彝藥野拔子的化學成分研究

林春燕，董 媛，張赟華，張雯潔

（云南省食品藥品監督檢驗研究院，工業與信息化部產業技術基礎公共服務平臺，云南 昆明 650106）

野拔子為唇形科香薷屬植物野拔子（Elsholtzia rugulosaHemsl.）的干燥地上部分，為常見的彝族藥，彝藥名有“阿能拋”和“爾吾”。2000多年前，野拔子已經作為彝藥在使用[1]。成書于1566年的彝藥書籍《齊蘇書》中也記載了野拔子，認為其可治療消化不良、胃痛、膈食，治跌打損傷、瘀血內停[2]。清代彝族醫藥書籍《醫病好藥書》中也收載了多個野拔子的單方或復方?！吨袊妥逅帉W》中彝醫傳統應用有“治風寒感冒；治蛔蟲??；治蛇咬傷；治肚腹寒痛；治跌打損傷；治胃痛；治心情不舒、傷食等”[3]。前期研究表明，野拔子中主要含黃酮類、萜類、苯丙素類、有機酸、甾體等[4]。

為進一步研究野拔子的藥用物質基礎，本文采用多種柱色譜方法對野拔子進行了化學成分研究，得到6個化合物，其結構分別鑒定為：豆甾醇（I）、perilloxin （II）、熊果酸 （III）、烏蘇酸內酯（IV）、2α, 3α, 19α-三羥基熊果酸（V）、白樺脂酸（VI）。其中，化合物II和IV為首次從該屬植物中分離得到，化合物V為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津 LC/MS-IT-TOF質譜儀（日本島津公司）；Advance III-400型超導核磁共振儀，III-600型超導核磁共振儀（德國Bruker公司），以TMS為內標。

1.2 材料

MCI CHP20P填料（75～150 μm，日本Misubishi Chemical）；GF254薄層硅膠板（煙臺新諾化工有限公司）；柱色譜硅膠（200～300目，海祥化工有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）；乙腈（色譜純，德國Merck公司）；熊果酸對照品（批號：110742-201823，含量：99.9 %，中國食品藥品檢定研究院）。

野拔子地上部分于2021年11月8日采自云南省玉溪市梁王山，由云南大學標本館王煥沖老師鑒定為野拔子Elsholtzia rugulosaHemsl.，標本（編號：20211108-3-1）存放于云南省食品藥品監督檢驗研究院。

2 提取與分離

取野拔子地上部分（5 kg），曬干粉碎，用90 %乙醇冷浸提取2次，每次20 L，合并后減壓濃縮，得到浸膏（355 g）。浸膏用適量甲醇溶解，吸附于300 g硅膠（200～300目），進行硅膠柱層析，以氯仿、甲醇-氯仿（5:95）、甲醇-氯仿（10:90）、甲醇進行梯度洗脫，所得流份經薄層色譜（TLC）檢測后合并，得到流份Fr. A～Fr. L。

Fr. G（8.0 g）經硅膠柱層析，以石油醚、丙酮-石油醚（5:95）、丙酮-石油醚（10:90）為洗脫溶劑進行梯度洗脫，所得流份經TLC檢測后合并，得到Fr. G-1～ Fr. G-6。Fr. G-1（500 mg）經Sephadex LH-20柱層析純化[洗脫劑：甲醇-氯仿（50:50）]，重結晶后得到化合物I（40 mg）。取Fr.G-1（2.0 g）進行硅膠柱層析，用乙酸乙酯-石油醚（5:95）洗脫，所得流份經TLC檢測后合并，得到Fr. G-2-A～Fr. G-2-F。Fr.G-2-D經Sephadex LH-20柱層析純化[洗脫劑：甲醇-氯仿（50:50）]，得到化合物II（400 mg）。

