副干酪乳桿菌發酵液中抗菌肽的篩選及對副溶血性弧菌的抑菌作用

邢宇凡，白淑錦，金日天，3，翁武銀，3，丁能水，張志剛，楊 燊，3*

（1 集美大學海洋食品與生物工程學院 福建廈門361021 2 廈門銀祥集團有限公司 肉食品安全生產技術國家重點實驗室 福建廈門361100 3 海洋食品精深加工關鍵技術省部共建協同創新中心 大連工業大學 遼寧大連116034 4 福建傲農生物科技集團股份有限公司 福建省生豬營養與飼料重點實驗室 福建漳州 363000）

副溶血性弧菌是一種革蘭氏陰性嗜鹽細菌，主要存在于魚、蝦、貝類等水產動物以及腌菜、咸肉和咸鴨蛋等高鹽食品中[1]。它是一種常見的食源性病原體，可引發腹瀉、嘔吐、頭痛、腹部痙攣等病癥[2]。此外，它還可以形成保護宿主的生物膜，從而對抗生素產生耐藥性[1，3]。發掘更安全、有效的抑菌劑至關重要。

抗菌肽是一種具有廣泛抑菌活性的陽離子多肽，可對病原體進行多靶點破壞，如通過靜電作用破壞細胞膜，作用于核酸，從而影響DNA、RNA 以及蛋白質的合成等[4]，且不易產生耐藥性，被認為是抗生素的一種良好替代品[5-6]。副干酪乳桿菌作為乳酸菌的一種，具有抗腫瘤、抗炎、改善和調節腸道菌群等生物活性[7]。其在發酵過程中產生的細菌素，能有效抑制食源性致病菌，可應用于熱敏性食品的冷鏈運輸保鮮[8-9]。如從副干酪乳桿菌FX-6中分離出細菌素F1，其對細菌和真菌均具有較好的抑菌活性，可以通過增加細菌膜的通透性，促進細胞內物質的滲漏，干擾細胞中基因組DNA，從而完成殺菌作用[10]。

本研究采用超高效液相色譜-質譜聯用技術鑒定副干酪乳桿菌發酵液小分子多肽序列，通過生物信息學篩選出可能具有抑菌活性的氨基酸序列，合成后研究其對副溶血性弧菌的抑菌活性及機理，以期為副溶血性弧菌的防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

副干酪乳桿菌（Lacticaseibacillus paracasei）、副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）由福建省微生物與酶工程重點實驗室提供，MRS 培養基、營養肉湯培養基、LB 培養基，廣東環凱微生物科技有限公司；瓊脂，廈門蘭博利德生物技術有限公司；TIANamp Bacteria DNA Kit 細菌基因組DNA 提取試劑盒（DP302），北京天根生化科技有限公司。

核酸染料10×DNA 上樣緩沖液，北京索萊寶（Solarbio）科技有限公司；十二烷基硫酸鈉（SDS），廈門泰京生物技術有限公司；鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷，上海麥克林生化科技有限公司；三羥甲基氨基甲烷，上?？蒲派锛夹g有限公司；Na2HPO4·7H2O、NaH2PO4·2H2O、KH2PO4、NaCl、NH4Cl、MgSO4、乳糖、CaCl2、冰醋酸、乙二胺四乙酸、NaOH、戊二醛溶液，西隴化工股份有限公司。

M9 培養基：200 mL M9 鹽溶液（5×）（64 g Na2HPO4·7H2O+15 g KH2PO4+2.5 g NaCl+5.0 g NH4Cl，用去離子水定容至1 000 mL），2 mL 1 mol/L MgSO4，20 mL 乳糖（20%），0.1 mL 1 mol/L CaCl2，用去離子水定容至1 000 mL。

50×TAE：24.2 g Tris，5.71 mL 冰醋酸，10 mL 0.5 mol/L EDTA，用NaOH 調至pH=8.0，加水定容至100 mL。

0.01mol/L 磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.2）：61 mL 0.01 mol/L Na2HPO4·7H2O+39 mL 0.01 mol/L NaH2PO4·2H2O。

