地佐辛與酮咯酸氨丁三醇注射液配伍后變化及鎮痛試驗

胡海勛，姚景春，宋洪運，商慶節，羅漣榮 （魯南制藥集團股份有限公司新藥藥理中心，山東 臨沂273400）

酮咯酸氨丁三醇（ketorolac tromethamine）注射液作為一種強效止痛、中度抗炎和解熱的非甾體類抗炎藥，通過抑制前列腺素的生物合成產生強大的鎮痛作用，用于急性中、重度疼痛的短期治療，通常用于手術后鎮痛。與阿片類鎮痛藥地佐辛（Dezocine）注射液聯合應用符合臨床上對于特別嚴重的疼痛，多采用多模式鎮痛的方法要求，同時還可起到協同作用，且減少各自藥物的使用劑量，降低地佐辛成癮的概率。但在臨床應用時，有醫生發現酮咯酸氨丁三醇注射液與地佐辛注射液合用時，在較小容器內混合易發生析出現象［1－2］。針對這種現象，本文旨在研究不同濃度地佐辛注射液與酮咯酸氨丁三醇注射液配伍后不溶性微粒、pH值和含量的變化，同時采用固定劑量改變比例的正交試驗設計方法篩選2種注射液最佳鎮痛作用配伍比例，為臨床用藥提供參考。

1 材料

1．1 儀器 美國Agilent 1200型自動進樣高效液相色譜儀；丹弗（北京）UB－7型pH計；天津天河GWF－8JC微粒分析儀；廣州瑞悅YB－Ⅱ澄明度檢測儀。

1．2 s試藥 醋酸氨、醋酸為分析純；甲醇為色譜純；地佐辛注射液為揚子江藥業集團有限公司生產（規格：1 mL∶5 mg，批號12021321）；酮咯酸氨丁三醇注射液為山東新時代藥業有限公司生產（規格：1 mL∶30 mg，批號120722－4）。

1．3 動物 雌性ICR小鼠，體質量18～22 g，由山東新時代藥業有限公司動物中心提供，動物合格證號：0008036。

2 方法與結果

2．1 色譜方法

2．1．1 色譜條件 色譜柱：Sepax C18（4．6 mm×250 mm，5μm）。流動相A為0．02 mol·L－1醋酸氨溶液（醋酸調至pH4．05），流動相B為甲醇。梯度洗脫：A：48%～48%，B：52%～52%（0～7．5 min）；A：48%～30%，B：52%～70%（7．5～12 min）；A：30%～48%，B：70%～52%（12～15 min）。檢測波長：281 nm。進樣量：20μL。流速：1．0mL·min－1。柱溫：30℃。在本色譜條件下，所得色譜圖見圖1。在該條件下，地佐辛（Rt≈6．5 min），酮咯酸（Rt≈10．1 min）的色譜峰與其他物質峰分離良好。

圖1 樣品色譜圖Fig 1 Chromatogram of sample

2．1．2 溶液的配制 取地佐辛酮咯酸對照品各適量，用0．9%氯化鈉溶液溶解并稀釋，配成質量濃度為0．407 mg·mL－1地佐辛對照品儲備液和0．410 mg·mL－1酮咯酸對照品儲備液，備用。

2．1．3 標準曲線制備 精密吸取“2．1．2”項下地佐辛對照品儲備液各0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0mL，置于25 mL的量瓶中定容，混勻，配制成標準系列溶液，各取20μL進樣，按外標法以峰面積（A）對地佐辛質量濃度（C）做線性回歸，結果表明線性關系良好，地佐辛線性關系范圍：0．008 1～0．130 2 mg·mL－1，回 歸 方 程 為：A＝6 067C－2．249，r＝0．999 6，n＝6；另精密吸取“2．1．2”酮咯酸溶液各0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0mL，置于25 mL 的量瓶中定容，混勻，配制成標準系列溶液，各取20μL進樣，按外標法以峰面積（A）對酮咯酸質量濃度（C）做線性回歸，結果表明線性關系良好，酮咯酸線性關系范圍：0．008 2～0．131 2 mg·mL－1，回歸方程為：A＝3 684C－1．086，r＝0．999 7，n＝6。