Fr. J（120 g）經硅膠柱層析，依次用丙酮-石油醚（5:95）、丙酮-石油醚（10:90）、丙酮-石油醚（20:80）、丙酮-石油醚（40:60）、丙酮洗脫，所得流份經TLC檢測后合并，得到Fr. J-1～Fr. J-8。Fr. J-3（3.0 g）經硅膠柱層析，甲醇-氯仿（1:300）洗脫，所得流份經TLC檢測后合并，得到4個流份（Fr. J-3-a～Fr. J-3-d）。Fr. J-3-c（2.0 g）首先經MCI gel CHP 20P（75～150 μm）柱層析[洗脫劑：甲醇-氯仿（90:10）]，繼續經硅膠柱層析，洗脫溶劑為乙酸乙酯-石油醚（10:90），所得流份經TLC檢測合并，得到6個流份（Fr. J-3-c-1～Fr. J-3-c-6）。流份Fr. J-3-c-1（150 mg）和Fr. J-3-c-2（600 mg）進一步經Sephadex LH-20柱層析純化，得到化合物IV（15 mg）和V（80 mg）。

Fr. J-8經硅膠柱層析，甲醇-氯仿（1:100）洗脫，所得流份經TLC檢測合并，得到6個流份（Fr.J-8-a～Fr. J-8-f）。Fr. J-8-a與熊果酸對照品進行對照，鑒定為化合物III（1.5 g）。流份Fr. J-8-c（1 g）經硅膠柱層析，洗脫溶劑依次為乙酸乙酯-石油醚（20:80）、乙酸乙酯-石油醚（30:70），得到化合物VI（120 mg）。

3 結構鑒定

化合物I：白色針狀結晶，HR-ESI-MSm/z413.3533[M+H]+（C29H48O，計算值為 413.3783）；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.34（1H，m，H-6），5.14 （1H，dd，J=15.1，8.7 Hz，H-22），5.01（1H，dd，J=15.1，8.8 Hz，H-23），3.51（1H，m，H-3），1. 05（3H，s，H-19），1.00（3H，d，J=5.1 Hz，H-21），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.87～0.77（6H，m，H-26，27），0.67（3H，s，H-18）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.4（C-1），31.8（C-2），71.9（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.0（C-7），32.0（C-8），50.3（C-9），36.3（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.3（C-13），56.2（C-14），24.4（C-15），28.4（C-16），56.9（C-17），12.0（C-18），19.5（C-19），40.6（C-20），21.2（C-21），138.5（C-22），129.4（C-23），51.4（C-24），32.0（C-25），21.2（C-26），19.2（C-27），25.6（C-28），12.1（C-29）。以上數據與文獻[5]報道基本一致，故鑒定該化合物為豆甾醇。

化合物II：黃色粉末，HR-ESI-MSm/z275.1296 [M+H]+（C16H18O4，計算值為275.1278）；1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.46（1H，s，H-4），5.86（1H，d，J=7.1 Hz，H-9），5.79（1H，d，J=7.2 Hz，H-7），5.66（1H，d，J=7.2 Hz，H-6），5.46（1H，d，J=7.1 Hz，H-8），4.50（1H，t，J=9.0 Hz，H-2），3.69（3H，s，H-1’’），3.08（1H，dd，J=16.1，8.7 Hz，H-3），3.00（1H，dd，J=16.1，9.3 Hz，H-3），1.31（3H，s，H-2’），1.18（3H，s，H-3’）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：89.07（C-1），31.32（C-2），127.2（C-3），108.6（C-4），150.9（C-5），123.0（C-6），108.6（C-7），145.4（C-8），147.0（C-9），107.4（C-10），118.2（C-11），150.8（C-12），71.8（C-13），26.3（C-14），24.2（C-15），56.9（C-16）。以上數據與文獻[6]報道基本一致，故鑒定該化合物為perilloxin。

化合物III：白色粉末。HR-ESI-MSm/z457.3684 [M+H]+（C30H48O3，計算值為457.3682）；TLC檢查中，與熊果酸對照品Rf值一致，鑒定該化合物為熊果酸。

