安乃近殘留溶劑甲醇氣相色譜檢測方法

張曉燦，康 倩，李煥君，王莉莉，王 麗，馬鳳霞，劉曉蓮，馬寧寧

（河北冀衡藥業股份有限公司，河北 衡水 053000）

0 引 言

安乃近（Metamizole sodium） 為老牌解熱鎮痛類原料藥，由于其療效好，使用方便，價格低廉，在醫學上發揮了重大作用?？捎糜陬^痛、神經痛、偏頭痛、肌肉痛、關節痛和痛經等癥狀；如出現高熱，可用于解熱，安乃近極易溶于水，作用較為迅速，解熱鎮痛作用強而快，在解熱鎮痛類藥中是為數不多的既能口服又可注射的品種；還可以用于滴鼻，尤其小兒鼻腔內毛細血管豐富，藥液接觸面大，易于吸收，使用時藥效快，作用強。

安乃近合成工藝一般以吡唑酮為基礎原料，經甲基化反應制得安替比林，再經亞硝化還原成4-氨基安替比林，然后經甲?；图谆?-甲氨基安替比林，最后經縮合反應得到安乃近。生產過程中用到的甲醇會殘留到安乃近中，但各國藥典均沒有關于安乃近殘留溶劑甲醇的檢測方法的報道，按照國際制藥指南ICHQ3C，甲醇屬于對人體有害的有機溶劑，故應對殘留溶劑給予控制，本實驗開發了安乃近殘留溶劑甲醇的定量檢測方法，為安乃近生產提供重要的理論依據，同時也達到了提高安乃近質量的目的。

1 實驗部分

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀 器

QUINIX124-1CN 分析天平，賽多利斯。

Clarus 580 氣相色譜儀，PE 氣相色譜儀。

SPN-300 高純度氮氣發生器，北京中惠普分析技術研究所。

SPH-300 高純度氫氣發生器，北京中惠普分析技術研究所。

SPB-3 全自動空氣源，北京中惠普分析技術研究所。

1.1.2 試 劑

N,N-二甲基甲酰胺，天津大茂。

安乃近，河北冀衡藥業股份有限公司。

甲醇，默克。

1.2 色譜條件

色譜柱，Agilent DB-WAX，30 m×0.32 mm×0.50 μm。

載氣。

氮氣。

檢測器，FID。

柱溫，起始溫度55 ℃，以每分鐘3 ℃的速率升溫至80 ℃，然后以5.0 ℃的速率升溫至140 ℃保持5 min。

檢測器溫度，230 ℃。

進樣器溫度，200 ℃。

流速，20 mL/min。

進樣量，1.0 μl。

量程，1。

載氣流速，3。

計算方法，外標法。

2 結果與討論

2.1 定性分析

2.1.1 溶液配制

標準溶液：精密稱取0.05 g 甲醇于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液。

供試試液：精密稱取2 個0.5 g 樣品分別于10 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.1.2 操作步驟

分別吸取標準溶液1.0 μL，重復進樣5 次；分別吸取樣品溶液1.0μL 進樣。

計算式如下：

式中：As樣品溶液中甲醇的峰面積；Ar 標準溶液中甲醇的峰面積；Wr 配制標準溶液稱取甲醇的質量；Ws 稱取樣品的質量。

2.2 氣相色譜方法學考察

2.2.1 檢測方法的系統適用性

對照液：精密稱取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液。

取對照溶液1.0 μL 重復進樣6 次，記錄色譜圖，6 次結果的平均值為77 353.5，RSD 為1.55%，＜5.0%，符合規定。系統適用性檢測結果見表1。

表1 系統適用性檢測結果Table 1 Testing result of system suitability test

2.2.2 檢測方法的專屬性

吸取DMF1.0 μL 進樣，記錄色譜圖。與系統適用性中的溶液1 進行比較。從溶劑圖譜未檢測到甲醇，對甲醇的測定沒有影響，專屬性符合規定。

2.3 甲醇檢測限和定量限的測定

2.3.1 定量限

吸取系統適用性項下對照液1.0 mL 于10 mL量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定量限的儲備液；吸取定量限儲備液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻。吸取1.0 μL 重復進樣6 次，記錄色譜圖。

