 這時就要增加緩沖液的質量分數，并重新進樣。 四是色譜柱被污染或者柱性能降低。 這時就要用新的色譜柱來進行替換。 五是產生兩個或者多個沒有全部分離的峰。 這時就要調節流速與流動相配比來改進分離程度。

2.3.4 液相色譜峰出現前延的動因和處理措施

一是柱內溫度設定的太低。 需要升高柱內溫度。 二是樣品溶劑挑選不宜。 運用流動相當成樣品溶劑。 三是柱上樣品負載過量或者樣品質量分數太高。 這時候要減少進樣體積或者使樣品的質量分數下降。四是色譜柱高效降低。測量柱效時，必要時要替換原有的色譜柱。

2.3.5 液相色譜峰出現分叉或者鬼峰的動因和處理措施

一是樣品前的處置運作不標準， 混入雜質或者樣品間有其他的組成要素。首先要運用固相萃取柱以及濾膜等來凈化這些樣品，其次運用空白樣品以及標準品來對照檢查。二是前一針進樣的峰并未完全走掉。這時就需延長樣品運作時間或提升流動速度。三是樣品溶劑并不純粹。運用色譜純級溶劑同時展開驗證工作， 再運用流動相當成樣品的溶劑。四是流動相并不純粹或配制流動相期間混入雜質。 沖洗流動相試劑瓶和過濾頭，運用干凈的容器來配比流動相。五是檢測儀器流通池出現污染。運用甲醇或者其他強極性溶劑來沖洗流通池，如有必要，可以運用1N 的硝酸來化解污染。

2.4 儲留時長問題以及維護措施

高效液相色譜儀中儲留時間問題，一是體現在儲留時間更變方面，其出現的動因是柱溫和柱內狀況的變更、柱內出現污染和緩沖液容量不夠等。 基于此，就要引到恒溫箱，按時清洗柱，同時運用緩沖液處理緩沖液容量不夠的問題。 二是儲留時間太長，這種故障產生的動因主要是因為流動相構成變化、管路泄漏和硅膠柱活性點出現變更等，就要有效規避流動相產生沉淀現象，展開泵密封圈的替換，并需把改性劑引到流動相內。

3 結束語

剖析高效液相色譜儀的存在的故障類型并落實好相應的維護措施是確保高校液相色譜高效運作的必要使手段。 剖析期間要按照出現的泵壓、基線、峰形和儲留時間等問題出現的動因來運用對應的對策，而在日常試驗之后也要做好進樣閥和色譜柱的日常維護檢查作業，以確保設施的運用成效。