MGMT在膀胱移行細胞癌中的表達及意義

于江華， 史海軍， 竇中嶺， 劉 輝， 李 元， 任素娟

膀胱腫瘤是泌尿系統最常見的腫瘤，其組織類型為上皮癌者占95%，其中超過90%系移行上皮癌，其生物學行為復雜多變，主要特點是多發和浸潤性生長，且易于復發和種植。近年來，我國部分城市腫瘤發病率報告顯示膀胱癌發病率有增高趨勢[1-2]，膀胱移行細胞癌嚴重危害人們的健康，但其發病確切機制尚未完全闡明。已有研究表明許多腫瘤的發生發展與MGMT缺失與突變關系密切[3-4]。MGMT即O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase)，是一種DNA修復酶，其主要作用是保護DNA免受烷化劑的損傷從而阻止腫瘤的發生。MGMT表達缺失或活性降低是否與膀胱移行細胞癌的發生發展機制有關的報道甚少。因此，本研究采用免疫組織化學方法檢測80例膀胱移行細胞癌組織，30例膀胱移行細胞癌旁組織及20例正常膀胱組織中MGMT的表達，探討MGMT表達的異常與膀胱移行細胞癌發生發展的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取河南科技大學第一附屬醫院泌尿外科2009年1月至2010年4月間診斷明確的膀胱移行細胞癌手術切除標本80例，移行細胞癌旁組織30例，開放手術取正常膀胱組織20例。膀胱移行細胞癌患者中男62例，女18例，年齡35～80歲，平均63.3歲。膀胱移行細胞癌分期按2002年UICC的TNM分期系統：T1期39例，T2期24例，T3期12例，T4期5例。分化程度按WHO 2004分級法：Ⅰ級37例，Ⅱ級26例，Ⅲ級17例。腫瘤單發53例，多發27例；初發58例，復發22例。所有標本均經10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋，連續組織切片，行免疫組織化學染色。

1.2 免疫組織化學染色 采用免疫組織化學(SP)法，鼠抗人MGMT單克隆抗體購于北京中杉金橋生物技術有限公司，DAB顯色，蘇木素復染。用已知陽性標本切片做陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判斷 細胞核、細胞漿或兩者均出現棕黃色顆粒為陽性細胞，陽性細胞數≥10%為陽性，陽性細胞數<10%為陰性，結果的判讀由兩名病理診斷醫師審核。

1.4 統計學分析 所有數據經SPSS17.0軟件進行統計學分析處理，統計學方法采用χ2檢驗，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 膀胱移行細胞癌和癌旁及膀胱正常組織的MGMT表達 如表1所示，MGMT在膀胱移行細胞癌中的陽性表達率為32.5%(26/80)，明顯低于癌旁組織的76.7%(23/30,P=0.000)和正常組織的65.0%(13/20,P=0.008)，差異有統計學意義。癌旁組織與正常組織間差異無統計學意義(P=0.368)。

2.2 MGMT表達與膀胱移行細胞癌病理及臨床參數的關系 膀胱移行細胞癌分化Ⅱ級的陽性表達率為23.1%(6/26)，明顯低于Ⅰ級的48.6%(18/37,P=0.040)，二者差異顯著，Ⅲ級的陽性表達率11.8%(2/17)明顯低于Ⅰ級的48.6%，二者間差異顯著(P=0.021)，而Ⅱ級與Ⅲ級間則無顯著差異(P=0.595)。膀胱移行細胞癌中的MGMT表達與臨床分期、患者性別、患者年齡、單發多發、初發復發均無明顯相關性(見表1、2)。

表1 膀胱移行細胞癌MGMT蛋白表達與病理參數的關系

注：P1為癌組織與癌旁組織，P2為癌旁組織與正常組織，P3為癌組織與正常組織，P4為Ⅰ級與Ⅱ級，P5為Ⅱ級與Ⅲ級，P6為Ⅰ級與Ⅲ級。

表2 膀胱移行細胞癌MGMT蛋白表達與臨床相關因素的關系

3 討論

膀胱移行細胞癌的發生與發展是多個因素參與的復雜過程，與多種癌基因和抑癌基因的表達、調控以及細胞凋亡有關[5]。傳統的觀點認為腫瘤的發生通常是基因損傷累積的結果，隨著研究的進展，國內外許多學者又發現基因啟動子異常甲基化和腫瘤的發生關系密切，而基因啟動子非甲基化正常狀態的維持則是靠甲基化轉移酶的作用來實現。MGMT是從細菌到哺乳類動物機體中存在的一種獨特DNA修復酶，他同時發揮轉移酶與修復甲基化的作用，在DNA交聯形成前將烷化基團從O6-mG的O6位轉移到自身半胱氨酸殘基上，修復DNA鏈上的鳥嘌呤損傷，但MGMT在轉移甲基后不可逆地失去活性而被消耗。MGMT是體內唯一可以去除甲基化損傷的DNA修復酶[6]，他可以將O6-鳥嘌呤加合物從DNA上移除，從而阻止腫瘤的發生。MGMT不僅在保護細胞免受烷基類物質的毒性、突變性和致癌性的損傷中具有決定性作用，同時也維持了其他抑癌基因的功能。Preuss等[7]分析了68個乳癌組織，發現MGMT活性低者占4%。Isowa等[8]檢測了21個肝癌組織，2例(9.5%)MGMT活性低。Virmani等[9]通過研究發現MGMT啟動子甲基化程度與宮頸病變發展程度一致。Allay等[10]發現MGMT過度表達能明顯降低淋巴瘤的發生率。Eads等[11]研究發現Barrett食管發展到腺癌與MGMT甲基化關系密切。Park等[12]研究發現胃癌MGMT啟動子甲基化與淋巴結轉移、腫瘤分級以及生存期有明顯相關性。

我們研究發現，MGMT在膀胱移行細胞癌組織中的表達明顯低于癌旁組織及正常膀胱組織，低分化組低于高分化組，癌旁組織與正常膀胱組織無顯著差異。MGMT在膀胱移行細胞癌組織中的表達與臨床分期、患者年齡、性別、腫瘤發病次數、腫瘤數量并沒有明顯關系。認為可能的機制是在膀胱癌的發生過程中，膀胱黏膜中DNA損傷增多，消耗大量的MGMT，此時膀胱黏膜細胞出現失代償，又不能產生足量的MGMT予以補充，就會使得DNA損傷積累加劇，致使膀胱黏膜的進一步癌變。隨著分化級別的降低，膀胱癌組織中MGMT出現甲基化而表達缺失或者失活增多，DNA損傷無法修復，致使膀胱癌惡性程度增高而預后較差。

MGMT蛋白可能成為一種預判膀胱移行細胞癌預后的重要標記物，從而指導臨床治療方案的選擇。但國內外對MGMT在膀胱癌中表達的研究甚少，確切機制還不十分清楚，本次研究收集的標本數量也不夠充分，這也是我們下一步在膀胱移行細胞癌中的研究方向。

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