1.2 儀器與設備

湘儀H1650-W 高速臺式離心機，湖南湘儀離心機有限公司；H-7650 透射電鏡，日本日立有限公司；Nanodrop 1000 超微量分光光度計，美國Nanodrop 公司；C400 凝膠成像系統，美國Azure Biosystems 有限公司；Synergy HIMF 多功能酶標儀，美國伯騰儀器有限公司；Nano Acquity UPLC system、Thermo Scientific Q-Exactive，美國Waters公司；Chirascan V100 圓二色譜儀，美國Applied Photophysice Ltd 公司。

1.3 方法

1.3.1 副干酪乳桿菌發酵液的質譜分析 -20 ℃保存的副干酪乳桿菌按照1%的接種量接種于20 mL MRS 培養基中，37 ℃靜置厭氧培養2 d 后煮沸10 min 置于離心管中，3 000 r/min 離心5 min進行固液分離，上清液用超濾膜截留分子質量為3 000 u 以下的多肽，于-20 ℃保存。利用超高效液相色譜-質譜聯用技術對多肽的氨基酸序列進行鑒定，色譜采用長度25 cm，內徑75 μm 的分析色譜柱，流動相A 為0.1%的甲醇水溶液，流動相B為乙腈，進樣5 μL 在超高效液相色譜進行梯度洗脫，洗脫條件如表1 所示。采用翹氣速率：40 mL/min，輔助氣速率：10 mL/min，噴霧電壓：3.0 kV，毛細管溫度：300 ℃，S-lens：50%的條件下用高分辨質譜儀進行質譜分析。其中一級掃描分辨率為70 000，掃描范圍為350～1 600 m/z；二級掃描分辨率為17 500，動態消除10.0 s。最后將質譜結果用搜庫軟件（MAXQUANT v1.6.5.0）搜乳酸菌庫，蛋白質對比后得到副干酪乳桿菌肽段序列。

表1 液相色譜的梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution procedure of liquid chromatography

1.3.2 抗菌肽的篩選 得到的肽段序列利用在線軟件APD3（https：//aps.unmc.edu/）計算多肽的電荷數和疏水率，使用Swiss-Model（https：//swissmodel.expasy.org/interactive）預測多肽的三維結構，隨后用軟件Pymol 2.0 對抗菌肽的三維結構進行編輯。多肽由北京中科亞光生物科技有限公司采用固相法合成，使用Agela C18 柱進行高效液相色譜（HPLC）純化，利用液相色譜-質譜聯用儀（LC-MS/ESI）測定多肽的純度和分子質量。

1.3.3 最低殺菌質量濃度的測定（MBC）副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌分別接種于20 mL 營養肉湯培養基中，37 ℃，200 r/min 培養8 h 后，用無菌的0.01 mol/L PBS（pH 7.2）分別將其稀釋至4.82～4.96 lg CFU/mL。將肽分別稀釋至1 000，500，250，125，62.5 μg/mL 后，取等量的肽與菌液混和于37 ℃孵育2 h 后，取20 μL 均勻涂布于平板中，37 ℃培養24 h 后進行菌落計數。設置等量的PBS 與菌液混合作為對照組，試驗重復3 次取平均值。

1.3.4 時間-殺菌曲線分析 培養至對數期的副溶血性弧菌用0.01 mol/L PBS（pH 7.2）稀釋至4.82～4.96 lg CFU/mL，將等量多肽和菌液混合至最終質量濃度為125 μg/mL（1×MBC）。在0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h 分別取20 μL 菌懸液，在營養肉湯固體培養基中均勻涂布，37 ℃培養24 h 后進行菌落計數。以等量的PBS 和菌液混合為對照，試驗重復3 次取平均值。

1.3.5 膜通透性的測定 通過測量副溶血性弧菌細胞質β-半乳糖苷酶產生的鄰硝基苯酚水平，來確定細菌的膜通透性變化。首先，在LB 培養基中將細菌培養至對數期，再將菌液離心（10 000 r/min，1 min）后重懸至20 mL M9 培養基中，搖床（200 r/min）培養直到OD600nm＞0.4。最后，在96 孔板中加入菌液100 μL，0.5 mg/mL 鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷（ONPG）10 μL 以及不同質量濃度的 肽100 μL（0，0.5×MBC，1×MBC，2×MBC，4×MBC），每隔1 h 用酶標儀測量其在波長420 nm下的吸光度。

