不同產地蟬蛻藥材的質量研究*

鐘 可，王票票，呂麗娟

(1貴州中醫藥大學藥學院，貴州 貴陽 550025；2貴州中醫藥大學藥用動物(昆蟲類)研究中心，貴州 貴陽 550025)

蟬蛻來源于蟬科(Cicadidae)昆蟲黑蚱CryptotympanapustulataFabricius的若蟲羽化時脫落的皮殼。性寒，味甘、咸，歸肺、肝經，具有疏散風熱、利咽、透疹、明目退翳等功效[1]。藥理實驗證明蟬蛻有鎮咳祛痰平喘、抗炎、鎮靜止痛解痙、抗驚厥、抗凝等作用[2]，其含有的化學成分主要為甲殼素、氨基酸和微量元素[3-5]，主產于浙江、山東、河南、河北、四川、江蘇、湖北、廣西、貴州等省，是常用的昆蟲類動物藥之一[6]。近年來，蟬蛻的價格上漲，市面上出現以次充好的蟬蛻中藥材，蟬蛻的質量控制備受關注[7]，但是目前2020年版《中國藥典》中缺乏蟬蛻的浸出物、水分、灰分的定性定量指標，難以評判蟬蛻藥材質量的優劣。因此，本文通過對蟬蛻浸出物、灰分、水分含量測定進行研究，為中藥蟬蛻的質量控制提供參考。

1 實驗儀器及試藥

1.1 實驗儀器

分析天平(瑞士梅特公司)、數顯恒溫水浴鍋(上海雙捷實驗設備有限公司)、干燥器、蒸發皿、電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博訊公司)、燒杯、漏斗、錐形瓶、移液管、膠頭滴管、玻璃棒、冷凝管、鐵架臺、量筒、馬弗爐、坩堝、電爐、托盤、扁形稱量瓶。

1.2 實驗試劑及藥材來源

娃哈哈純凈水、無水乙醇(天津市富宇精細化工有限公司)。中藥材蟬蛻購于貴州省貴陽市東升藥材市場，產地分別是貴州、四川、廣西、河南。由貴州中醫藥大學藥學院鐘可副教授鑒定為蟬科(Cicadidar)昆蟲黑蚱CryptotympanapustulataFabricius的若蟲羽化時脫落的皮殼，粉碎，過二號篩，混合均勻，制成供試品。

2 方法

2.1 浸出物含量測定

2.1.1 水溶性浸出物含量測定

參照2020版《中國藥典》四部(通則2201)[8]。水溶性冷浸法：取中藥材蟬蛻供試品粉末4 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，時時振搖6 h，再靜置 18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴鍋上蒸干后，在105 ℃的烘箱內干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。計算供試品中浸出物的百分含量(%)。水溶性熱浸法：取中藥材蟬蛻供試品粉末4 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，加入水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，錐形瓶連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液 25 mL，于已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴鍋上蒸干后，于105 ℃的烘箱內干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。計算供試品中浸出物的百分含量(%)。

2.1.2 醇溶性浸出物含量測定

醇溶性冷浸法：以不同濃度的乙醇(10%、20%、30%、50%、70%、90%、100%)作溶劑，每種濃度的乙醇設置三組平行，按照 2.1.1的冷浸法實驗步驟操作，計算供試品中浸出物的百分含量(%)。醇溶性熱浸法：以不同濃度的乙醇(10%、20%、30%、50%、70%、90%、100%)作溶劑，每種濃度的乙醇設置三組平行，按照 2.1.1的熱浸法實驗步驟操作，計算供試品中浸出物的百分含量(%)。

2.1.3 不同產地蟬蛻浸出物的含量測定

根據以上實驗結果，篩選出中藥蟬蛻最佳浸出物含量測定法對不同產地蟬蛻進行浸出物含量測定。

2.2 不同產地蟬蛻灰分的測定

照2020版《中國藥典》四部(通則2302)總灰分測定法[8]。蟬蛻供試品粉碎，過二號篩，混合均勻后，取供試品2 g置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準確至0.01 g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～ 600 ℃，使完全灰化并至恒重。根據殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(%)。

2.3 不同產地蟬蛻水分的測定

照2020版《中國藥典》四部(通則0832)水分測定中烘干法[8]。取蟬蛻供試品2 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過10 mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100～105 ℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據減失的重量，計算供試品中含水量(%)。

3 結果

3.1 浸出物含量測定

3.1.1 水溶性浸出物含量測定

取貴州產蟬蛻粉末作為供試品，照2.1.1項下方法進行水溶性浸出物及醇溶性浸出物含量測定，結果分別見表1-表4。

表1 水溶性浸出物冷浸法含量測定結果(n=3)Tab.1 Determination results of water-soluble extract by coldleaching method(n=3)

表2 水溶性浸出物熱浸法含量測定結果(n=3)Tab.2 Determination results of water-soluble extractby hot leaching method(n=3)

表3 醇溶性浸出物冷浸法含量結果(n=3)Tab.3 Determination results of alcohol-soluble extractby cold leaching method(n=3)

