復方銀杏通脈口服液的質量標準提高研究

鄒奇 呂珍珍 聶蔚 唐心文 楊勇 侯鳳飛

【摘 要】 目的：進一步優化提高復方銀杏通脈口服液質量標準，以提升產品質量的可控性，保障藥品的有效性。方法：采用薄層色譜（TLC）法定性鑒別復方銀杏通脈口服液中女貞子和鉤藤藥材；丹酚酸B和二苯乙烯苷用HPLC法測定含量。結果：薄層色譜斑點清晰，比移值較適合，陰性對照無干擾。主要特征成分丹酚酸B和二苯乙烯苷在各自線性范圍內線性關系良好，平均加樣回收率分別為95.49%和94.84% ，RSD分別為2.12%和1.91%（n=6）。結論：多味藥材定性鑒別和特征成分含量測定相結合建立的復方銀杏通脈口服液質量控制方法科學合理，保證質量的可控，可為該制劑后續質量提升提供依據。

【關鍵詞】 復方銀杏通脈口服液；丹酚酸B；二苯乙烯苷

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2023）09-0039-05

Abstract：Objective To further optimize and improve the standard of Compound Yinxing Tongmai Oral Liquid， so as to improve the controllability of product quality and ensure the effectiveness of drugs.Methods TLC was used to qualitatively identify Ligustrum lucidum and Uncaria hook in Compound Yinxingtongmai Oral Liquid; salvianolic acid B and stilbene glycosides were determined by HPLC.Results The spots of TLC were clear， the ratio shift was suitable， and the negative control had no interference. The main characteristic components salvianolic acid B and stilbene glycosides had good linear relationship in their respective linear ranges，the average sample recovery rates were 95.49% and 94.84%， and the RSDs were 2.12% and 1.91%， respectively（n=6）.Conclusion The quality control method of compound Yinxing Tongmai oral liquid established by the combination of qualitative identification of multi-flavor medicinal materials and content determination of characteristic components is scientific and reasonable， which can ensure the controllability of quality， and can provide a basis for the subsequent quality improvement of the preparation.

Keywords：Compound Yinxing Tongmai Oral Liquid; Salvianolic Acid B; Dstilbene Glycoside

復方銀杏通脈口服液組方含丹參、銀杏葉、鉤藤、女貞子、杜仲、川牛膝、制何首烏7味中藥材。其功能主治為滋陰補腎，舒肝通脈。用于中老年人輕度腦動脈硬化所致的頭暈頭痛、耳鳴耳聾、視物模糊、記憶力減退、腰膝酸軟、肢體麻木等證屬肝腎陰虛者［1］。其現行標準只對銀杏葉、制何首烏、丹參進行定性鑒別，對制何首烏中大黃素照薄層色譜法進行含量控制，并不能全面反映產品的質量?，F研究增加女貞子和鉤藤藥材定性鑒別，增加丹酚酸B、二苯乙烯苷HPLC法含量測定，為復方銀杏通脈口服液的質量標準提升提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 RE-52A型旋轉蒸發儀（上海雅榮）；AUW-220D分析天平0.01mg（日本島津Shimadzu）；AUY-220分析天平0.01mg（日本島津Shimadzu）；DK-98-Ⅱ電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特）；ZF-1紫外燈（鞏義予華）；LC-20A高效液相色譜（日本島津Shimadzu ）; ZWM-LS1-20純水機（湖南中沃水務環保）；TD5A-WS離心機（湖南湘儀）；KQ-400DE數控超聲波清洗器（昆山超聲）。