1.3.6 透射電鏡 將副溶血性弧菌培養至對數期，取菌液5 mL 和1 mg/mL 的肽1 mL 于已滅菌的試管中，37 ℃恒溫培養2 h 后，將混合液在離心機中離心（10 000 r/min，1 min），倒掉上清液。用PBS 沖洗沉淀3 次，加入1 mL 2.5%的戊二醛溶液，4 ℃固定12 h 后用酒精脫水，并用白色樹脂滲透。最后，樣品包埋后70 ℃焙燒24 h，在銅網格上制備70 nm 薄玻片，并用檸檬酸鉛和醋酸鈾酰染色，通過透射電鏡觀察細菌的超微結構。

1.3.7 凝膠阻滯分析 用細菌基因組DNA 試劑盒提取副溶血性弧菌的基因組DNA，所得DNA采用超微量分光光度計測定濃度，并用260 nm 和280 nm 光密度比（OD260nm/OD280nm≥1.90）測定提取的DNA 的純度，然后將DNA 定量至20 ng/μL。在微量離心管中加入10 μL 上述DNA，并加入不同濃度的抗菌肽，使肽/DNA 分別為100/1，50/1，25/1，12.5/1，6.25/1，3.125/1，0，混勻后置于37 ℃孵育1.5 h。每個樣品取8 μL 加入1 μL 的10×DNA 上樣緩沖液，在1%的瓊脂糖凝膠上進行電泳，利用凝膠成像儀在波長320 nm 的紫外燈下曝光60 s成像來檢測DNA 的遷移情況。

1.3.8 圓二色譜 用圓二色譜儀（Circular dichroism spectrum，CD）測定抗菌肽二級結構及副溶血性弧菌DNA 對其結構的影響。將肽分別溶解在25 mmol/L 十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液和0.01 mol/L PBS 中，使肽的最終質量濃度為0.2 mg/mL，然后將其置于直徑為1 mm 的石英比色皿中進行CD 掃描，掃描范圍為180～280 nm，狹縫為2 mm，掃描速度為10 nm/min，每個樣品連續掃描3 次，結果取平均值。然后在抗菌肽中加入副溶血性弧菌基因組DNA，孵育2 h 后，再用相同的方法檢測肽的二級結構，觀察DNA 對肽二級結構的影響。

1.3.9 數據分析 采用SPSS 22.0 分析軟件對試驗結果進行分析，采用單因素分析法（ANOVA）檢驗其差異顯著性，P ＜0.05 表明差異顯著。

2 結果與分析

2.1 副干酪乳桿菌發酵液中潛在抗菌序列的篩選與鑒定

從副干酪乳桿菌發酵液中共鑒定出6 個潛在的抗菌序列（表2），利用在線數據庫APD3 計算了它們的帶電荷數、疏水性。它們的平均氨基酸數為12，分子質量范圍是1 036～1 587 u，疏水率范圍是25%～60%，凈電荷數從-2 到+3。

表2 副干酪乳桿菌發酵液中抗菌肽的預測Table 2 Prediction of antimicrobial peptides in fermentation broth of Lactobacillus paracasei

抗菌肽的正電荷有助于其通過靜電作用與富含陰離子的磷脂膜表面初始結合，從而改變細菌細胞膜上的電位，導致細胞膜損傷和蛋白質等大分子的滲透使其死亡，一般凈電荷范圍在+2 到+9之間[4]。同時，抗菌肽中的疏水殘基與親水殘基可以形成兩親結構，進而插入細菌細胞膜中的疏水區域，破壞生物膜使細胞死亡[4，11]。此外，其抑菌效果還與肽的長度、分子質量和空間結構的螺旋性等理化性質有關[12]，抗菌肽通常由10～50 個氨基酸組成，較短的抗菌肽可能會通過膠束作用降解膜，而較長的抗菌肽可能會在較長的范圍內彎曲，從而穩定地跨越膜[13-14]。在二級結構方面，α-螺旋是抗菌肽最常見的結構，該結構有利于在細菌表面誘導形成跨膜孔洞，從而幫助抗菌肽穿透細菌細胞膜或讓脂質體和細胞中的大分子泄漏[15]。在已鑒定的6 個抗菌肽中，Yt9z（RQQAENLAKFAKKG）由14 個氨基酸組成，其總電荷為+3，疏水氨基酸百分比為36%，其分子質量為1 588 u，且三維結構預測顯示其具有α-螺旋結構（見圖1 和圖2）。

