注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊超數排卵效果的影響

馬文奎，王建魁，李廣棟，吳 昊，孫光澤，高 爽，李 瑞，肖西山，劉建斌，鄧學梅，阿布力孜·吾斯曼，劉國世*

（1.新疆農業大學動物科學學院，新疆烏魯木齊 830052；2.中國農業大學動物科學技術學院，北京 100193；3.內蒙古草原金峰畜牧有限公司，內蒙古赤峰 024000；4.北京農業職業學院畜牧獸醫系，北京 102400；5.中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅蘭州 730050）

胚胎移植技術可充分發揮優良母畜在家畜品種改良和種群擴繁中的潛力[1]，還可使優質種畜基因穩定遺傳下去，有效縮短世代間隔[2-5]，是普遍使用的快速擴繁手段[6]。前列腺素在調節母畜發情、超數排卵、人工流產等羊業生產環節中起著至關重要的作用[7-8]。當前技術人員不能借助現有的B 超儀器將30 d 以內的胎兒檢測出來，因此對甘肅高山美利奴細毛羊埋栓前進行前列腺素處理，不但可以起到人工流產的作用，而且可以治療繁育障礙，還能提高同期發情和胚胎移植效率。但在胚胎移植中采集到的胚胎質量會影響胚胎移植的整體效果[9]，因此在手術沖胚后對收集到的胚胎進行統計、分析和鑒定獲得的高質量胚胎能顯著提高胚胎移植效率。本實驗旨在探究甘肅高山美利奴細毛羊在CIDR 埋栓前14 d 注射前列腺素是否會提高排卵效率，以期為提高羊良種繁育效率提供參考。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 選用內蒙古赤峰市草原金峰畜牧有限公司12 只甘肅高山美利奴細毛羊作為供體，體重在45～76 kg，年齡2～3 歲,體況良好，無繁殖疾病。選用膘情良好，無繁殖疾病的2～3 歲烏珠穆沁羊做受體，供受體胎次均為3～5 胎。采精公羊性欲旺盛，精液品質檢查優良，精子活力0.6 以上。

1.2 實驗藥品與試劑 促卵泡素（Follicle-Stimulating Hormone，FSH）、促黃體素（Luteinizing hormone，LH）、孕馬血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG）、氯前列醇鈉注射液（Prostagla ndin，PG）均由寧波三生生物科技有限公司生產；陰道栓CIDR：購買新西蘭產EAZI-BREED-CIDR，20 個/袋；Holding 培養液：新西蘭生產，50 mL/袋；75%酒精、碘伏、高濃度新潔爾滅、磺胺、維生素AD、林可霉素、生理鹽水等為國產。

1.3 設備和器械 采精設備（假陰道）、精液品質檢測顯微鏡、內窺鏡輸精設備、手術架、沖卵管、恒溫板、體視鏡（檢胚）、手術刀柄、直剪、止血鉗、子宮鉗、創巾鉗等。

1.4 供體羊超數排卵 將試驗羊分成試驗組和對照組，均采用CIDR+FSH+PMSG 法。試驗羊肌肉注射前列腺素1 mL（劑量0.2mg），注射后第14 天埋置CIDR 栓，同時肌肉注射3～5 mL 維生素AD。埋栓后第10 天開始注射FSH，根據體重和手術次數調控劑量，總劑量區間為300～500 IU/ 只，4 d 8 針注射法依次遞減，第13 天注射最后1 針（第7 針）FSH 時同時取出CIDR 栓，取栓后12 h 注射PMSG，劑量330～450 IU/只。

1.5 供體羊配種 供體羊在取栓后48～54 h 進行內窺鏡人工輸精。提前組裝好內窺鏡輸精設備。將無傳染性疾病，性欲旺盛的供體公羊生殖器部位用衛生紙擦拭干凈，找1 只發情母羊，利用假陰道采集精液。供體母羊仰臥保定，備好表皮，在距離乳房下側6～8 cm 處進行微創打孔，一般左右兩側對稱。最后左手持內窺鏡進入羊腹腔找到子宮角，右手利用輸精槍將公羊精液輸入即可，子宮左右側各輸精0.2 mL。

1.6 胚胎收集和質量檢測 內窺鏡輸精后第5～6 天手術法從子宮角沖胚，回收胚胎。在40 倍體視顯微鏡下撿出胚胎，剔除未受精卵，觀察受精卵狀態、色澤、大小、數量、飽滿度以及發育期和發育階段。

1.7 受體羊的處理和腹腔鏡胚胎移植 采用CIDR+PMSG法處理，與供體同步埋栓，且同時撤栓，撤栓時肌肉注射PMSG，劑量330～450 IU/只,撤栓后24～36 h 試情，記錄發情時間。供體在5～6 d 進行沖胚，受體通過腹部微創手術法進行移植，采用腹腔鏡觀察子宮兩側，單側發現1～3個黃體則可進行移植，術后注射抗生素進行消炎。

1.8 供受體羊術后管理 供受體羊術后分欄喂養，保持足夠飲水和飼料，圈舍內保持干燥整潔，防止術后感染，觀察1～2 d，在胚胎移植后45 d 進行妊娠檢查。

1.9 統計分析 數據先用Excel 歸類匯總，使用SPSS 26.0 統計軟件進行單因素方差分析，結果如未特殊說明，均使用平均值±標準誤進行表示，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標準。

