尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的制備工藝研究

牛江秀+++楊雪

[摘要] 目的 探討制備尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的優良工藝。 方法 采用乳化-溶劑蒸發法制備尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束，考察影響尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束包封率的主要因素，即有機溶劑的種類、尼莫地平溶液滴加速率、有機相與水相的體積比以及尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比，并在此基礎上采用正交設計優化尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的制備工藝。 結果 尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的制備最優處方為尼莫地平滴加速率為0.2 ml/min，有機相與水相的體積比為1∶5，尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比為1∶3。 結論 通過正交試驗，能夠獲得尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的最佳制備工藝。

[關鍵詞] 乳化-溶劑蒸發法；尼莫地平；包封率；正交試驗

[中圖分類號] R94 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）01（a）-0004-04

尼莫地平是臨床上廣泛應用的一種鈣離子拮抗劑，脂溶性高，容易透過血-腦脊液屏障，可與中樞神經的特異性受體結合，通過降低神經元細胞中鈣離子的濃度而改善腦部血液循環，增加缺血缺氧細胞的血液供應，對多種腦血管功能失調具有治療作用[1-2]。目前，臨床上常用的尼莫地平制劑類型主要有普通片劑、膠囊劑、緩釋片和注射劑等，但口服尼莫地平制劑有較嚴重的肝臟首關效應，生物利用度較低，且在血漿中藥物的濃度迅速降低，半衰期短[3-4]。由于該藥物不溶于水，所應用的注射液均含有較高濃度的乙醇，以達到增溶的目的[5]，而且，注射劑在應用時需要與葡萄糖或生理鹽水混合后靜脈滴注，應用非常不方便。由于尼莫地平必須以1.0～2.0 mg/h的速度緩慢靜脈滴注，滴注10 mg尼莫地平所需時間最少5 h，而文獻報道尼莫地平注射劑在與葡萄糖或生理鹽水混合靜脈滴注的過程中易析出結晶[6-7]。此外，長期應用含有較高濃度乙醇的制劑會對患者的血管產生刺激作用[8]，因而將不溶于水的尼莫地平制成納米膠束，既可提高尼群地平的溶解度，又能避免有機溶劑如乙醇等的應用，安全地進行靜脈注射。

泊洛沙姆188是聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯（PEO-PPO-PEO）泊洛沙姆188。由于泊洛沙姆188的物理性質溫和、化學性質穩定的特點，其不僅在栓劑、乳劑、片劑和凝膠劑等一些傳統的劑型中有著廣泛的應用，還可以形成膠束增加難溶性藥物的溶解度，增加此類藥物的穩定性，控制此類藥物的釋放速度，并且還具有約束外排泵的外排作用，促進機體對藥物的吸收[9-10]。此外，泊洛沙姆188對于治療血細胞凝聚引起的血管阻塞有一定作用[11]。研究表明，泊洛沙姆188在藥物穿越血-腦脊液屏障的過程中亦起著重要的作用，它可以通過不同的作用機制使藥物靶向入腦，增加藥物在機體腦內的生物利用度，為藥物能夠腦部靶向提供了新的思路和策略[12]。

1 儀器與試藥

電子分析天平FA104B（北京市北分瑞利分析儀器制造廠）；集熱式恒溫磁力攪拌器DF-101D（上海市博迅醫療設備制造廠）；電熱鼓風干燥箱GZX-9030 MBE（鞏義予華儀器制造廠）；紫外可見分光光度計UV-2100（上海市越平科學儀器制造廠）。尼莫地平（陜西西岳制藥公司）；泊洛沙姆188（陜西西岳制藥公司）；無水乙醇（分析純、宿州化學試劑公司）；氯仿（分析純、西隴化工股份公司）；乙醚（分析純、上海市中試化工公司揚州市滬寶化學試劑有限公司）；丙酮（分析純、西隴化工股份公司）。

2 方法與結果

2.1 尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的制備

采用乳化-溶劑蒸發法制備尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束[13-14]，分別將尼莫地平和泊洛沙姆188溶于有機溶劑和水中，在磁力攪拌下，將尼莫地平溶液逐滴加入泊洛沙姆188水溶液中，聚合物膠束形成后，減壓蒸發除去有機溶劑，得到含有藥物的膠束。

2.2 包封率的測定

依據尼莫地平不溶于水的特性和納米脂質體粒徑微小等特點，采用過濾法測定其包封率[15]。用紫外可見分光光度法測定待測液在237 nm處的紫外吸光度，代入尼莫地平的標準曲線，計算包封率。包封率（%）=（尼莫地平投藥量-游離的尼莫地平量）/尼莫地平投藥量×100%。

