奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑的處方工藝及質量研究

劉哲鵬，潘 風，施與群

［1.上海理工大學醫療器械與食品學院藥物制劑（設備與工藝）研究所，上海200093；2.上海美優制藥有限公司產品開發部，上海201423］

［本文編輯］蘭 芬

單用一種藥物治療艾滋病容易產生耐藥性，組合藥物治療（又稱雞尾酒療法）的療效明顯優于單藥治療，并且可以延緩耐藥性的產生。研究發現，與單藥治療相比，雞尾酒療法使艾滋病患者的死亡率降低逾80%，已成為標準的艾滋病治療方案［1］。雞尾酒療法同時使用3～4種藥物，針對艾滋病毒繁殖周期的不同環節，全面抑制或殺滅艾滋病毒。經雞尾酒療法治療后，部分患者體內的艾滋病毒可長期保持在檢測限以下?；陔u尾酒療法策略開發的抗艾滋病復方制劑一般包括逆轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑。目前國內已上市的艾滋病治療藥物多為單方或雙復方制劑，存在耐藥性、患者用藥依從性差等問題，臨床迫切需要療效確切、不易產生耐藥性的抗艾滋病復方制劑，但目前國內尚未生產采用雞尾酒療法的復方制劑。作者所在的課題組研發了由奈韋拉平、齊多夫定和拉米夫定組成的抗艾滋病復方片劑，這3種藥物均為WHO推薦的艾滋病組合治療藥物［2－4］。由于復方片劑的3種主藥理化性質各不相同，因此工藝開發難度較大，特別是藥物溶出不合格、有關物質來源復雜且含量超標、藥物含量均勻度不合格等問題，均會影響產品質量［5，6］。本研究對奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑的處方工藝進行篩選、優化，得到最優處方，并考察了樣品的穩定性，最終確立了可以進行生產的處方工藝條件。本研究為國內企業生產該藥提供了部分依據。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Dionex P680型HPLC儀（美國戴安公司）；GL－5型干法制粒機（浙江明天機械有限公司）；RCZ－6CZ型藥物溶出度儀、LB－2D智能崩解實時測定儀、YPJ－200B片劑硬度計（上海黃海藥檢儀器有限公司）；FT－2000片劑脆碎度檢查儀（天大天發科技有限公司）；低溫光照儀（藥物制劑國家工程研究中心）；GSP－9050MBE型隔水式恒溫培養箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；BPS－250C恒溫恒濕箱（上海一恒科技有限公司）；Welchrom－C18色譜柱（月旭材料科技有限公司）；BS 224S萬分之一電子分析天平（德國Satorious公司）。

1.2 藥品和試劑 奈韋拉平原料藥（含量99.7%，批號C5021－10－027，浙江華海藥業股份有限公司）；齊多夫定原料藥（含量99.6%，批號1103001，上?，F代制藥股份有限公司）；拉米夫定原料藥（含量99.6%，批號LZ01100601，浙江永寧藥業股份有限公司）。奈韋拉平對照品（批號100641－200401）、齊多夫定對照品（批號100672－200401，中國食品藥品檢定研究院）；拉米夫定對照品（含量99.7%，批號1356836，美國藥典委員會提供）。微晶纖維素（德國瑞登梅爾公司）；乳糖（德國美劑樂集團）；預膠化淀粉（Starch 1500，上?？房蛋录夹g有限公司）；羧甲基淀粉鈉（永日化學工業股份有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮（PVP－K30，美國國際特品公司）；交聯聚維酮（PVPP，德國BASF公司）；交聯羧甲基纖維素鈉（安徽山河藥用輔料有限公司）；甲基纖維素（浙江海申化工有限公司）；微粉硅膠（上海昌為醫藥輔料技術有限公司）；硬脂酸鎂（海鹽六和淀粉化工有限公司）；聚乙二醇（PEG）6000（上海市高南化工廠）。乙酸鈉、冰乙酸、氫氧化鈉等其他試劑均為分析純（上海國藥集團化學試劑有限公司）。奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑［每片含奈韋拉平、齊多夫定、拉米夫定分別為200、300、150mg，批號111101、111102、111103，上海理工大學醫療器械與食品學院藥物制劑（設備與工藝）研究所自制］。

