不同免疫劑量的豬圓環滅活疫苗減量免疫效果分析

高勤學 ，蔡云鵬 ，楊偉光 ，祝正高

（1.江蘇農牧科技職業學院，江蘇 泰州 225300；2.江蘇省種豬性能測定中心，江蘇 泰州 225311；3.江蘇鉑可醫療科技有限公司，江蘇 泰州 225316）

前言

無針注射器作為一種取代傳統有針玻璃/金屬注射器的新型藥物輸送方式有悠久的歷史，最初無針注射器較多用于注射胰島素、干擾素、麻醉劑等藥物，減少病人的痛苦和交叉感染的機會。1992年美國FDA（食品藥品監督管理局）批準無針注射胰島素。加拿大、美國較早開展獸醫無針注射器的研究，據報道美國有近80%的大型養殖場在使用無針注射器，代表性公司有美國的Pulse公司和加拿大的Agro-jet公司。但是進口無針注射器價格昂貴，操作繁瑣，使用疫苗類型受限制等一系列的問題也限制了它的推廣使用。非洲豬瘟催生了一系列養殖技術的變革，注射疫苗作為豬場生物安全必不可少的防線，減少交叉感染勢在必行，無針注射器又提上議事日程。國內已經出現了4～6家國產無針注射器廠家，針對進口無針注射器太重、操作時噪音太大、不能注射油佐劑疫苗等缺點進行了攻關和技術革新。據報道，無針注射胰島素可以減少30%劑量；默沙東在美國使用IDAL無針注射器免疫圓環-支原體二聯苗，只需要0.2 mL每頭份；在動物上也發現了類似效果。為了驗證動物使用無針注射疫苗的減量效果，本文針對豬圓環滅活疫苗減量免疫仔豬進行了對比研究，對不同劑量仔豬的免疫效果進行了評價，確定了用無針注射器免疫豬圓環滅活疫苗最佳免疫劑量。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

日齡16～21日齡健康三元仔豬，除傳統肌肉注射組以外，未注射任何疫苗，體重6～7 kg，購自江蘇眾成牧業有限公司。飼料采購自南通安佑生物科技有限公司，910T和911T乳豬配合飼料，自由采食。試驗地點在江蘇省種豬性能測定中心。

1.2 試驗材料

圓力康豬圓環病毒2型桿狀病毒載體滅活疫苗（CP08株），購自國藥集團動物保健股份有限公 司（批 號：170261098）；豬 圓環病毒2型抗體酶聯免疫試劑盒（PCV2ELISASK105， 貨 號：FS8116），購自常州品芝道科學器材有限公司（荷蘭百測BioCheck公司）；有針注射器為常規金屬注射器；無針注射器（型號：POK-V-Ⅰ），生 產 批號014710172（20201010），購自江蘇鉑可醫療科技有限公司。

1.3 試驗方法

將30只16～21日齡仔豬隨機分成6組，每組5頭；第1組采用傳統有針注射1頭份圓環疫苗，第2組采用無針注射1頭份圓環疫苗，第3組采用無針注射0.75頭份圓環疫苗，第4組采用無針注射0.5頭份圓環疫苗，第5組采用無針注射0.25頭份圓環疫苗，第6組作為對照。第2～5組接種時采用CO2氣瓶作為動力源，供氣壓力1.5 MPa。具備減量功能的無針注射器每次注射量為0～0.3 mL，本次試驗調整為每次0.25 mL，0.25頭份注射一次，0.5～1頭份分別注射2～4次，例如1頭份就在仔豬頸部兩側各注射兩次。

1.4 PCV（豬圓環病毒）抗體檢測

圓力康疫苗免疫后7 d、14 d、28 d分別頸靜脈采血，分離血清，按照豬圓環病毒2型抗體酶聯免疫試劑盒操作步驟進行檢測，在405 nm波長處測定OD值、S/P值，將OD值代入標準品制作的直線回歸方程，計算每頭豬產生的PCV抗體濃度。

