低頻超聲對大鼠頰囊黏膜潰瘍組織SOD、MDA含量的影響*

楊明聰，范小平，王 春

(重慶市口腔疾病與生物醫學研究中心/重慶醫科大學附屬口腔醫院牙周黏膜科 401147)

隨著社會的進步，人們的生活節奏越來越快，工作與生活壓力也越來越大，復發性口腔潰瘍的發病率逐年升高，其患病率已高達20%左右，在口腔疾病中僅次于齲病和牙周病，位居第三?？谇粷儼l作時疼痛明顯，為此，尋求一種簡便、安全、快捷的治療方法具有重要的臨床意義。人們發現局部治療是口腔潰瘍最有效的治療方式，但受口腔特殊環境的影響，療效存在局限性[1]。近年來，隨著超聲醫學的迅速發展，超聲作為一種安全有效的治療手段，已廣泛應用于臨床。研究發現低頻超聲具有顯著的空化作用，能破壞角質層的脂質雙分子層結構，增加皮膚黏膜通透性，即具有顯著的增透效應[2]；同時，低頻超聲的機械振蕩可對組織產生按摩及松懈作用，增強組織局部血液循環，刺激成纖維細胞、巨噬細胞及血管的生成，加速創面愈合[3]。本研究擬通過構建大鼠頰囊黏膜潰瘍模型，觀察低頻超聲對潰瘍愈合時間及潰瘍組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影響，客觀評價低頻超聲在大鼠頰囊黏膜潰瘍治療中的效果，為低頻超聲應用于臨床口腔潰瘍的局部治療提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1材料 健康清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠36只，雌雄各半，體質量(180±20) g，由重慶醫科大學動物實驗中心提供(CQLA-0749)；SOD、MDA測定試劑盒購自南京建成生物實驗材料研究所；甲基紫精(100 mg)為美國Sigma公司產品。實驗儀器包括：雙目光學顯微鏡(Olympus)、低頻超聲治療儀(重慶海扶公司，ZY型，工作頻率為1.00～1.10 mHz，單路晶片輸出聲功率為0.11～3.50 W，脈沖占空比為50%，脈沖輸出頻率為1 kHz)、721 A型分光光度計(江蘇)、臺式離心機(江蘇)。

1.2方法

1.2.1大鼠頰囊黏膜潰瘍模型的建立及分組 36只大鼠隨機分為對照組(n=6)及大鼠頰囊黏膜潰瘍模型組(n=30)；適應性飼養及正常光照1周后，改良陳謙明等[4]介紹的制備動物潰瘍模型方法，將潰瘍模型組大鼠用10%水合氯醛(3 mL/kg)經腹腔靜脈注射麻醉后，取仰臥位固定于簡易手術臺上，用平齒鑷撐開上、下頜，暴露頰囊，用5號皮試針將10 mmol/L的甲基紫精溶液0.25 mL分別注入左、右頰囊的黏膜下約0.80 cm處，最后，用100 ℃、直徑為5 mm的鐵釘在左右頰囊熱損傷處理3 s，24 h后制成大鼠頰囊黏膜潰瘍模型。根據不同的處理方式，將頰囊黏膜潰瘍模型大鼠隨機分為潰瘍組(n=6)、藥物組(n=6)及低頻超聲組(n=18)；低頻超聲組大鼠按超聲波輸出功率再分為1.10、1.58、2.06 W組，每組6只。

1.2.2處理方法 對照組及潰瘍組大鼠正常飼養，不做任何處理；藥物組大鼠在乙醚麻醉下用1%碘甘油局部涂擦潰瘍處[5]，1次/天，連續3 d；低頻超聲組按超聲波輸出功率分別給予相應的脈沖低頻超聲處理90 s(在大鼠頰囊潰瘍對應外側皮膚處涂超聲偶聯劑后，將超聲探頭置于頰囊外側皮膚)，1次/天，連續3 d。

1.2.3大鼠頰囊黏膜潰瘍愈合時間的觀察 處理結束24 h后，各組隨機選取3只大鼠進行潰瘍愈合時間的觀察，持續8 d。

1.2.4大鼠頰囊黏膜潰瘍組織勻漿的制備 各組處理結束24 h取余下的3只大鼠用10%水合氯醛(3 mL/kg)經腹腔靜脈注射麻醉，用注射針頭蘸取甲紫在潰瘍上下左右四限處刺入黏膜,標記潰瘍部位和面積大小，取兩側黏膜潰瘍組織，用4 ℃生理鹽水漂洗，除去血液，濾紙拭干后稱質量，將組織剪碎，置于勻漿器中加入生理鹽水，將其研磨成10%的組織勻漿，隨后將勻漿液離心10 min(3 000 r/min)，取上清液進行檢測。