1.2 試藥 復方銀杏通脈口服液均由補天藥業股份有限公司生產提供。異鼠李素（110860-201611）、槲皮素（100081-201610）、山柰素（110861-201812）、二苯乙烯苷（110844-202116）、丹酚酸B（111562-201917）、齊墩果酸（110709-201808）來自中國藥檢院。色譜純：乙腈、甲醇，其他為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別 鉤藤：取樣品50 mL，加濃氨水調PH至10～11，混勻，加等體積三氯甲烷萃取2次，回收溶劑，用甲醇2 mL溶解殘渣作為供試品溶液。取鉤藤對照藥材2 g，加濃氨水6 mL，靜置30 min，加50 mL三氯甲烷，加熱回流1 h，過濾，濾液蒸干，殘渣用1.5 mL甲醇溶解作為對照藥材溶液［2］。制備缺鉤藤的陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法，吸取上述供試品，陰性對照品，對照藥材溶液各10 μL點于硅膠G薄層板上，以丙酮-石油醚（60～90 ℃）（9∶11）為展開劑，展開，取出，晾干，在365 nm處觀察。由圖1（A）可知，樣品色譜在對照藥材相應位置上顯相同熒光點，分離度較好，陰性無干擾。女貞子：取鉤藤項下供試品作為供試品溶液，另取女貞子對照藥材2 g，按中國藥典女貞子鑒別項方法［2］制備對照藥材溶液。取缺女貞子的樣品50 mL，同供試品溶液相同制備方法制備陰性對照品溶液。另取齊墩果酸對照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法，吸取上述供試品，陰性對照品，對照藥材溶液各10 μL點于硅膠G薄層板上［2］，展開劑為甲苯－乙酸乙酯－冰醋酸（12∶4∶0.5）進行展開，取出，晾干，顯色劑為1%香草醛硫酸乙醇溶液，置于105 ℃至斑點顯色清晰。由圖1（B）可知，樣品與對照藥材、對照品相應位置上顯相同顏色斑點，分離度較好，陰性無干擾。

2.2 二苯乙烯苷含量測定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（20∶80）為流動相；檢測波長為320 nm［3］。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取二苯乙烯苷對照品適量，加稀乙醇制成0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取產品5 mL，加62%乙醇定容至25 mL，搖勻，過濾，取續濾液即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 取缺制何首烏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法同法制備陰性對照品溶液。

2.2.5 方法學考察

2.2.5.1 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照品溶液10 μL，按上述色譜條件分別進樣測定。結果供試品色譜中二苯乙烯苷與對照品色譜峰保留時間一致，而陰性對照品溶液色譜中則無此峰，說明陰性無干擾。結果如圖2所示。

2.2.5.2 線性關系考察 精密吸取對照品溶液，濃度分別為0.186 mg/mL、0.0928 mg/mL、0.0464 mg/mL、0.0232 mg/mL、0.0116 mg/mL，各10 μL進樣，測定峰面積，以峰面積為縱坐標（y），進樣濃度為橫坐標（x），進行線性回歸，線性回歸方程：y=38319878.11x-85539.83（R2=0.9999，n=6）。試驗結果表明，進樣量在0.116～1.856 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.2.5.3 精密度試驗 取同一批復方銀杏通脈口服液樣品，按2.2.3項制備供試品溶液1份，連續進樣6次結果二苯乙烯苷峰面積的RSD值為1.06%，表明儀器精密度較好。

2.2.5.4 穩定性試驗 取同一批復方銀杏通脈口服液，按2.2.3項制備供試品溶液1份，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、10 h、23 h進樣，峰面積的RSD值為0.29%。結果顯示，供試品溶液在23 h內穩定。

2.2.5.5 重復性試驗 取同一樣品，制備供試品溶液6份，按2.2.1色譜條件測定峰面積，并計算含量。結果二苯乙烯苷峰面積的RSD為1.27% 。表明該方法重復性好。

2.2.5.6 加樣回收試驗 精密量取6份已知含量的樣品（批號：20210929;含量：0.286 mg/mL）1.2 mL，分別精密加入對照品溶液（0.376）1 mL，加稀乙醇定容至5 mL?；靹?，按照上述色譜條件測定，記錄峰面積并計算含量，計算回收率。結果見表1。

2.3 丹酚酸B含量

2.3.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶78）為流動相；柱溫為20 ℃ ；流速為每分鐘1.0 mL，檢測波長為286 nm［2］。

2.3.2 對照品溶液的制備 取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加甲醇-水（8∶2）混合液制成0.30 mg/mL的溶液，即得［2］。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取10 mL，加甲醇稀釋至25 mL，混勻，過濾，濾液作為供試品溶液。