2．1．4 精密度試驗 分別取“2．1．2”項下儲備液稀釋成0．065 1 mg·mL－1地佐辛溶液和0．065 6 mg·mL－1酮咯酸溶液，各取20μL進樣，各重復進樣6次，測定峰面積。結果地佐辛和酮咯酸RSD分別為0．37%和0．29%。

2．1．5 方法回收率 精密量取“2．1．2”項下儲備液適量，混合，用0．9%氯化鈉溶液稀釋成高、中、低3種質量濃度溶液，按“2．1．1”項下色譜條件進樣20 μL，測定峰面積，代入回歸方程計算濃度，并計算回收率，結果地佐辛和酮咯酸平均回收率分別為99．92%和98．87%，RSD分別為1．74%和1．38%。

2．2 不溶性微粒檢測

2．2．1 不同配伍比例可見異物檢查［3］分別將地佐辛注射液（A）和酮咯酸氨丁三醇注射液（B）按不同體積比例下混勻，在澄明度檢測儀下檢測是否有可見異物。地佐辛注射液（A）和酮咯酸氨丁三醇注射液（B）配伍后在體積比例小于1∶2條件下無可見異物。

2．2．2 配伍液配制 根據臨床常用配伍劑量，配伍液中地佐辛注射液和酮咯酸氨丁三醇注射液體積比為3∶1，根據“2．2．1”項下可知，有可見異物。分別將配伍液，用過濾后的0．9%氯化鈉溶液稀釋至3，6，12，20，25倍（對應規格分別為24，48，96，160，200 mL），得不同質量濃度配伍液。

2．2．3 可見異物和不溶性微粒檢測［4］用澄明度監測儀和微粒分析儀，按《中國藥典》方法中光阻法測定“2．2．2”項下不同質量濃度配伍液的可見異物和不溶性微粒，若可見異物不合格，不溶性微粒不需要檢測。若不溶性微粒檢測合格，放置，分別在0，2，4，6，8，12 h檢測不溶性微粒變化。結果見表1。將溶液稀釋至12，20，25倍時，可見異物和不溶性微粒均符合要求，且在12 h內無變化。

表1 不同濃度配伍液不同時間可見異物與不溶性微粒變化（n＝3）Tab 1 Changes of number of visible and insoluble particles and compatible solution in different concentration at different time periods（n＝3）

2．3 相對含量和pH值變化

2．3．1 可見異物對含量變化的影響 分別以“2．2．2”項中不同質量濃度的配伍液稀釋到約0．1 mg·mL－1后，百分含量定為100．0%，在“2．1．1”項下色譜條件下測定將可見異物過濾后稀釋的配伍液含量。取“2．2．2”項下稀釋配伍液，分別在0，2，4，6，8，12 h內測定含量變化，相對含量變化±5%視為無變化。結果見表2，表3。配伍液稀釋3，6倍，室溫放置12 h，稀釋液中酮咯酸相對含量變化大于5%，稀釋12，20，25倍相對含量變化小于5%；配伍液稀釋3，6，12，20，25倍，稀釋液中地佐辛相對含量變化小于5%。

表2 不同質量濃度酮咯酸氨丁三醇配伍液相對含量變化（n＝3）Tab 2 Changes of relative content to ketorolac tromethamine in different concentration compatible solution（n＝3）

表3 不同質量濃度地佐辛配伍液相對含量變化（n＝3）Tab 3 Changes of relative content to dezocine in different concentration compatible solution（n＝3）

2．3．2 pH 值變化 取“2．2．2”項下不同稀釋倍數配伍液，分別在0，2，4，6，8，12 h內測定pH 值變化，與0h比較，相對pH變化±0．5視為無變化。結果見表4。將配伍原液稀釋3，6，12，20，25倍，室溫放置12 h，同一稀釋液pH無變化。

表4 不同質量濃度配伍液相對pH值變化（n＝3）Tab 4 Changes of relative pH to different concentration compatible solution（n＝3）