圖1 抗菌肽Yt9z 質譜分析圖Fig.1 Mass spectrometry analysis of antimicrobial peptide Yt9z

圖2 抗菌肽Yt9z 的三維結構預測Fig.2 3D structure prediction of antimicrobial peptide Yt9z

2.2 肽Yt9z 對副溶血性弧菌的抑菌活性

2.2.1 最低殺菌濃度（MBC）為探究多肽Yt9z的抑菌活性，測定了其對金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌和副溶血性弧菌的最低殺菌濃度。當抗菌肽Yt9z 質量濃度為500 μg/mL 時，金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢桿菌仍然不能被完全抑制，說明其對金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢桿菌無抑菌作用。而在抗菌肽Yt9z 質量濃度為125 μg/mL 時，仍對副溶血性弧菌有很好的殺菌效果，低于這個質量濃度時，副溶血性弧菌的數量隨著抗菌肽Yt9z 質量濃度的減小而增加，如圖3 所示。因此，抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌的MBC 為125 μg/mL。

圖3 抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌的最低殺菌濃度Fig.3 Minimum bactericidal concentration（MBC）of antimicrobial peptide Yt9z against V.parahaemolyticus

由此可以看出，抗菌肽Yt9z 對革蘭氏陰性菌（副溶血性弧菌）的抑制效果優于革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌），這可能是由于革蘭氏陽性細菌細胞壁中存在更厚的肽聚糖層使抗菌肽難以穿透其細胞壁[16-17]。而抗菌肽可以直接結合革蘭氏陰性細菌的脂多糖（LPS）從而破壞細胞膜[18]。乳酸鏈球菌可以產生一系列小分子抗菌多肽，其中大多數針對革蘭氏陽性菌，尤其是孢子形成菌，如乳酸鏈球菌素（Nisin）等[19]。因此，抗菌肽Yt9z 的發現可與Nisin 形成互補，進一步完善乳酸鏈球菌抗菌肽的抗菌譜。

2.2.2 時間-殺菌曲線 從圖4 可以看出沒有加入抗菌肽的副溶血性弧菌在3 h 內只有少量的衰亡，而加入抗菌肽Yt9z 后的副溶血性弧菌生長迅速被抑制，3 h 細菌被完全殺死，這表明抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌有較高的殺菌效率。

圖4 抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌的時間-殺滅曲線Fig.4 Time-kill curve of antimicrobial peptide Yt9z against V.parahaemolyticus

已有一些研究從乳酸菌中分離出具有抑菌活性的物質，例如，從乳酸桿菌FGC-12 中分離出的細菌素對副溶血性弧菌的MBC 為6.0 mg/mL，且12 h 才能殺死大部分細菌[20]。相比之下，抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌的MBC 更低且殺滅時間更短，說明其抑菌活性更強，殺菌效率更高。

2.3 抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌的抑菌機制研究

2.3.1 細胞膜通透性 通過測定產生的鄰硝基苯酚的含量，來驗證經抗菌肽Yt9z 處理后副溶血性弧菌細胞膜通透性的變化。當膜通透性增加時，鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷（ONPG）進入細胞質被細胞內的β-半乳糖苷酶降解，產生黃色產物鄰硝基苯酚，其OD420nm值可以反映出膜透性增加的程度[21]。由圖5 可知，對照組的副溶血性弧菌在2～5 h 內，膜通透有輕微的下降，而后膜通透性略微上升。相比于對照組，經過抗菌肽Yt9z 處理的副溶血性弧菌細胞膜通透性，隨著肽的作用時間延長而逐漸升高，且肽的濃度越高，細胞膜通透性越大，表明該菌細胞膜通透性與抗菌肽Yt9z 具有明顯的時間-濃度依賴性。