2.3 尼莫地平處方的單因素試驗

2.3.1 有機溶劑種類的考察 固定尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比為1∶5，有機相與水相的體積比為1∶3，分別用氯仿、無水乙醇、乙醚及丙酮作為有機相溶解尼莫地平，考察有機溶劑對包封率的影響。結果顯示，采用三氯甲烷作為有機溶劑時，包封率最高（圖1）。

圖1 有機溶劑種類對包封率的影響

2.3.2 尼莫地平溶液滴加速率的考察 固定尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比為1∶5，采用三氯甲烷作為有機相溶解尼莫地平，有機相與水相的體積比為1∶3，尼莫地平溶液的滴加速率分別為1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 ml/min，考察滴加速率對包封率的影響。結果顯示，隨著尼莫地平溶液滴加速率的減小，包封率有增加的趨勢，當滴加速率減小至0.6時，繼續減小滴加速率，包封率變化不大（圖2）。

圖2 尼莫地平溶液滴加速率對包封率的影響

2.3.3 有機相與水相體積比的考察 固定尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比為1∶5，選用三氯甲烷作為有機溶劑，尼莫地平溶液的滴加速率為0.6 ml/min，有機相與水相的體積比分別為1∶1、1∶3、1∶5、1∶7和1∶9，考察有機相與水相的體積比對包封率的影響。結果顯示，當有機相與水相的體積比由1∶1逐漸減小時，尼莫地平的包封率逐漸增加，當有機相與水相的體積比減小到一定值時，尼莫地平的包封率達到最大，此后減小有機相與水相的體積比，尼莫地平的包封率逐漸降低（圖3）。

圖3 有機相與水相的體積比對包封率的影響

2.3.4 尼莫地平與泊洛沙姆188質量比的考察 固定有機相與水相的體積比為1∶5，選用三氯甲烷作為有機溶劑，尼莫地平溶液的滴加速率為0.6 ml/min，尼莫地平與泊洛沙姆188的比例分別為1∶1、1∶3、1∶5、1∶7和1∶9，考察尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比對包封率的影響。結果顯示，尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比對包封率的影響較為明顯，隨著尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比的逐漸增加，尼莫地平的包封率呈逐漸增大的趨勢，當尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比達到一定值時，尼莫地平的包封率達到最大，此后不再隨著尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比的增加而增加，而是逐漸減?。▓D4）。

圖4 尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比對包封率的影響

2.4 正交試驗設計優化處方

2.4.1 正交試驗設計優化處方 以三氯甲烷為有機相，選用尼莫地平溶液滴加速率（A）、有機相與水相的體積比（B）、尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比（C）3個因素，每個因素3個水平（表1），以尼莫地平的包封率為考察指標，按L9（34）正交表設計方案進行實驗（表2），優化處方。

采用乳化-溶劑蒸發法制備尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束。在3因素3水平的L9（34）正交實驗中，以包封率為評價指標，確定尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的最優制備處方。由表2可知，影響尼莫地平包封率大小的因素依次為：有機溶劑種類>有機相和水相的體積比>尼莫地平和泊洛沙姆188的質量比。其中有機溶劑的種類對尼莫地平的包封率的影響最顯著。優化處方為A3B2C1，即尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束的制備最優處方為尼莫地平滴加速率為0.2 ml/min，有機相與水相的體積比為1∶5，尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比為1∶3。

2.4.2 優化處方工藝的驗證試驗 為進一步考察正交優化試驗所得最佳處方的合理性和穩定性，按最優處方進行3次試驗，得到膠束的包封率分別為85.7%、84.9%和85.3%。因此，三次試驗測得的尼莫地平的包封率相差不大，雖然結果在一定的范圍內有所波動，但仍趨于穩定，結果的輕微波動可能是試驗的偶然誤差造成的，并不影響試驗的準確性，即正交試驗所得的最佳處方是合理的，測得的包封率大小也是穩定的。

3 討論

本研究以包封率為考察指標，分別考察了氯仿、無水乙醇、丙酮、乙醚對尼莫地平泊洛沙姆188納米膠束包封率的影響。研究發現選用丙酮、乙醚和無水乙醇作為有機溶劑時，由于溶劑的親水性較強，疏水性藥物難以溶解在其中，導致藥物的析出而使膠束包封率降低。改變有機溶劑的性質，采用較強疏水性的有機溶劑即三氯甲烷，疏水性藥物尼群地平在其中的溶解度較大，可以促進藥物向膠束的疏水性芯核“微型藥物庫”中擴散，因此采用疏水性溶劑三氯甲烷時膠束的包封率最高。