表4 醇溶性浸出物熱浸法含量結果(n=3)Tab.4 Determination results of alcohol-soluble extractby hot leaching method(n=3)

續表4

實驗結果顯示，蟬蛻水溶性冷浸法浸出物含量為2.01%，水溶性熱浸法浸出物含量為4.03% ，表明中藥蟬蛻的水溶性浸出物測定熱浸法優于水溶性冷浸法。

3.1.2 醇溶性浸出物含量

由表4可知：70%醇溶性熱浸法得到蟬蛻的浸出物含量為7.18%，水溶性熱浸法浸出物含量為4.03%，水溶性冷浸法浸出物含量為2.01%，50%醇溶性冷浸法的浸出物含量為1.92%，實驗結果表明：70%醇溶性熱浸法的浸出物含量最高，為蟬蛻藥材浸出物最佳測定法。

3.1.3 不同產地蟬蛻浸出物含量的測定

實驗結果表明，不同產地蟬蛻的浸出物含量在5.90% ～7.68%之間，其中河南產浸出物含量最高，為7.68%；最低為四川產蟬蛻，浸出物含量為5.90%。見表5。

表5 不同產地蟬蛻浸出物含量測定結果(n=3)Tab.5 Determination results of extract content of cicada sloughfrom different producing areas(n=3)

3.2 不同產地蟬蛻灰分含量的測定

實驗結果表明(表6)，不同產地蟬蛻的灰分含量在11.74% ～ 22.78%之間，其中四川產灰分含量為22.78%，廣西產灰分含量為18.64%，貴州產灰分含量為12.92%，河南產灰分含量為11.74%。平均值為16.52%。

表6 不同產地蟬蛻灰分含量測定結果(n=3)Tab.6 Determination results of ash content of cicada sloughfrom different producing areas(n=3)

3.3 不同產地蟬蛻水分含量的測定

實驗結果表明(表7)，不同產地蟬蛻的水分含量在7.63% ～ 9.31%之間，其中貴州產的水分含量為9.31%，四川產的水分含量為8.95%，廣西產的水分含量為8.75%，河南產的水分含量為7.63%。

表7 不同產地蟬蛻水分含量測定結果(n=3)Tab.7 Determination results of moisture content of cicadaslough from different producing areas(n=3)

4 結果與討論

中藥蟬蛻浸出物含量測定結果表明：蟬蛻的水溶性熱浸法浸出物含量最高，為4.03%；蟬蛻的醇溶性冷浸法是以50%乙醇浸出物含量最高，為1.92%；蟬蛻的醇溶性熱浸法以70%乙醇浸出物含量最高，為7.18%。因此蟬蛻的浸出物含量測定以70%乙醇熱浸法提取最佳。不同產地的蟬蛻浸出物含量在5.90%～7.68%之間，河南(7.68%)，廣西(7.49%)，貴州(7.33%)，四川(5.90%)。整體來看，蟬蛻浸出物含量不高，但是在蟬蛻藥材活性成分或指標成分不清或含量低的情況下，浸出物可作為其質量控制指標之一，然而目前還未規定蟬蛻浸出物含量測定的質量標準。本實驗通過測定蟬蛻浸出物的含量，確定了最佳的蟬蛻浸出物提取方法，以70%乙醇熱浸法提取率最高，建議按醇溶性浸出物熱浸法測定，乙醇浸出物不得少于5.0%。

中藥蟬蛻灰分含量測定結果表明：蟬蛻灰分含量在11.74%～22.78%之間，四川(22.78%)、廣西(18.64%)、貴州(12.92%)、河南(11.74%)?；曳值暮肯鄬碚f較高，根據以上結果分析，蟬蛻灰分含量偏高可能是由于蟬生活習性、收集、加工、運輸、儲存等環節有其他無機物污染或摻雜。因蟬的若蟲在地下度過兩三年才破土而出；采收時蟬蛻掉落在泥土上，加工環節、儲存環境等也可能導致蟬蛻攜帶上雜質，讓殼衣混入泥沙和其他雜質[9]。為保證蟬蛻藥材的質量，灰分不應過高；應盡可能在晴朗天氣采收，避免沾染更多泥土；采收加工過程中應盡可能避免更多泥土等雜質混入，儲存環境保持干燥與潔凈。目前《中國藥典》還未限定蟬蛻灰分的含量，為保證蟬蛻藥材質量，以平均值的±20%為限度制定限量范圍，建議質量標準中增加蟬蛻灰分含量限定項，不得超過20.0%。

蟬蛻水分含量在7.63%～9.31%之間，貴州(9.31%)、四川(8.95%)、廣西(8.75%)、河南(7.63%)，其中河南產地水分含量最少，整體來看，水分的含量較低，低于10%以下。目前還未規定蟬蛻水分含量測定的質量標準，若藥材含水量過大，則容易發霉變質。降低蟬蛻藥材含水量可在凈制后將其及時曬干或烘干，儲存時考慮環境是否通風干燥等，建議蟬蛻的水分含量不得超過10.0%。