2.3.4 陰性樣品溶液的制備 取缺丹參的陰性樣品，按2.3.3制備陰性對照品溶液。

2.3.5 方法學考察

2.3.5.1 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照品溶液20 μL，按上述色譜條件分別進樣測定。結果供試品色譜中丹酚酸B與對照品色譜峰保留時間一致，而陰性對照品溶液色譜中則無此峰，說明陰性無干擾。結果如圖3所示。

2.3.5.2 線性范圍試驗 精密吸取對照品的溶液，濃度分別為0.045 mg/mL、0.091 mg/mL、0.105 mg/mL、0.227 mg/mL、0.378 mg/mL，各20 μL進樣，測定峰面積，以峰面積為縱坐標（y），進樣濃度為橫坐標（x），進行線性回歸，線性回歸方程：y=3E+07x - 53207。（R2=0.998，n=6）。試驗結果表明，在0.90～7.56 μg進樣量范圍內呈良好的線性關系。

2.3.5.3 穩定性試驗 取同一批復方銀杏通脈口服液樣品按2.3.3項配制供試品溶液1份，分別在0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、18 h進樣，結果顯示，供試品溶液在18 h內穩定。

2.3.5.4 精密度實驗 取相同批復方銀杏通脈片樣品按按2.2.3.3項配制供試品溶液1份，連續進樣6次，峰面積的RSD值為0.46%，表明儀器精密度良好。

2.3.5.5 重復性試驗 取同一批復方銀杏通脈口服液按樣品含量測定方法配制供試品溶液6份，按照上述色譜條件測定，記錄峰面積并計算含量，結果丹酚酸B峰面積的RSD值為1.05%。試驗結果表明，該方法重復性良好。

2.3.5.6 加樣回收試驗 分別精密量取6份已知含量的樣品（批號：20210929;含量：0.244 mg/mL）1.6 mL，分別精密加入對照品溶液（0.4067 mg/mL）1 mL，加甲醇定容至5 mL?；靹?，按照上述色譜條件測定，記錄峰面積并計算含量，計算回收率。結果見表2。

2.4 樣品測定結果 取復方銀杏通脈口服液3批，按各自的制備方法制成供試品溶液。按各自色譜條件測定。結果見表3。

3 討論

復方銀杏通脈口服液中鉤藤的定性鑒別時顯色劑選用改良碘化鉍鉀溶液，發現供試品的斑點顏色淺，與顯色劑區別不明顯，而在紫外燈下（365 nm），出現與對照色譜相應的熒光點并且比較清晰，故鉤藤鑒別選用在紫外燈下（365 nm）觀察。

丹參對血液以及心血管系統的作用非常顯著，丹酚酸B是其主要活性成分，對心、腦等多個器官都具有保護作用，能夠清除氧自由基、抑制脂質過氧化反應，能抗心肌缺血再灌注損傷，保護心臟微血管內皮細胞，抗動脈粥樣硬化，抗腦缺血損傷，神經保護等［5］。二苯乙烯苷是制何首烏的主要成分，研究［6-9］發現其同樣在心腦血管和老年癡呆方面作用明顯，可以保護神經，修復腦損傷，抑制動脈粥樣硬化，防治阿爾茨海默病。因此選用丹酚酸B和二苯乙烯苷進行含量控制，對有效評價復方銀杏通脈口服液的質量具有重要意義。

本研究對復方銀杏通脈口服液中多味藥材薄層色譜鑒別方法，以及二苯乙烯苷、丹酚酸B的定量測定方法進行研究，實驗表明鑒別和含量控制方法專屬性強，具有可行性，能夠為今后復方銀杏通脈口服液的質量標準提升提供依據。

參考文獻

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（收稿日期：2022-09-05 編輯：陶希睿）

基金項目：高新技術產業科技創新引領計劃（科技攻關類）（編號：2020SK2051）、科技創新與成果轉化項目（編號：2019zh010602）。

作者簡介：鄒奇（1990—），女，漢族，本科，執業藥師，研究方向為藥物質量研究。E-mail：945418973@qq.com

通信作者：侯鳳飛（1968—），男，漢族，碩士，研究員，研究方向為中醫藥、民族醫藥。E-mail：305332567@qq.com