2 方法和結果

2.1 溶液的配制（1）試劑溶液 pH 1鹽酸溶液：取濃鹽酸9ml，加水稀釋至1000ml，即得。pH 4.5乙酸鹽緩沖液：取乙酸鈉2.99g、冰乙酸1.6ml，加水稀釋至1000ml，即得。pH 6.8磷酸鹽緩沖液：取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，0.2mol／L氫氧化鈉溶液118ml，加水稀釋至1000ml，即得。流動相A：0.05mol／L乙酸銨溶液［用乙酸調節pH值（3.0±0.1）］與甲醇按95∶5比例配制即得。（2）藥物對照品溶液 精密稱取奈韋拉平對照品50.0mg、齊多夫定對照品75.0mg、拉米夫定對照品37.5mg，置100ml容量瓶中，加入20ml甲醇和60ml流動相A，超聲溶解，放冷至室溫，用流動相A稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置25ml容量瓶中，用流動相A稀釋至刻度，得到對照品溶液。（3）樣品溶液 取奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑粉末適量（約含奈韋拉平50mg、齊多夫定75mg、拉米夫定37.5mg），置100ml容量瓶中，余同（2）藥物對照品溶液操作。過濾，取續濾液10ml，置25ml容量瓶中，用流動相A稀釋至刻度，作為樣品溶液。制備不含3種主藥的片劑作為陰性對照樣品，同法制備得到陰性對照樣品溶液。（4）用于有關物質含量測定的供試品溶液 將復方片劑5片磨成細粉，取細粉約100mg（相當于含奈韋拉平26mg、齊多夫定39mg、拉米夫定19.5mg），置50ml容量瓶中，加5ml甲醇和適量流動相A，強力振搖2min，超聲5min，放冷，再用流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，得到用于有關物質含量測定的供試品溶液。（5）用于有關物質含量測定的對照品溶液 精密量取1ml用于有關物質含量測定的供試品溶液，置100ml容量瓶中，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，得到用于有關物質含量測定的對照品溶液。

2.2 含量測定及有關物質檢查（1）色譜條件：Welchrom－C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；采用梯度洗脫，流動相A按2.1項（1）下方法配制，流動相 B為甲醇，0～15min，A 相100%，15～65min，A 相 100% →60%，65～70min，A 相60%→0%，70～75min，A 相0%→100%，75～80min，A 相100%。流速1.0ml／min；檢測波長277nm；進樣量20μl。（2）系統適應性實驗：取2.1項的陰性對照樣品溶液、藥物對照品溶液和樣品溶液分別進樣測定，得到色譜圖見圖1。理論塔板數按奈韋拉平、齊多夫定、拉米夫定峰計均≥2000，主峰與相鄰雜質峰的分離度＞1.5。該色譜條件下，片劑中各輔料對3種主藥檢測無干擾，峰形良好，拉米夫定、齊多夫定、奈韋拉平保留時間分別約為14、34、48min。（3）含量測定方法考察：奈韋拉平濃度在57.2～472.8μg／ml、齊多夫定濃度在101.2～586.3μg／ml、拉米夫定濃度在86.5～397.4μg／ml范圍內與峰面積呈良好線性關系，日內和日間RSD均＜0.5%，相對回收率為97.3%～102.2%（見表1）。（4）藥物含量測定：分別量取2.1項的樣品溶液和對照品溶液20μl，按上述色譜條件進樣測定，用外標法計算奈韋拉平、齊多夫定和拉米夫定的含量。（5）有關物質含量測定：分別量取2.1項（4）、（5）用于有關物質含量測定的供試品溶液和對照品溶液20μl，按上述色譜條件進樣測定。測量供試品溶液色譜圖中雜質峰峰面積之和（扣除系統溶劑峰和輔料峰），將其與對照品溶液峰面積比較，采用主成分自身對照法計算得到有關物質含量。

圖1 奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑的HPLC譜圖Figure 1 HPLC photograms of compound nevirapine－zidovudine－lamivudine tablets

表1 含量測定方法學考察結果Table 1 The results of methodology investigation of content determination

2.3 溶出度測定 取復方片劑6份，按《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅩC第二法檢測藥片在不同溶出介質中的溶出曲線。分別以1000ml的pH 1鹽酸溶液、水、pH 4.5乙酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質，轉速75r／min，分別于0、5、10、15、30、45min取溶出液10ml，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液20μl，按2.2項色譜條件進樣測定。取奈韋拉平對照品20.0mg、齊多夫定對照品30.0mg、拉米夫定對照品15.0mg，置100ml容量瓶中，加相應的溶出介質適量，強力振搖2min，超聲5min，放冷，再用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，同法濾過，測定峰面積。按外標法以峰面積計算各取樣時間點奈韋拉平、齊多夫定、拉米夫定的溶出量，繪制溶出曲線。

2.4 休止角和崩解時限測定 按文獻［7］的方法測定壓片所用粉末的休止角，以評價流動性。按《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅩA的方法，取復方片劑6片分別置吊籃的玻璃管中，啟動崩解儀，測定片劑的崩解時限。

2.5 脆碎度和硬度測定 按《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅩG的方法，取復方片劑10片，精密稱重后置于脆碎度檢查儀圓筒中，轉動100次。取出，除去粉末，精密稱重，根據減失重量計算片劑的脆碎度。用硬度計測定片劑的硬度。