化合物IV：白色粉末。HR-ESI-MSm/z455.3527 [M+H]+（C30H46O3，計算值為455.3525）；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.96（1H，d，J=11.4 Hz，H-12），5.53（1H，dd，J=10.3，3.1 Hz，H-11），3.22（1H，dd，J=11.5，4.8 Hz，H-3），1.16（3H，s，27-Me），1.05（3H，s，26-Me），1.00（3H，d，J=4.3 Hz，29-Me），0.99（3H，s，25-Me），0.93（3H，d，J=2.8 Hz，30-Me），0.91（3H，s，23-Me），0.79（3H，s，24-Me）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ：38.4（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），39.1（C-4），54.9（C-5），17.8（C-6），31.5（C-7），42.1（C-8），53.2（C-9），36.5（C-10），129.0（C-11），133.6（C-12），89.8（C-13），41.8（C-14），25.7（C-15），22.9（C-16），45.2（C-17），60.7（C-18），40.4（C-19），38.3（C-20），31.0（C-21），31.4（C-22），27.9（C-23），15.1（C-24），19.3（C-25），19.0（C-26），16.2（C-27），180.1（C-28），18.0（C-29），18.1（C-30）。以上數據與文獻報道基本一致[7]，鑒定化合物IV為烏蘇酸內酯。

化合物V：白色粉末。H R-E S I-M Sm/z489.3573 [M+H]+（C30H48O5，計算值為489.3580）；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δ：5.60（1H，brs，H-12），4.32（1H，d，H-2），3.78（1H，d，J=2.3 Hz，H-3），3.05（1H，s，H-18），0.91，0.99，1.12，1.28，1.44，1.65（各3H，s），1.12（d，J=3.8 Hz）。13C NMR（150 MHz，C5D5N）δ：43.3（C-1），66.6（C-2），79.8（C-3），39.0（C-4），49.2（C-5），19.1 （C-6），34.0（C-7），41.1（C-8），48.1（C-9），39.2（C-10），24.6（C-11），128.5 （C-12），140.4（C-13），42.9（C-14），29.7（C-15），26.9（C-16），48.8（C-17），55.1（C-18），73.2（C-19），42.7（C-20），27.4（C-21），39.3（C-22），30.0（C-23），22.8（C-24），17.1（C-25），17.8（C-26），25.1（C-27），181.2（C-28），27.6（C-29），17.3（C-30）。與文獻報道的數據基本一致[8]，鑒定該化合物為2α, 3α, 19α-三羥基熊果酸。

化合物VI：白色粉末。HR-ESI-MSm/z457.3671 [M+H]+（C30H48O3，計算值為457.3682）；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δ：4.97（1H，brs，H-29α），4.79（1H，brs，H-29β），1.81（3H，s，H-23），1.25（3H，s，H-24），1.09（3H，s，H-30），1.08（3H，s，H-26），1.03（3H，s，H-25），0.84（3H，s，H-27）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δ：39.1（C-1），28.8（C-2），78.6（C-3），40.0（C-4），56.4（C-5），19.3（C-6），35.3（C-7），41.6（C-8），51.4（C-9），38.1（C-10），21.7（C-11），26.6（C-12），39.8（C-13），43.3（C-14），30.8（C-15），33.4（C-16），57.1（C-17），48.2（C-18），50.2（C-19），151.8（C-20），31.7（C-21），38.0（C-22），29.2（C-23），16.9（C-24），16.8（C-25），16.9（C-26），15.4（C-27），179.4（C-28），110.4（C-29），20.0（C-30）。與文獻報道的數據基本一致[9]，鑒定該化合物為白樺脂酸。

4 結論

首先，在對野拔子地上部分進行的植化分離中發現三萜類成分種類較多且量大，本研究中得到的6個化合物中4個為五環三萜類；其次，文獻中報道的五環三萜類成分較多，且得量較大，包括熊果酸、2α-羥基烏蘇酸、2α-羥基齊墩果酸、齊墩果酸、樺木酸、3, 24-二羥基-17, 21-半縮醛基-12(13)齊墩果烯、2, 3-二羥基5(6), 2(13)-二烯熊果酸[9-12]等。因此，五環三萜類為野拔子中主要化學成分。