布地奈德對鼻息肉中核因子κB和堿性成纖維細胞生長因子表達的影響

朱華斌，張建華，劉仲娟，徐穎，丁俊杰，蔣燕飛，鄭逸品

（江蘇大學附屬上海第八醫院耳鼻咽喉科，上海200235）

布地奈德對鼻息肉中核因子κB和堿性成纖維細胞生長因子表達的影響

朱華斌，張建華*，劉仲娟，徐穎，丁俊杰，蔣燕飛，鄭逸品

（江蘇大學附屬上海第八醫院耳鼻咽喉科，上海200235）

目的：觀察布地奈德鼻腔霧化治療對鼻息肉中核因子κB（NF-κB）和堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）表達的影響。方法：對40例鼻息肉患者行布地奈德鼻腔霧化治療，并以10例正常中鼻甲組織作為對照，應用免疫組化的方法檢測鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表達。結果：經布地奈德治療后鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表達較治療前明顯降低（P＜0.05），且二者呈顯著的正相關性（r＝0.53，P＜0.01）。結論：布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉可下調NF-κB和b-FGF的表達。

鼻息肉；布地奈德；核因子κB；堿性成纖維細胞生長因子

目前認為鼻息肉是多環節多途徑引起的炎癥性病變，其形成與炎癥反應密切相關。核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一種核轉錄調控因子，對多種細胞因子和炎癥介質具有調節功能，是炎癥反應途徑中的重要介質。堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，b-FGF）具有促進細胞的增殖分化作用和促血管生成及參與細胞外基質形成等作用，且作為較強的NF-κB激活劑，可促進炎癥的發生發展。本研究通過布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉，觀察鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達變化，來探討鼻息肉局部治療的可行性。

1 對象與方法

1.1 對象

選取40例鼻息肉患者為治療組，年齡27～59歲，平均（39±12）歲，按慢性鼻竇炎、鼻息肉的分型、分期標準［1］，均為Ⅱ型1－3期。治療組予布地奈德（阿斯利康公司）混懸液1 mg，2次／d鼻腔霧化治療，共7 d。治療組40例患者在治療前及治療后各取鼻息肉組織做標本，對照組10例正常中鼻甲標本在鼻中隔手術同期取得。要求入選病例均無變應性鼻炎、哮喘等變應性疾病史，且前1個月內未使用過糖皮質激素和抗組胺藥及無上呼吸道感染病史。

1.2 方法

所有標本用4%低聚甲醛固定，石蠟包埋、切片，并常規行HE染色。采用Envision二步法（丹麥Dako公司）行免疫組化染色，兔抗人NF-κB抗體和b-FGF抗體（武漢博士德生物工程有限公司）工作濃度為1∶100，DAB顯色。同時，PBS取代一抗作陰性對照，以排除非特異性的染色。

在光學顯微鏡下觀察，若細胞質和（或）細胞核內出現清晰的顆粒狀棕黃色物質即為NF-κB、b-FGF蛋白陽性細胞。對每一張免疫組化切片的陽性染色區域隨機選取5個視野（10×40倍），采用高分辨率圖像分析儀自動檢測陽性區域的光密度值，將5個值平均后，即為該片NF-κB、b-FGF的參考值。以上實驗操作，在不知切片分組的情況下均請一位病理科主治醫師重新操作。

1.3 統計學分析

所測實驗數據以均數±標準差表示，用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析，布地奈德治療前后的NF-κB和b-FGF表達強度差異采用配對t檢驗，NF-κB和b-FGF的相關性用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達情況

治療組鼻息肉中NF-κB蛋白的免疫組化染色表達強度較對照組（1.09±1.07）明顯增強，b-FGF蛋白的表達也較對照組（0.51±0.43）明顯增強。且經布地奈德治療后NF-κB、b-FGF的表達強度均較治療前明顯減少（P＜0.01）。見表1。