圖5 抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌內膜通透性的影響Fig.5 Effect of antimicrobial peptide Yt9z on inner membrane permeability of V.parahaemolyticus

抗菌肽殺滅細菌的能力通常取決于它們與細菌膜相互作用的能力，細胞膜在維持電化學梯度和電子傳遞中起著至關重要的作用，因此，大多數抗菌肽通過破壞細胞膜來殺滅細菌[22-23]。然而，其對細胞膜的滲透作用并不一定導致細胞膜的完全崩塌而破壞，多數情況下帶正電荷的抗菌肽能夠與革蘭氏陰性菌外膜中的脂多糖（LPS）等帶負電部分相互作用，穿透細菌的外膜并在其上產生孔隙，導致離子和代謝物泄漏、去極化和膜耦合呼吸喪失，從而加速細胞死亡[13，24]。例如，CGA-N12 在不干擾膜完整性的情況下，消散了熱帶假絲酵母的膜電位，增加了膜流動性和鉀離子的流出，誘導非選擇性離子通道的形成來發揮抑菌活性[25]。

2.3.2 抗菌肽Yt9z 二級結構分析 圓二色譜是一種廣泛應用于表征蛋白質二級結構的方法[26]?？咕牡囊志钚耘c其二級結構的變化密切相關，其中最常見的抗菌肽二級結構有α-螺旋、β-折疊和無規則卷曲[27]。本試驗利用圓二色譜對抗菌肽Yt9z 在PBS 和SDS 疏水環境下的二級結構進行研究。如圖6 所示，在PBS 環境下，抗菌肽Yt9z 在波長200 nm 處出現負峰，在波長210 nm處出現正峰，這說明抗菌肽Yt9z 在PBS 環境下，其主要結構為無規則卷曲[28]。在SDS 環境下，抗菌肽Yt9z 在波長193 nm 左右出現正峰，在波長208 nm 左右出現負峰，表明抗菌肽Yt9z 具有α-螺旋結構[29]，且其在接觸細菌細胞膜時可能存在二級結構轉換。

圖6 不同環境下抗菌肽Yt9z 的二級結構變化Fig.6 Secondary structure of Yt9z in different environments

SDS 是一種陰離子洗滌劑，用于模擬細菌膜的環境，抗菌肽Yt9z 在SDS 環境下結構發生改變說明抗菌肽Yt9z 在接觸細菌細胞膜時自身結構發生了改變，這可能是其展現抑菌活性的重要因素之一[30]。已有相關研究發現，抗菌肽對細菌細胞膜的破壞很大程度上依賴其二級結構，α-螺旋的兩親性有助于其疏水結構域插入細菌膜中引起膜變形，或通過靜電相互作用附著在帶負電荷的細菌膜上，從而實現與膜的相互作用[31]。

2.3.3 透射電鏡 用抗菌肽Yt9z 處理副溶血性弧菌，并通過透射電鏡（Transmission electron microscope，TEM）觀察細菌超微結構。結果發現，未經處理的對照組細菌（副溶血性弧菌）具有組織均勻分布的完整細胞膜，且表面光滑平整，無內容物流出（圖7a），而用抗菌肽Yt9z 處理后的副溶血性弧菌，仍存在完整的細胞膜結構，然而其發生了收縮和變形，且細胞內物質明顯減少（圖7b）。這表明抗菌肽Yt9z 能夠與細胞膜相互作用，增強細胞膜的通透性進而殺死細菌，而這一過程并未破壞細胞膜的完整性。

圖7 副溶血性弧菌在抗菌肽Yt9z 處理前、后的透射電鏡圖像Fig.7 TEM images of V.parahaemolyticus before and after antimicrobial peptide Yt9z treatment