2．4 小鼠醋酸扭體試驗［4］

2．4．1 供試品溶液分析 分別配制復方以及單方高、中、低3個劑量組，酮咯酸氨丁三醇質量濃度為0．01，0．02，0．04 mg·mL－1，地佐辛質量濃度均為0．01 mg·mL－1，按“2．1．1”項下色譜條件測定復方的相對含量，結果均符合要求。

2．4．2 試驗方法 將小鼠按體質量簡化隨機法分組，每組10只，給藥后20 min，每鼠腹腔注射0．6%醋酸溶液0．1 mL／10 g。記錄注射醋酸后20 min內各小鼠扭體次數，采用單因素方差分析法比較組間差異，并計算藥物鎮痛百分率即抑制率，采用低劑量地佐辛作為陽性對照組。

2．4．3 試驗結果 對地佐辛與酮咯酸氨丁三醇最佳配伍比例篩選，采用固定劑量改變比例的正交試驗設計方法。地佐辛和酮咯酸氨丁三醇的給藥量分別定為A、B兩因素，為重點考察低劑量地佐辛與不同劑量酮咯酸氨丁三醇的協同作用，采用混合水平L8（2×4）正交表，A因素設2個水平，B因素設4個水平，進行8次試驗。當因素水平完全相同時，因素的主次關系完全由極差R的大小來決定。當水平數不完全一樣時，無法進行直接的比較，這是因為當因素對指標有同等影響時，水平多的因素極差應大一些。因此需要利用折算系數對極差進行折算。

表5 正交試驗結果分析Tab 5 Results of analysis on orthogonal experiment

由上計算R’A＞R’B可知因素主次順序為地佐辛優于酮咯酸氨丁三醇。本試驗旨在探索地佐辛低劑量下的配伍作用，所以沒有設置地佐辛高劑量組。從表5中也可看出B3較優，綜合A1B3確為表中最優結果，選擇此比例作為注射給藥的最佳配比。協同作用采用Q值法進行判定。q值由以下的公式求得：q＝PA＋B／（PA＋PB－PA×PB）式中PA、PB和PA＋B分別為地佐辛組、酮咯酸氨丁三醇組和兩藥聯用組小鼠扭體次數的抑制率。若q≤0．85說明兩藥合用后產生拮抗作用；若q≥1．15，說明兩藥合用后產生協同作用。從表5中看出，兩藥聯用低、中、高3個劑量都具有良好的協同作用。

3 討論

酮咯酸氨丁三醇（pH6．5）酸性比地佐辛（pH 4．6）弱，地佐辛與酮咯酸氨丁三醇鹽發生反應，生成酮咯酸和地佐辛氨丁三醇鹽，其中酮咯酸和地佐辛氨丁三醇鹽，其中酮咯酸在水溶液中析出。隨稀釋倍數增加，酮咯酸逐漸溶解于水。酮咯酸與地佐辛均為弱酸，配伍后與氨丁三醇形成緩沖鹽溶液，因此在緩沖能力范圍內將配伍液稀釋不同倍數時，pH無明顯改變。地佐辛為精神類藥物，作用于中樞神經起鎮痛作用，雖然臨床上沒有濫用傾向，但對于具有阿片濫用史的人群仍具有濫用傾向。本試驗得出了鎮痛作用最佳的配伍比例，但是考慮到酮咯酸氨丁三醇和地佐辛的藥物不良反應，因此推薦以酮咯酸氨丁三醇的中劑量或低劑量與地佐辛進行聯用。本試驗通過小鼠鎮痛試驗驗證了地佐辛和酮咯酸氨丁三醇的協同作用，但對于兩者協同作用還有待進一步的臨床數據來驗證。

［1］張露婷，劉景和．地佐辛聯合酮咯酸氨丁三醇用于全麻病人術后鎮痛的臨床研究［J］．海峽藥學，2012，24（1）：86－88．

［2］劉筱凌，徐海英．酮咯酸氨丁三醇注射液和噴他佐辛注射液存在配伍禁忌［J］．中華現代護理雜志，2011，17（24）：2881．

［3］中國藥典．二部［S］．2010：71，76．

［4］張玉玲，佟繼銘．疼痛實驗動物模型研究概況［J］．承德醫學院學報，2009，26（2）：195－198．