老年前列腺癌患者超聲檢測血流分級與術后組織中基質金屬蛋白酶-2、-9表達的關系

袁 泉 詹正民 (武漢市第一醫院超聲科，湖北 武漢 430022)

前列腺癌發生發展過程中受多種蛋白的調節，其表達不僅與預后相關，而且對其生物學行為有重要調節作用?；|金屬蛋白酶(MMP)-2和-9是其家族的重要成員，對腫瘤的進展有重要作用，研究顯示MMP-2和-9的表達可能與血管生成密切相關〔1，2〕。超聲檢測血流分級的基礎依賴于腫瘤中的新生血管，同時超聲檢測作為術前診斷的重要技術，具有無創，操作簡單的特點，而且超聲在檢測中，可以有效地判斷血流〔3〕。本文通過超聲檢測前列腺癌老年患者血流分級，觀察其與術后癌組織中MMP-2和-9的表達關系，探討術前超聲檢測的價值，以期為臨床早期診斷及指導治療提供幫助。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2010年12月在南寧市第一人民醫院確診為前列腺癌并需要進行手術治療的老年患者共99例，年齡60～87歲，平均70.3歲。納入均符合WHO的診斷標準，并經病理學主治醫師再次確診。

1.2 超聲檢測方法 使用ALOKA Prosound F75型超聲儀，腔內探頭頻率6～10 MHz，分析血流分級。具體標準：0級：腫瘤內無血流顯示;Ⅰ級：腫瘤內1～2處點狀或條狀血流顯示;Ⅱ級：3～4條彩色血流顯示;Ⅲ級：5條以上彩色血流顯示〔4〕。

1.3 前列腺癌中MMP-2和-9的檢測方法 MMP-2和-9的濃縮液均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，依不同配比稀釋后進行預實驗，選擇最適合的稀釋比例進行實驗的檢測。MMP-2和-9的檢測應用免疫組織化學技術的SP法。具體步驟：脫蠟后置于自來水中放置10 min，以3%H2O2去離子水進行孵育10 min，待高壓鍋蒸煮修復后分別滴加MMP-2或-9的一抗，室溫37℃孵育1～2 h或過夜，應用PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;加入二抗，室溫狀態孵育20 min，PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;加入辣根酶標記鏈霉卵白素，室溫狀態孵育約30 min，PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;DAB顯色后，應用自來水進行沖洗，蘇木素復染、脫水、透明、封片。實驗均由同一病理科主管技師進行操作，避免人為誤差。

1.4 統計學分析 應用SAS6.12進行t檢驗或χ2檢驗，多組間定量資料比較采用方差分析，并應用SNK法進行兩兩比較，同時對數據進行線性相關分析。

2 結果

2.1 前列腺癌中不同血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的關系 前列腺癌中MMP-2和-9的表達與不同血流分級相關，即隨著術前血流分級的增加，MMP-2和-9表達的陽性率明顯增加(P＜0.01)。見表1。

2.2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的差別 不同Gleason評分、增殖細胞核抗原(PCNA)、Ki67表達的前列腺癌血流分級與MMP-2和-9的表達差別均顯著(P＜0.01，P＜0.000 1)。見表2。

2.3 前列腺癌中血流分級與MMP-2和-9表達的相關性 經線性相關分析，血流分級與MMP-2表達的陽性率呈正相關性(r=0.49，P=0.029 3)，血流分級與MMP-9表達的陽性率呈正相關性(r=0.45，P=0.022 6)。

表1 前列腺癌中不同血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的比較( s，%)

表1 前列腺癌中不同血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的比較( s，%)

血流分級 n MMP-2 F值 P值 MMP-9 F值 P值0級 23 25.08±6.65 11.02 0.003 9 19.48±6.64 10.06 0.009 8Ⅰ級 25 35.43±6.54 34.16±7.46Ⅱ級 26 54.53±10.79 42.64±6.51Ⅲ級25 67.57±10.03 57.65±14.54

表2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的差別( s，%)

表2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的差別( s，%)

臨床病理特征n 血流分級〔n(%)〕0～Ⅰ級 Ⅱ～Ⅲ級 χ2值 P值 MMP-2 t值 P值 MMP-9 t值 P值Gleason 43.694 7 ＜0.001 15.43 ＜0.000 1 12.32 ＜0.000 1≤6分 55 43(78.18)12(21.82)38.75±11.03 33.42±7.69＞7分 44 5(11.36)39(88.64)53.25±12.54 46.57±9.20 PCNA 13.763 0 0.000 2 10.85 0.002 9 11.29 0.000 2＜25% 47 32(68.09)15(31.91)39.85±8.74 33.02±9.84≥25% 52 16(30.77)36(68.23)49.86±8.93 44.35±7.64 Ki67 6.304 3 0.0120 8.54 0.010 3 9.07 0.008 6＜25% 49 30(61.22)19(38.78)40.32±7.06 33.95±8.73≥25% 50 18(36.00)32(64.00)48.75±7.39 43.53±8.29

3 討論

超聲對腫瘤的血流能較好地反映出來，已經在惡性腫瘤術前診斷中得到應用〔4〕，但是在前列腺癌術前分級中報道較少，而前列腺癌老年人多見，應用超聲術前診斷前列腺腫瘤簡便、易行，患者無痛苦，易于接受。實體腫瘤細胞的生長分為血管生長前期和血管化的浸潤性生長期，在血管前期，其原發腫瘤直徑常小于3 mm，中心部位主要靠彌散作用獲得營養，因此病變相對靜止，腫瘤生長緩慢，當腫瘤生長進入浸潤性生長期，此時將新生大量血管，此時影像學檢測血流將具有重要價值。當腫瘤細胞增殖時，MMP-2和-9以酶原形式分泌到基質中，不僅能夠在細胞表面活化其他促轉移的細胞因子，而且其還具有廣泛的底物特異性和強大的基質降解功能〔5，6〕。當腫瘤細胞惡變時，腫瘤細胞通過分泌MMP-2和-9來降解構成基底膜的成分，從而破壞了機體防御時腫瘤浸潤與轉移的自然屏障，促使腫瘤浸潤和轉移〔7，8〕。近來有研究顯示MMP家族對血管生成有重要促進作用〔2〕，因此，超聲檢測血流分級可能與MMP-2和-9表達有一定的相關性。本結果顯示前列腺癌隨著血流分級的增加，MMP-2和-9表達的陽性率明顯增加，且血流分級、MMP-2和-9的表達與腫瘤的Gleason評分、PCNA、Ki67表達密切相關，由于以上因素均與前列腺癌預后相關，因此術前檢測血流分級可能對判斷患者的預后有一定價值。超聲檢測是無創性檢測，能有效提供血流圖像，而且前列腺癌的癌組織中血管及血流均很豐富，也為超聲術前判斷腫瘤的生物學行為和指導治療提供了重要幫助。本實驗中顯示血流分級與MMP-2和-9的表達呈正相關性，這也直接證實了二者的協同作用，這與MMP-2和-9對血管生成的促進作用的研究結論一致，也為腫瘤血管學的超聲聲像研究提供了理論依據。綜上，術前對前列腺癌患者應用超聲檢測血流分級，能無創性地判斷腫瘤中血管形成情況，同時反映MMP-2和-9的表達特點，對于判斷腫瘤預后和指導臨床治療有一定價值。

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