表1 治療組鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達

2.2 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的免疫組化結果

在鼻息肉黏膜上皮細胞、血管內皮細胞、腺上皮細胞及間質中散在的炎癥細胞的胞質和細胞核內有NF-κB蛋白的陽性表達，其中以細胞質內的表達為顯著。經布地奈德鼻腔霧化治療后NF-κB蛋白的表達減少。見圖1。

在鼻息肉黏膜上皮細胞、血管內皮細胞、腺上皮細胞及間質中散在的炎癥細胞胞質內有b-FGF蛋白的陽性表達。經布地奈德霧化治療后b-FGF蛋白的表達減少。見圖2。

圖1 鼻息肉中NF-κB的表達（DAB染色10×20）

圖2 鼻息肉中b-FGF的表達（DAB染色10×20）

2.3 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白表達的相關性

經Pearson相關分析，鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達呈顯著正相關（r＝0.53，P＜0.01）。

3 討論

近年研究表明，鼻息肉的發生發展過程與炎癥密切相關，有多種重要的細胞因子參與。而NF-κB是介導細胞內信號傳遞的重要核轉錄因子，在炎癥和免疫反應中起到中樞作用。NF-κB被激活時進入核內，與DNA上特異的啟動位點結合促進細胞因子轉錄，其活化可引起大量炎癥介質分泌，參與和調節多種炎癥蛋白基因的表達［2］，形成炎癥級聯反應，并持續增強。國內外的研究表明，NF-κB在鼻息肉組織中呈陽性表達［3］，NF-κB通過調控IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、TNF-α、NO等細胞因子的轉錄而作用于鼻息肉形成過程的級聯炎癥反應，促進鼻息肉的發生發展［4－5］。目前認為糖皮質激素是治療鼻息肉的有效藥物［6－7］，其抗炎能力主要是抑制NF-κB和促炎基因DNA的結合，或增加合成IκB，使NF-κB激活的信號轉導途徑被阻斷，最終減少鼻黏膜中多種炎性細胞的數量，并抑制炎癥細胞因子的表達。而布地奈德是一種新型的非鹵化糖皮質激素，具有高受體結合力和較強的抗炎作用。本實驗結果顯示，鼻息肉組織中NF-κB蛋白有較強的表達，主要位于鼻息肉上皮細胞、腺上皮細胞、血管內皮細胞和炎癥細胞的胞質和胞核中，以胞質中表達更強，明顯高于正常中鼻甲組織的表達，且經布地奈德鼻腔霧化治療后可減輕其表達強度。這提示鼻息肉的炎癥反應中，轉錄因子NF-κB的激活可能是一個中心環節，其激活可介導炎癥介質的釋放和活化，形成炎癥級聯反應，使得炎癥的損傷持續放大，導致鼻息肉的發生發展。但可通過布地奈德來抑制NF-κB蛋白的活性，以減少炎癥介質的產生，達到治療鼻息肉的目的。

b-FGF是一種多效能的細胞生長因子，具有促進細胞的增殖、分化、黏附作用和促血管生成及參與細胞外基質形成等作用。Powers等［8］在鼻息肉組織中檢測到b-FGF mRNA，并且發現在鼻息肉上皮細胞層基底膜存在b-FGF強免疫染色，提示b-FGF在鼻息肉組織中促進了內皮細胞及上皮細胞的增殖分化。本實驗結果顯示，鼻息肉組織中的b-FGF蛋白較正常中鼻甲組織的表達明顯增強，且布地奈德鼻腔霧化治療可減輕其表達強度。實驗結果同時發現，鼻息肉中b-FGF和NF-κB的表達具有明顯的正相關性（r＝0.53，P＜0.01）。這表明鼻息肉組織中的NF-κB對b-FGF活化具有一定的正作用。

本研究結果顯示，布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉，可抑制鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達，同時可起到清理鼻腔的作用，并可減輕糖皮質激素全身使用所引起的不良反應［9］，是一種可行的鼻息肉局部治療的措施。

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R765.25

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1671－7783（2014）04－0366－03

10.13312／j.issn.1671-7783.y140069

*：通訊作者，E-mail：hndxzhjh＠sina.com

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2014－03－12 ［編輯］何承志