定量限重復性，甲醇面積平均值為190，面積RSD 為7.6%，＜10.0%；甲醇的信噪比均介于8～15，此時的濃度0.742 4 μg/mL 為甲醇定量限濃度。

2.3.2 檢測限

精密稱取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照液。吸取對照液1.0 mL 于10 mL 量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定量限的儲備液；吸取定量限儲備液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定量限溶液。吸取定量限溶液2.5 mL 于10 mL 容量瓶中，用DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻作為檢測限溶液。吸取檢測限溶液1.0 μL 注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，甲醇峰的信噪比為3.04，介于2～4，保留時間為1.810 min，此時的濃度0.19 ug/mL 為甲醇檢測限濃度。

2.4 線性及線性范圍的測定

在甲醇殘留溶劑的定量限至甲醇殘留溶劑限度的150%之間，相關系數R≥0.999，依次配制溶液，分別用DMF 配制成6 個不同濃度的溶液，甲醇 在 濃 度0.7424 ～721 μg/mL（LOQ- 限度 的150%） 具有良好的線性，線性方程為Y=171.24x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。甲醇標準溶液不同濃度峰面積見表2。

表2 甲醇標準溶液不同濃度峰面積Table 2 Table of different concentration peak areas of methanol standard solution

甲醇溶液線性關系如圖1 所示。

圖1 甲醇溶液線性關系Fig.1 Linear relationship of methanol solution

2.5 重復性的測定

吸取溶劑1.0 μL 注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。

吸取檢測限下的對照液1.0 μL，重復進樣5次，記錄色譜圖。

甲醇對照的平均值為82 546.4，RSD 為0.94%，＜5.0%，符合規定。甲醇對照液重復性檢測結果見表3。

表3 甲醇對照液重復性檢測結果Table 3 Testing result of methanol standard solution repeatability test

取一批安乃近樣品，稱取6 個樣，各0.5 g，分別于10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。分別吸取1.0 μL，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。計算樣品中檢測到甲醇的平均值為40×10-6，RSD 為7.62%，＜10%，符合規定。安乃近樣品的甲醇檢測結果見表4。

表4 安乃近樣品的甲醇檢測結果Table 4 Methanol testing result of three samples of metamizole sodium samples

2.6 樣品溶液穩定性

吸取1.0 μL DMF 注入氣相色譜儀中，精密稱取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

分別稱取安乃近樣品二個樣，各0.5 g，分別于10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、對照溶液、樣品溶液各1.0 μL，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。

標準溶液、樣品溶液、溶劑分別在0、4、8 h進樣，記錄色譜圖。

溶劑、樣品溶液、標準溶液在0、4、8 h 比較穩定；對照溶液的RSD 為1.5%，樣品中甲醇檢測結果的RSD 為3.5%，＜5.0%，符合規定。

2.7 準確度的測定

在甲醇殘留溶劑限度的80%、100%、120%3個水平項下。

（1） 空白溶劑，吸取1.0μL DMF 注入氣相色譜儀中，空白溶劑中未檢測到甲醇。

（2） 空白樣品，精密稱取安乃近0.5 g 于10 mL 量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。吸取1.0 μL 注入氣相色譜儀中，樣品中未檢測到甲醇。

（3） 標準儲備液，精密稱取甲醇對照0.25 g于50 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

（4） 進一針樣品+ 標準溶液（甲醇限度的80%、100%、120%3 個水平）。

（5） 進一針標準溶液(甲醇限度的80%、100%、120%3 個水平)。

分別吸取各溶液1.0 μL 注入氣相色譜儀，進一針樣品+標準溶液、標準溶液（相應雜質限度的80%、100%、120%3 個水平），每個濃度取3 次，分別進樣，記錄色譜圖，以平均回收率做為甲醇測定的準確度，各組分定量的準確度應在92%～108%之間，RSD 不得＞10.0%。

