不同種源金銀花陜西引種后主要成分的比較分析

孫寧寧，程巧凡，郭增軍（1.西安交通大學藥學院，西安 710061；.西安碑林藥業股份有限公司，西安 710048）

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花；夏初花開放之前采收，干燥；具有清熱解毒、疏散風熱的功效，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發熱等癥［1］?，F代醫學研究證明，金銀花具有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎、利膽、保肝、降血脂、抗生育的作用，同時對免疫系統有一定的作用［2］。其中抑菌、抗病毒、解熱抗炎作用尤為顯著，在大多數該類療效處方中均含有金銀花。我國金銀花野生資源豐富，有研究資料表明，忍冬屬植物全世界約有200種，我國有98種，廣泛分布于全國各省區，而以西南部種類最多，其中可供藥用的品種達47種［3］。近年來市場需求日益增加，野生資源不能滿足市場需要，金銀花種植發展迅猛，山東、河南、湖南、河北、山西、甘肅、四川、貴州、新疆等地均有栽培。傳統中醫認為，河南所產“密銀華”和山東所產“濟銀花”質量最好，為道地藥材［4］。習慣認為山東產量大，而河南品質佳［5］。金銀花的有效成分主要有有機酸類、黃酮類、三萜皂苷類、揮發油類、微量元素類等，《中國藥典》2010年版金銀花的檢測是以木犀草苷和綠原酸為指標，其中綠原酸的含量多隨產地、加工方法等的不同有較大的差異［6］。為研究不同種源金銀花在陜西引種后的質量狀況，對種源地為山東九間棚和河南封丘的金銀花引種到陜西臨潼后，比較分析其傳統藥用部位花、非藥用部位莖和葉中主要成分綠原酸及木犀草苷引種前后的變化，并與陜西產野生金銀花進行比較，為陜西引種金銀花的質量控制提供一定的科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Dionex UltiMate3000SD全自動高效液相色譜儀（美國戴安公司）；AS10200AD超聲波清洗器；Denver TP214分析天平（奧豪斯儀器上海有限公司）。

1.2 試藥 綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110753－200413）；木犀草苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：111720－201106）；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸為分析純；實驗所用藥材分別購自山東九間棚、河南封丘，陜西臨潼引種的山東九間棚、河南封丘及陜西臨潼產金銀花藥材。樣品編號：1＃山東九間棚（花），2＃陜西臨潼引種山東九間棚（花），3＃陜西臨潼引種山東九間棚（莖），4＃陜西臨潼引種山東九間棚（葉），5＃河南封丘（花），6＃陜西臨潼引種河南封丘（花），7＃陜西臨潼引種河南封丘（莖），8＃陜西臨潼引種河南封丘（葉），9＃陜西臨潼野生（花），10＃陜西臨潼野生（莖），11＃陜西臨潼野生（葉）。

2 方法與結果

2.1 綠原酸含量測定 按照2010年版《中國藥典》一部金銀花藥材含量測定項下的方法測定。

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈－4mL·L－1磷酸溶液（13∶87）；檢測波長327nm；進樣量10μL；流速1.0mL·L－1；柱溫室溫。

2.1.2 對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，加體積分數50%的甲醇溶液制成1μg·mL－1的綠原酸對照品溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取不同產地的金銀花藥材、陜西臨潼野生及引種的金銀花莖、花、葉粉末各0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分數50%甲醇50mL，稱定質量，超聲處理30min，放冷，再稱定質量，用體積分數50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5mL，置于25mL棕色瓶中，加體積分數50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 測定法 分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。綠原酸對照品、不同產地金銀花中綠原酸色譜圖見圖1。

圖1 HPLC圖1.綠原酸對照品；2.陜西臨潼產金銀花；3.山東九間棚金銀花；4.河南封丘金銀花Fig.1 HPLC chromatograms1.chlorogenic acid reference；2.Shaanxi Lintong；3.Shandong Jiujianpeng；4.He′nan Fengqiu