1.2.5大鼠頰囊黏膜潰瘍組織中SOD、MDA含量的檢測 按檢測試劑盒說明，采用分光光度法測定樣品管的吸光度值，計算組織中SOD、MDA的含量。計算公式為：

2 結 果

2.1大鼠頰囊黏膜潰瘍的愈合時間 采用改良陳謙明法，24 h后大鼠頰囊部位出現明顯潰瘍。各組大鼠頰囊黏膜潰瘍的愈合時間見圖1。潰瘍組大鼠在觀察第7天開始有潰瘍愈合，第8天完全愈合；藥物組大鼠在觀察第6天有2只愈合，第8天全部愈合；低頻超聲組均在觀察第4天開始有潰瘍愈合，第6天全部愈合。藥物組及低頻超聲組大鼠頰囊黏膜潰瘍的平均愈合時間均比潰瘍組短(P<0.05)，但不同功率低頻超聲組大鼠頰囊黏膜潰瘍的愈合時間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2大鼠頰囊黏膜潰瘍組織中MDA、SOD含量的比較 處理結束24 h后，各組大鼠頰囊黏膜潰瘍組織中MDA、SOD含量有一定差異。SOD含量低頻超聲組較潰瘍組顯著升高(P<0.05)，與對照組,、藥物組比較差異無統計學意義(P>0.05)，潰瘍組較對照組顯著降低(P<0.05)；MDA含量低頻超聲組較潰瘍組顯著降低(P<0.05)，與對照組、藥物組比較差異無統計學意義(P>0.05)，潰瘍組較對照組顯著升高(P<0.05)，見表2。

圖1 各組大鼠口腔潰瘍的愈合時間

表2 各組大鼠頰囊黏膜組織中MDA、SOD含量的比較

3 討 論

近年來，越來越多的資料表明，口腔黏膜病的發病率逐年升高。同時由于其發病因素的不確定性及治療方法的復雜性，該疾病的治療日漸成為廣泛關注的課題，尤其是口腔黏膜病中發病率最高的口腔潰瘍更是人們關注的重點，因其發病原因不清楚，多采用對癥治療以及對可能的病因進行治療。對癥治療主要是以局部治療為主，常受到口腔特殊環境的限制。

研究報道的口腔潰瘍發病因素甚多，尚無統一認識，推測其可能是多因素作用的結果，研究發現氧自由基可能與其發病有關。氧自由基的化學性質活躍，能攻擊細胞膜上的脂肪酸，產生過氧化物而引發疾病。但是，由于人體內存在自由基清除酶如SOD、過氧化氫酶等，正常情況下機體產生的自由基可迅速被SOD、過氧化氫酶清除，從而使體內環境維持在一個穩定的水平[6-7]。SOD活性反映機體清除氧自由基的能力，但當機體受到外在因素刺激時，自由基的產生與清除失衡，自由基產生過多，使組織損傷，引發疾病[8-10]。研究發現復發性口腔潰瘍患者的SOD活性較健康者明顯降低，而脂質過氧化物含量顯著升高，提示在復發性口腔潰瘍的發病機制中，氧自由基的大量產生以及SOD活性的下降可能是引起組織破壞的一個重要環節[11]。SOD活性下降，其清除氧自由基的能力下降，脂質過氧化物產生過多。而MDA是脂質過氧化反應的最終產物，其產生的MDA會使體內SOD活性進一步降低，過氧化物歧化反應清除自由基的能力進一步下降，使氧自由基的產生和消除不能達到平衡，產生脂質過氧化物不良反應，進一步加重病情。因此，測定SOD和MDA的含量變化可以間接反映氧自由基在體內的生成和清除情況以及對組織的損傷程度和體內抗氧化防御作用的功能狀況[12]。本實驗結果顯示，大鼠頰囊黏膜潰瘍時，SOD活性明顯下降，MDA含量明顯升高，當用功率為1.10、1.58、2.06 W低頻超聲處理后，頰囊黏膜潰瘍組織SOD含量有顯著升高，而MDA含量明顯下降，提示低頻超聲可能通過對體內SOD活性的影響而對氧自由基的產生和消除發揮一定的平衡作用。低頻超聲組與藥物組比較，SOD活性及MDA含量的差異無統計學意義，說明低頻超聲對口腔潰瘍的作用與藥物對口腔潰瘍的作用相似，均對口腔潰瘍的愈合起促進作用。

低頻超聲的溫熱效應及空化效應可能刺激組織中酶的活性，從而提高機體的抗氧化能力。本實驗結果表明，采用1.10、1.58、2.06 W低頻超聲處理大鼠頰囊黏膜潰瘍后，其潰瘍愈合時間有所縮短，其中2.06 W組的愈合時間最短；脈沖低頻超聲輸出功率為1.10，1.58、2.06 W處理組與潰瘍組比較，組織中SOD含量顯著升高(P<0.05)，而MDA含量則相反，在潰瘍組織中其含量顯著增高，低頻超聲處理后其含量降低(P<0.05)。提示在安全劑量范圍內，不同功率的低頻超聲可使潰瘍組織中氧自由基的產生和消除重新達到平衡，從而促進潰瘍的愈合。

綜上所述，脈沖低頻超聲在治療口腔潰瘍時，對潰瘍愈合時間及潰瘍組織中SOD及MDA的含量有一定影響，可促使氧自由基的生成和清除重新達到平衡，對口腔潰瘍的愈合發揮一定的促進作用。選擇輸出功率為1.10～2.06 W的脈沖低頻超聲治療口腔潰瘍安全可行。

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