1.5 統計分析

用SPSS軟件ANOVA程序分析每組仔豬免疫后產生的抗體濃度、體重差異，結果以平均值±標準差表示，分析各組之間的差異，確定無針注射對仔豬減量免疫效果的影響。

2 結果

2.1 不同免疫劑量接種圓環病毒疫苗后對仔豬增重的影響

試驗豬分別飼養在三個獨立的保育圈里，每個保育圈飼養10頭。記錄仔豬的初生重、斷奶重，每次采血的同時進行稱重、記錄。最后一次稱重減去試驗開始時的重量即為增重，增重除以試驗期32 d即為日增重。用統計軟件SPSS25.0的ANOVA程序進行單因素方差分析結果表明（表1）：對照組和全量免疫組與減量免疫組增重差異顯著，日增重差異亦顯著。

表1 不同接種劑量接種圓環疫苗對仔豬增重的影響

2.2 不同免疫劑量接種圓環病毒疫苗后PCV抗體濃度比較

分別于免疫后10 d、21 d和32 d采血，分離血清，檢測血清PCV抗體濃度。根據百測（BIOCHECK）豬圓環病毒2型（PCV2）抗體ELISA檢測試劑盒說明書，樣品S/P值大于或等于0.5時認為樣品陽性、免疫合格、具有保護作用。結果顯示（見表2）：傳統有針注射組抗體上升很快，10 d即達合格水平，一直維持到32 d都處于合格水平。無針注射組（1頭份，0.75頭份和0.5頭份）抗體上升較慢，但是10 d也達到合格水平，32 d抗體濃度和傳統注射組濃度接近。0.25頭份注射組一直達不到合格水平。

表2 不同接種劑量接種圓環疫苗對仔豬抗體的影響

3 討論

3.1 減量免疫的有效性

金擴世等豬圓環病毒免疫仔豬抗體消長規律試驗表明，仔豬免疫圓環病毒后滅活疫苗后7 d免疫抗體開始升高，21 d達到峰值，抗體可以維持180 d以上。本試驗對照組仔豬免疫時間為22日齡，無針注射日齡為23日齡，由于應激較大，第一次檢測抗體時間為免疫后10 d。因此對照組抗體上升很快，試驗組也達到合格水平?？瞻讓φ战M抗體一直都是陰性，說明母源抗體或野毒抗體對試驗干擾不嚴重。0.25頭份試驗組32日齡抗體不合格，和對照組差異顯著。因此除0.25頭份試驗組以外，無針減量試驗組抗體都達到了合格水平，對豬具有保護作用。筆者也同時監測了豬生長情況，結果表明傳統免疫組、對照組和1頭份試驗組增重差異不顯著，0.75頭份和0.5頭份、0.25頭份試驗組增重差異不顯著，但是和前面三組增重差異顯著?！冬F代養豬生產技術》（P269）記載第8周仔豬平均日增重應為429 g，本試驗組日增重大大小于參考值?？赡艿脑蚴秦i只采血應激較大，影響生長，也有可能和品種有關，由于非洲豬瘟影響，很多仔豬是商品豬再留種的母豬生產的，較純正的三元豬生長性能要差一些。但是空白組的日增重大于其他組，可能和沒有注射圓環疫苗應激小有關，如果延長試驗時間，有可能觀察到圓環疫苗對豬整個生產的影響。減量免疫對于豬生長的影響需要更大的樣本和更長的試驗期來觀察。

3.2 最優減量免疫劑量

本試驗的目的是驗證豬圓環滅活疫苗減量免疫的效果，探索最佳免疫劑量，從而達到養豬業降本增效的最終目的。從免疫抗體分析結果來看，除0.25頭份試驗組抗體下降較快，32日齡變為陰性，其他組都是合格的，因此建議將0.5頭份作為減量免疫的最佳劑量。

綜上所述，采用無針注射器給仔豬接種圓環疫苗可以達到傳統有針疫苗同樣的抗體水平。除了0.25頭份試驗組32日齡抗體不合格以外，0.5頭份、0.75頭份和1頭份的無針注射組抗體都達到合格水平，因此建議采用0.5頭份作為仔豬減量免疫圓環病毒的最佳免疫劑量。此外，本文還對不同試驗組增重進行了初步探討，減量免疫組增重較慢，原因還需要擴大試驗動物數量和試驗時間進行進一步驗證。