在制備的過程中，隨著尼莫地平溶液滴加速率的增加，包封率下降，可能是因為較快的滴加速率使尼莫地平來不及進入膠束疏水性內核而沉淀析出，隨著滴加速率的減小，尼莫地平有足夠的時間被包裹入膠束，因而包封率增加。

隨著有機相和水相比例的增加，尼莫地平的包封率呈先增加后減小的趨勢，可能是因為隨著水相的增加，泊洛沙姆188在水中的濃度逐漸增加，所形成的疏水核數量也隨之增加，對藥物的包封有促進作用，但當水相的體積過大時，因疏水性藥物尼群地平在水中的濃度降低而析出，反而使膠束的包封有所降低。

隨著尼莫地平與泊洛沙姆188的質量比的逐漸增加，尼莫地平的包封率呈先增加后減小的趨勢。開始階段隨著尼莫地平量的增加，包封率上升，可能是因為泊洛沙姆188膠束疏水性內核對尼莫地平的包裹未達飽和；而隨后包封率的下降，原因可能是由于尼莫地平在膠束疏水性內核的包封有一定的限度，當達到飽和時，多余的尼莫地平由于具有高度的疏水性而形成大的沉淀析出，由于這些沉淀的聚集速度明顯大于尼莫地平被泊洛沙姆188包裹的速度，繼而產生黃色藥物沉淀，因此導致包封率顯著降低。

本研究采用乳化-溶劑蒸發法制備膠束，磁力攪拌器的轉速也會對實驗結果造成影響，攪拌速度過慢或者過快，都會使尼莫地平的包封率降低。

[參考文獻]

[1] Zu Y，Li N，Zhao X，et al.In vitro dissolution enhancement of micronized l-nimodipine by antisolvent re-crystallization from its crystal form H[J].Int J Pharm，2014，464（1）：1-9.

[2] 何宗澤，黃光富.尼莫地平治療蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣研究進展[J].實用醫院臨床雜志，2010，7（2）：139-141.

[3] 陸紀宏，李旭東，張小平，等.尼莫地平脂質體的制備與理化性質研究[J].醫藥導報，2009，28（6）：771-774.

[4] 劉麗嵐，馬守棟，梁東升，等.尼莫地平脂肪乳制備條件的優選[J].實用醫藥雜志，2009，26（12）：53-54.

[5] 張桂芳，朱家壁，莊妍，等.尼莫地平納米脂質體制備工藝處方優化研究[J].中國藥科大學學報，2003，34（1）：25-28.

[6] 趙若威，王 強，劉立恒，等.尼莫地平納米脂質體制備工藝及處方優化研究[J].黑龍江醫學，2006，30（11）：817-821.

[7] 張慧英.尼莫地平輸液的配伍實驗[J].中國藥學雜志，1998，33（7）：415-417.

[8] 徐雄波，潘育方，黃志軍，等.鼻腔給藥尼莫地平納米乳的制備及腦組織靶向性初步評價[J].中國藥學雜志，2012， 47（8）：594-599.

[9] 王猛，張鈞壽，周建平.注射用輔料泊洛沙姆188[J].藥學與臨床研究，2007，15（1）：10-13.

[10] 吳剛，賴潤龍，張填皮.泊洛沙姆188的研究進展[J].中國現代醫生，2008，46（12）：48-49.

[11] Gibbs WJ，Hagemann TM.Purified poloxamer 188 for sickle cell vaso-occlusive crisis[J].Ann Pharmacother，2004， 38（2）：320-324.

[12] 張偉，方曉玲.泊洛沙姆在藥物穿越血腦屏障中的重要作用[J].藥學學報，2008，43（9）：890-897.

[13] Yu J，Xie X，Zheng M，et al.Fabrication and characterization of nuclear localization signal-conjugated glycol chitosan micelles for improving the nuclear delivery of doxorubicin[J].Int J Nanomedicine，2012，7（2）：5079-5090.

[14] Yu J，Xie X，Wu J，et al.Folic acid conjugated glycol chitosan micelles for targeted delivery of doxorubicin：preparation and preliminary evaluation in vitro[J].J Biomater Sci Polym Ed，2013，24（5）：606-620.

[15] 鄭瑩，朱家壁，王月玲，等.尼莫地平納米脂質體包封率測定方法的研究[J].江蘇藥學與臨床研究，2004，12（3）：1-4.

（收稿日期：2014-09-04 本文編輯：郭靜娟）