相關研究顯示，一些多肽能夠穿透且不破壞細胞膜，進入細胞內與胞內物質相互作用，表現出很強的抑菌活性[32]。它們的抑菌作用包括插入細胞質膜，形成孔隙，破壞脂質不對稱性，從而導致胞內物質的流出，或進入細胞與胞內物質結合。例如，從南美角蛙皮中分離出α-螺旋抗菌肽pseudin-2，它在革蘭氏陰性菌中不能中和脂多糖（LPS），然而能與LPS 相互作用在細胞膜上形成孔洞，通過孔洞進入細胞質并與RNA 緊密結合[33]。然而，抗菌肽Yt9z 的胞內作用靶點暫不清楚，因此，要進一步探究其胞內作用靶點。

2.3.4 抗菌肽Yt9z 對副溶血性弧菌基因組DNA的相互作用 除了作用于細胞膜之外，抗菌肽還可以將胞內物質作為靶點，展現其抑菌活性[34]，因此，通過DNA 凝膠試驗來研究抗菌肽與副溶血性弧菌基因組DNA 之間的相互作用。在抗菌肽Yt9z/副溶血性弧菌DNA 為100/1 時，無法觀察到DNA 條帶，當比例分別為50/1，25/1，25/2，25/4，25/8 時，條帶清晰度和亮度明顯上升；對照組DNA 的凝膠電泳圖譜則顯示出完整清晰且最明亮的條帶（圖8）?？梢钥闯隹咕腨t9z 以濃度依賴的方式與副溶血性弧菌DNA 相互作用。

圖8 凝膠阻滯分析抗菌肽Yt9z 與副溶血性弧菌DNA 的相互作用Fig.8 Gel retardation analysis of interaction between antimicrobial Yt9z and the DNA of V.parahaemolyticus

抗菌肽與細菌的DNA 相互作用是一種常見的抑菌機制，抗菌肽可以與細菌基因組DNA 結合，導致基因組DNA 直接損傷，或阻斷細胞DNA的復制和轉錄使細胞失去生命活力[35-36]。本研究中，抗菌肽Yt9z 不僅增加了副溶血性弧菌細胞膜通透性，還能與其DNA 相互作用來實現抑菌作用。這與小麥胚乳蛋白中的肽PuroB 作用機制相似，它能夠與帶負電的磷脂相互作用，在不破壞細胞膜脂質雙層完整性的同時，與細胞內靶點（DNA）結合，從而阻斷體內大分子合成來實現抑菌活性[37]。從鯰魚表皮黏液中分離出抗菌肽CF-14，通過增加腐敗希瓦氏菌的細胞膜通透性，從而穿透其細胞膜與DNA 結合完成殺菌過程[38]。

2.3.5 副溶血性弧菌DNA 對抗菌肽Yt9z 二級結構的影響 通過圓二色譜測定抗菌肽Yt9z 與副溶血性弧菌DNA 結合后的二級結構變化，進一步證實二者之間存在相互作用關系。圖9 顯示，加入DNA 后，193 nm 的正峰和208 nm 的負峰仍然存在，而抗菌肽Yt9z 的譜圖整體上移，表明抗菌肽Yt9z 與副溶血性弧菌基因組DNA 存在相互作用關系?？咕呐cDNA 結合后，能夠抑制DNA 的復制，從而阻礙蛋白質正常合成和表達，也對相關酶造成影響。例如，LP5 能結合金黃色葡萄球菌的DNA，抑制大分子生物合成和拓撲異構酶IV 和DNA 回旋酶的功能，誘導SOS 反應，從而抑制該菌生長[39]。含有色氨酸的多肽與多重耐藥銅綠假單胞菌DNA 通過溝槽結合而相互作用，干擾DNA 復制，從而影響相關基因的表達，致使細菌快速死亡[40]。

圖9 副溶血性弧菌DNA 對抗菌肽Yt9z 二級結構的影響Fig.9 Secondary structure changes of Yt9z binding to DNA in SDS

3 結論

本研究從副干酪乳桿菌發酵液中篩選出1 種對副溶血性弧菌具有強抑菌活性的抗菌肽Yt9z，其序列為RQQAENLAKFAKKG。研究顯示其最低殺菌質量濃度為125 μg/mL，且3 h 內能殺死全部細菌，它是通過與細胞膜作用來增加細菌細胞膜通透性，從而穿透細胞膜與DNA 結合使其死亡。這些發現為抗菌肽Yt9z 作為生物防腐劑的應用提供了理論基礎。