2.1.5 測定結果 精密稱定不同產地金銀花藥材各3批按以上方法測定綠原酸的含量，每種產地測定值取平均值，結果見表1。

2.2 木犀草苷含量測定 按照《中國藥典》2010年版金銀花藥材項下的含量測定方法。

2.2.1 色譜條件 用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈（A）和5mL·L－1冰醋酸水溶液（B）為流動相，采用梯度洗脫（0～15min，10%～20%A；15～30min，20%A；30～40min，20%～30%A）。流速1.0mL·L－1；檢測波長350nm；進樣量10μL。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取木犀草苷對照品適量，加體積分數70%乙醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱定幾種樣品粉末各2.0g，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分數70%乙醇50mL，稱定質量，超聲處理1h，放冷，再稱定質量，用體積分數70%乙醇補足減失的質量，搖勻，過濾，精密量取濾液10mL，回收溶劑至干，殘渣用體積分數70%乙醇溶解，轉移至5mL量瓶中，加體積分數70%乙醇至刻度，搖勻即得。

2.2.4 測定法 分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。

2.2.5 測定結果 精密稱定不同產地金銀花藥材各3批按以上方法測定木犀草苷的含量，每種產地測定值取平均值，結果見表1。

表1 不同產地忍冬中不同藥用部位的綠原酸及木犀草苷含量Tab.1 The content of chlorogenic acid and luteoloside extracted from different samples（n＝3）

3 討論

《中國藥典》中規定的金銀花的指標性成分為綠原酸和木犀草苷。由表1可知，在金銀花中，綠原酸的含量為：山東九間棚＞河南封丘＞引種山東九間棚＞引種河南封丘＞陜西臨潼本地野生；木犀草苷的含量為：河南封丘＞山東九間棚＞引種河南封丘＞引種山東九間棚＞陜西臨潼本地產。2種成分均高于2010年版《中國藥典》中規定的綠原酸含量不得少于1.5%、木犀草苷含量不得少于0.05%的標準。

從表1中可以看出，山東九間棚種金銀花，原產地藥材和引種地藥材中綠原酸含量均高于河南封丘種，但源于河南封丘種的金銀花，其中的木犀草苷含量要高于山東九間棚種。對比原產地和引種栽培地藥材中的含量，2種成分均低于原產地。陜西臨潼的地理位置是北緯34.36°、東經109.21°，其維度與河南封丘（北緯34.35°、東經114.14°）和山東九間棚（北緯35.05°、東經118.35°）相近。氣候適宜忍冬的生長，對將河南封丘和山東九間棚忍冬優良種移栽后有效成分含量下降的問題，需要從后繼的分子生藥學數據進行說明。

考察引種種和本地野生種中有效成分含量的變化，從表1中可以看出，引種種的有效成分含量均明顯高于本地野生種，這一結果說明，引種種與本地野生種相比，具有較好的二次產物代謝基因?？疾煲N種不同藥用部位中的有效成分含量，結果表明，河南封丘的引種種無論是綠原酸還是木犀草苷，均優于山東九間棚引種種。同時，考察莖和葉中含量的差異，由表1可知，在引種種或本地野生種不同部位中，綠原酸的含量均是花蕾＞葉＞莖。經統計分析，花蕾中綠原酸含量與葉、莖的含量差異顯著。張永清等［7］運用紫外分光光度法對金銀花莖、葉、花不同器官中的綠原酸含量進行了測定，研究結果與本實驗結果一致。

綜上所述：2種引種種的有效成分含量均低于原產地，但明顯高于本地野生種，且符合《中國藥典》2010年版的要求。引種種的栽培能在一定程度上提高陜西產金銀花的市場競爭力，并且可以補充金銀花市場需要，有較高的市場價值。

［1］國家藥典委員會.中國藥典2010年版［S］.一部 .北京：中國醫藥科技出版社，2010：205－206.

［2］常鎖.金銀花藥理研究概況［J］.中國民族民間醫藥，2010，19（1）：49.

［3］石鉞，石任兵，陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展［J］.中國藥學雜志，1999，34（11）：724－727.

［4］龐瑞.金銀花有效成分的藥理學研究進展［J］.陜西中醫學院學報，2011，34（3）：77－79.

［5］徐炳聲.金銀花的原植物研究［J］.藥學學報，1979，14（1）：23－24.

［6］李樹本，石玉.六種金銀花中綠原酸含量分析［J］.西北藥學雜志，1986，1（3）：26－28.

［7］張永清 ，徐凌川 ，丁麗萍.忍冬不同部位中綠原酸的含量測定［J］.中國中藥雜志，1996，21（4）：204－205.