然后用（4） -（2） /（5） - （1） 來計算各個殘留溶劑的回收率。

注：（4）：樣品+標準品（2）：樣品（5）：標準品（1）：空白。

平均回收率100.27%介于90%～108%； RSD為0.84%＜10.0%，符合規定。分別檢測甲醇殘留溶劑的80%、100%、120%，樣品加標準溶液80%、100%、120%中的甲醇，最后測得甲醇的平均回收率為100.27%，RSD 為0.84%，符合規定。

2.8 耐用性

精密稱取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液。吸取1.0 μL 標準溶液，重復進樣5 次。

精密稱取安乃近0.781 3-0.281 2=0.500 1 g、0.781 7-0.281 6=0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

吸取溶劑、標準溶液、樣品溶液各1.0 μL，檢測器、進樣器、色譜柱、載氣流速、柱溫在正常條件下，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖，耐用性項下正常條件檢測結果見表5。

表5 耐用性項下正常條件檢測結果Table 5 Testing result of robustness test on normal condition

2.8.1 柱溫58 ℃

吸取2.8 項下溶液各1.0 μL，在其他條件不變，柱溫58 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標準溶液重復進樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項下柱溫58℃檢測結果見表6。

2.8.2 柱溫62 ℃

精密稱取甲醇0.046 8 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液。

精密稱取安乃近0.500 1 g、0.500 0 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、標準溶液、樣品溶液各1.0 μL，在其他條件不變，柱溫62 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標準溶液重復進樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項下柱溫62 ℃檢測結果見表7。

表7 耐用性項下柱溫62 ℃檢測結果Table 7 Robustness testing result of column temperature 62 ℃

由表7 可知，柱溫在60、58 和62℃條件下，樣品均未檢測到甲醇，甲醇的RSD＜5.0%，符合規定。

2.8.3 進樣口溫度

進樣口溫度在200、195 和205 ℃條件下進行。

2.8.3.1 進樣口195 ℃

分別吸取柱溫62 ℃項下的溶劑、標準溶液、樣品溶液各1.0 μL，在其他條件不變，進樣口溫度195 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標準溶液重復進樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項下進樣口195℃檢測結果見表8。

表8 耐用性項下進樣口195℃檢測結果Table 8 Robustness testing result of injection port 195 ℃

2.8.3.2 進樣口200 ℃（同柱溫60 ℃）

精密稱取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液。

精密稱取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、標準溶液、樣品溶液各1.0 μL，在正常條件下，注入氣相色譜儀中，標準溶液重復進樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項下進樣口200 ℃檢測結果見表9。

表9 耐用性項下進樣口200 ℃檢測結果Table 9 Robustness testing result of injection port 200 ℃

2.8.3.3 進樣口205 ℃

精密稱取甲醇0.044 7 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液。

精密稱取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，搖勻。

分別吸取溶劑、標準溶液、樣品溶液各1.0 μL，在其他條件不變，進樣口205 ℃條件下，注入氣相色譜儀中，標準溶液重復進樣5 次，記錄色譜圖，耐用性項下進樣口205 ℃檢測結果見表10。

表10 耐用性項下進樣口205 ℃檢測結果Table 10 Robustness testing result of injection port 205 ℃

由表10 可知，進樣口溫度在200 ℃、195 ℃和205 ℃條件下，樣品中均為檢測到甲醇，甲醇的RSD 為0，＜5.0%，符合規定。

2.9 3 批樣品的測定

取3 批樣品，按照2.1.1 項下描述的方法進行檢測，3 批樣品殘留甲醇測定的結果分別為28×10-6，16×10-6，22×10-6。安乃近樣品中殘留甲醇含量檢測結果見表11。

表11 安乃近樣品中殘留甲醇含量檢測結果Table 11 Residual methanol content in the metamizole sodium samples

3 結 語

本文以DB-WAX 柱（30 m×0.32 mm×0.50 um），FID 檢測器，在程序升溫條件下進行檢測安乃近殘留溶劑甲醇的含量，具有操作簡單、誤差小，方便實驗室操作的優點。使用DMF 作溶劑，溶劑峰與甲醇能很好的分離，該氣相色譜法檢測甲醇溶液線性關系良好，線性方程Y=171.24 x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。該方法能準確可靠的測定安乃近殘留溶劑甲醇的含量，為提高安乃近產品的質量提供了保障。