2 結果與分析

2.1 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊發情率和黃體數的影響 由表1 可知，注射前列腺素對發情率、平均黃體數、平均左側黃體數、平均右側黃體數沒有顯著影響。試驗組的發情率為100%，對照組為83.33%；試驗組的平均黃體數為18.50 枚，對照組為14.66 枚；試驗組的平均左側黃體數為9.17 枚，對照組為7.33 枚；試驗組平均右側黃體數為7.67 枚，對照組為7.33 枚。

表1 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊發情率和黃體數的影響

2.2 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊回收胚胎數和可用胚胎數的影響 由表2 可知，試驗組的平均回收胚胎數、平均可用胚胎數以及胚胎回收率均高于對照組（P＜0.05）。注射前列腺素有利于胚胎移植中獲得平均回收胚胎數、平均可用胚胎數和提高胚胎回收率。

表2 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊回收胚胎數和回收胚胎率的影響

2.3 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊受精率和胚胎質量的影響 由表3 可知，試驗組的受精率為91.18%，對照組為89.36%（P＞0.05）；試驗組的平均桑椹胚數為5.33 枚，對照組為3.83 枚（P＞0.05），試驗組的平均囊胚數高于對照組（P＜0.05）。注射前列腺素有利于提高胚胎移植中獲得的囊胚數。

表3 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊受精率和胚胎質量的影響

2.4 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊受胎率的影響 由表4 可知，妊娠率試驗組85.06%，對照組81.58%（P＞0.05）。

表4 注射前列腺素對甘肅高山美利奴細毛羊受胎率的影響

3 討 論

3.1 同期發情效果分析 同期發情技術可以追溯到20世紀50 年代，最初以孕激素和前列腺素聯合使用為主。隨著養殖業的發展，不同激素聯合使用顯著提高同期發情效果，因此研究制定同期發情方案成為了動物繁殖領域的焦點問題[10-11]。研究表明前列腺素在家畜同期發情過程中具有重要作用[12-13]，應用PMSG 結合前列腺素可以提高母牛同期發情效率[14]。胡雄貴等[15]證實使用前列腺素會提高母牛的發情率。鄧緣等[16]使用PG+PMSG 法對54 只湘東黑山羊在2～5 d 內集中發情和配種，同期處理的發情率87.0%（47/54）顯著提高。李芳芳等[17]對努比亞山羊同期發情中使用CIDR+PMSG+PG、CIDR+FSH+PG、PIDR+PMSG+PG3種同期方案，發情率分別為100%、100%、91.67%。鄧緣等[16]在同期發情方案中，先注射前列腺素進行溶解黃體，使母羊處于同一發情生理階段。李芳芳等[17]在同期發情方案中最后注射前列腺素，促進卵泡發育和排卵效果。在本研究中，埋植CIDR 栓前14d 注射前列腺素，溶解綿羊卵巢黃體，和鄧緣等方案有類似功能，同期發情排卵數和卵母細胞質量顯著提高。

3.2 超數排卵效果分析 超數排卵技術是胚胎移植中的關鍵環節[18]。董志岷等[19]用CIDR+FSH+PMSG+PG對38 只杜泊羊進行超數排卵，平均沖胚7.52 枚，結果顯示，注射PMSG 增加了內源促黃體素含量，促進了卵泡成熟和排卵后顆粒細胞黃體化，提高了超數排卵效果。本實驗采用PG+CIDR+FSH+PMSG 進行，平均沖胚15.50 枚與上述不同，可能與供體年齡、輸精方式等有關。本實驗通過對高山美利奴羊進行超排處理，最終平均胚胎回收率為92.00%。馮新宇等[20]在超排時將 6針遞減法（12.5 mL Folltropin-V）作為對照組；6 針遞減法（10 mL Folltropin-V）為試驗 I 組；采用 8 針遞減法（12.5 mL Folltropin-V）為試驗 II 組；不改變劑量和給藥方式，僅將畜舍內溫度降至零下18℃ 時為試驗 III 組，結果表明，對照組、實驗I 組、II 組、III 組胚胎回收率分別為93.12%、65.13%、73.83%、82.77 %。高峰等[21]采用二次前列腺素（PG）法、陰道栓（CIDR）+PG 法和CIDR+PMSG+PG 法對6 組湖羊進行同期發情試驗，結果表明3 種方法中 CIDR+PMSG+PG 法同期發情效果較理想。馮新宇與高峰等在超數排卵中使用不同FSH 注射劑量、給藥方式、環境溫度、超排方案等[20-21]。本試驗與馮新宇和高峰試驗方案不同，取得的結果有所不同，可能是與品種、試驗方法等不同導致。在本研究中，CIDR 埋栓前14 天進行注射前列腺素，發情率和高峰（93.2%）[22]的研究結果一致，胚胎回收率高于馮新宇[20]及高峰等[22]（55.60%）。

4 結 論

在養羊生產中，注射前列腺素14 d 后母羊處于新的周期黃體期，周期黃體功能可能出現退化，此時埋置CIDR 孕酮陰道栓可延長黃體期，14 d 左右撤栓（CIDR）后可顯著促進卵泡發育，卵泡數增加。在同期發情前14 d 注射前列腺素，可以有效提高胚胎移植供體胚胎回收率和平均可用胚胎數。