2.6 復方片劑的制備

2.6.1 根據影響因素實驗篩選輔料 取奈韋拉平、齊多夫定、拉米夫定原料藥，分別與微晶纖維素、乳糖、預膠化淀粉、甲基纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚維酮、PVP－K30、硬脂酸鎂、微粉硅膠、PEG 6000等輔料兩兩混勻，將粉末直接壓制成片后分別放置在60℃隔水式恒溫培養箱、低溫光照儀和內置有飽和硝酸鉀溶液的干燥器內進行高溫（60℃）、強光照射（光照強度為4500lx）和高濕（25℃，相對濕度90%）影響因素實驗。分別于0、5、10d取樣，按2.1項（5）的主成分自身對照法測定有關物質含量的變化，結果見表2。另取奈韋拉平、齊多夫定、拉米夫定原料藥，按1∶1∶1混勻，將粉末直接壓制成片劑，進行高溫、高濕和強光照射影響因素實驗以測定原料藥的相容性。

影響因素實驗發現，齊多夫定與各輔料在強光照射下，以及與微晶纖維素、交聯聚維酮在高濕條件下有關物質含量上升較快。拉米夫定與PVP－K30、交聯聚維酮在高溫、高濕條件下有關物質含量上升較快。因此初步確定制劑工藝應在避光條件下進行，填充劑避免使用微晶纖維素，黏合劑避免使用PVP－K30，崩解劑避免使用交聯聚維酮。確定復方片劑的填充劑使用乳糖和預膠化淀粉，黏合劑使用甲基纖維素，崩解劑使用羧甲基淀粉鈉和交聯羧甲基纖維素鈉，潤滑劑使用硬脂酸鎂、微粉硅膠和PEG 6000。

2.6.2 片劑的制備及性質考察 將奈韋拉平、齊多夫定、拉米夫定原料藥和輔料分別過80目篩，按表3中的處方配比混合均勻。用干法制粒機制粒，進料轉速12Hz，滾輪轉速14Hz，主輪壓力14kPa，側封壓力14kPa，顆粒經20目篩網整粒后壓片，即得白色的復方片劑。在制備顆粒和壓片過程中拉上窗簾，關閉室內日光燈，制片的環境相對濕度控制在≤60%。測定各處方組成制備的顆粒的休止角，片劑的硬度、脆碎度、崩解時限、有關物質及藥物含量，結果見表4。測定不同處方組成的片劑在不同溶出介質中的溶出曲線，見圖2。

表2 不同輔料對影響因素實驗中有關物質含量的影響Table 2 Effects of various excipients on contents of related substances in influencing factor tests（%）

表3 奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑的處方設計Table 3 Formula design of compound nevirapine－zidovudine－lamivudine tablets

由表4可見，各處方組成的顆粒流動性均較好，片劑崩解時限≤15min，硬度、脆碎度及有關物質含量等質量指標較好。但是由圖2可見，不同處方組成的片劑在不同溶出介質中的溶出曲線有較大差異。處方5和6中的藥物在各溶出介質中溶出度均較好，30min內各主藥溶出度＞80%。相比較而言，按處方6制備的片劑硬度和脆碎度綜合評價較好，因此確定以處方6作為最優處方。

表4 不同處方組成片劑的性質考察Table 4 Properties of tablets with different formulae

圖2 不同處方制備的奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑在不同溶出介質中的溶出曲線Figure 2 Dissolution curves of compound nevirapine－zidovudine－lamivudine tablets prepared based on different formulae in different dissolvants

2.7 片劑的試制及穩定性實驗結果 按處方6和2.6.2項方法制備奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑3批，進行影響因素實驗，結果見表5。片劑經鋁塑包裝后，進行加速實驗考察［溫度（40±2）℃，相對濕度75%］。結果發現，3批樣品經過6個月的加速實驗，其性狀、藥物含量、有關物質含量等質量指標未見顯著變化，因此確定處方6制備的片劑各項指標合格，穩定性良好。

表5 按處方6制備的片劑的影響因素實驗結果Table 6 Results of influencing factor tests of tablets prepared based on formula 6（%）

3 討 論

篩選片劑的處方組成，首先應根據原輔料的相容性研究結果選擇適宜的輔料。各輔料的配比和用量除了與顆粒流動性、片劑的硬度、脆碎度、崩解時限等質量指標緊密聯系之外，還影響藥物在溶出介質中的溶出度。在處方篩選過程中，比較藥物在多種溶出介質中的溶出曲線是非常重要的考察項目。對于溶解度受pH值影響大、低溶解性的藥物，處方組成對藥物的溶出度影響較大。奈韋拉平屬于低溶解性藥物，不同處方組成片劑中的奈韋拉平溶出度差異較大。PEG 6000在處方中既作潤滑劑，又因其親水性而加快水分對片劑的濕潤，可以顯著增加奈韋拉平的溶出度。復方片劑的成分比較復雜，作者在篩選處方前考察了原料藥與輔料在高濕、高溫、強光照射等條件下的穩定性，從而選擇了合適的輔料，采用干法制粒技術，制備了質量穩定的奈韋拉平／齊多夫定／拉米夫定復方片劑，值得進一步開發。

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