HPLC法測定舒胸口腔崩解片中3種皂苷的含量

羅 堃，顏 紅，夏新華，雷志丹，彭買姣，焦筱淇

(湖南中醫藥大學 藥學院, 湖南 長沙 410208)

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HPLC法測定舒胸口腔崩解片中3種皂苷的含量

羅 堃，顏 紅，夏新華*，雷志丹，彭買姣，焦筱淇

(湖南中醫藥大學 藥學院, 湖南 長沙 410208)

目的：建立舒胸口腔崩解片中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，Kromasil-C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5μm)，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，流速1.0mL·min-1，柱溫30℃，檢測波長203nm。結果：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和Rb1的線性范圍分別為0.41～4.08μg(r=0.9997)、0.80～8.04μg(r=0.9993)、0.82～8.20μg(r=0.9994)。該方法平均回收率三七皂苷R1為98.97%(RSD=2.25%，n=6)、人參皂苷Rg1為101.98%(RSD=2.55%，n=6)、人參皂苷Rb1為98.71%(RSD=2.91%，n=6)。結論：該法簡便、準確、重現性好，可用于舒胸口腔崩解片中3種皂苷的含量測定。

舒胸口腔崩解片；三七皂苷R1；人參皂苷Rb1；人參皂苷Rg1；含量測定

本制劑來源于《中國藥典》2005年版一部收載方“舒胸片”，原制劑是由川芎、紅花和三七三味中藥組方制備而成，臨床主要用于治療冠心病、心絞痛、心率失常。本研究應用大孔樹脂吸附分離技術，得到三七提取物、紅花提取物、川芎提取物后，重新組方，將原制劑改劑型開發為口腔崩解片。三七提取物中含有多種化學成分，其中三七總皂苷是其主要活性成分。研究證明，三七總皂苷具有多方面的生物活性，主要表現在擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量、改善心肌代謝、抗自由基、抗凝、鈣拮抗等方面，其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1是其最具代表性的特征化合物[1]。為嚴格控制本制劑產品質量，本文采用高效液相色譜法，以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1為檢測指標，對其含量進行測定，為該制劑的質量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1200 高效液相色譜儀(德國Agilent公司)，G1314B紫外檢測器，安捷倫化學工作站；Kromasil100-C18色譜柱(4.6 mm×250mm，5μm)；AR11401C型電子天平(奧豪斯國際貿易上海有限公司)；SB1200型超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 材料

三七皂苷R1對照品(批號：110745-200617，供含量測定用)；人參皂苷Rb1對照品(批號：110704-200921，供含量測定用)；人參皂苷Rg1對照品(批號：110703-200726)；以上對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供。舒胸口腔崩解片(自制)。乙腈為色譜純，實驗用水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil100-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長[2]：203nm；流動相：以乙腈(A)-水(B)為流動相進行梯度洗脫。梯度洗脫見表1。

表1 梯度洗脫 (%)

2.2 混合對照品溶液制備

精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，置于同一量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，搖勻，制成1mL含三七皂苷R10.204mg、含人參皂苷Rg10.402mg、人參皂苷Rb10.410mg的混合對照品溶液，0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.3 供試品溶液制備[3-4]

取本品10片，研細，稱取細粉約0.2g，精密稱定，用水飽和的正丁醇30mL，超聲提取2次(45min/次)，合并正丁醇提取液，蒸去溶劑，殘渣加甲醇溶解后，置25mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液制備

按處方組成和工藝要求制成不含三七提取物的舒胸口腔崩解片(陰性樣品)，再按“2.3”項下方法制成陰性對照溶液，即得。

2.5 色譜分離效果考察

按照上述色譜條件，分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀，測定，并記錄色譜圖。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上有一相同的色譜峰，且各標準品色譜峰與其它色譜峰之間達到基線分離(R>1.5)，而陰性對照液未見干擾。色譜見圖1。

2.6 線性關系考察

按照上述色譜條件，精密吸取“2.2”項下的混合對照品2、4、6、10、14、20μL，注入高效液相色譜儀中，測定其峰面積積分值，以進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積積分值Y為縱坐標，繪制標準曲線。結果見表2。

表2 3種組分線性關系測定結果

2.7 精密度試驗

精密吸取“2.2”項下的混合對照品溶液10μL，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定其峰面積積分值，計算各成分峰面積積分值的相對標準偏差，三七皂苷R1RSD=1.46%(n=6),人參皂苷Rg1RSD=1.66%(n=6)，人參皂苷Rb1RSD=1.14%(n=6)。結果表明，儀器精密度較好。

2.8 穩定性試驗

分別精密吸取同一供試品溶液10μL，在上述色譜條件下，于0、2、4、8、12、24h進樣，測定其峰面積積分值，計算各成分峰面積積分值的相對標準偏差，三七皂苷R1RSD=2.11%(n=6)，人參皂苷Rg1RSD=2.04%(n=6)，人參皂苷Rb1RSD=1.71%(n=6)。結果表明，供試品溶液在24h內基本穩定。

2.9 重復性試驗

取同一批號樣品(批號：20100816)5片，共6份，按上述方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下，測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量，計算平均含量。結果三七皂苷R1平均含量為1.99mg/片，RSD=1.23%(n=6)；人參皂苷Rg1平均含量為7.85mg/片，RSD=1.42%(n=6)；人參皂苷Rb1平均含量為7.89mg/片，RSD=1.01%(n=6)。結果表明，樣品測定方法重復性較好。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量的舒胸口腔崩解片樣品(批號：20100825，其中三七皂苷R1含量為1.17%、人參皂苷Rg1含量為4.62%、人參皂苷Rb1含量為4.64%)約0.2g，精密稱定，置于25mL量瓶中，共6份，分別精密加入1mL含三七皂苷R11.27mg、人參皂苷Rg13.43mg、人參皂苷Rb13.52mg的混合對照品溶液2mL，然后按上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，測定含量，計算回收率：三七皂苷R1平均回收率為98.97%，RSD=2.25%；人參皂苷Rg1平均回收率為101.98%，RSD=2.55%；人參皂苷Rb1平均回收率為98.71%，RSD=1.91%。試驗結果見表3。

2.11 樣品含量測定

按上述含量測定方法，測定3批舒胸口腔崩解片中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量，每批平行測定2份，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1平均含量分別為(1.98± 0.04)mg/片、(7.83± 0.04)mg/片、(7.87± 0.06)mg/片。

3 結語

三七總皂苷是從五加科植物三七提取物中的主要有效部位，具有活血祛瘀、通脈活絡、改善血液循環的功效，是許多心腦血管藥的主要原料。它含有三七皂苷R1、R2、R3、R4、R5、R6，人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh等20多種皂苷成分，其中以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量最高[5]，常作為其制劑的質量控制指標。文獻報道[6]的三七單體皂苷的方法有比色法、薄層掃描法、高效液相色譜法等，比色法專屬性差，不能反映內在質量，薄層色譜掃描法的影響因素較多，顯色后掃描結果不穩定。本文采用高效液相色譜法，通過色譜適應性試驗和方法學考察，對舒胸口腔崩解片中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1進行了含量測定，結果表明，本法操作簡便，準確可靠，可為該制劑的質量控制提供參考。

圖1 舒胸口腔崩解片中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1的HPLC色譜

表3 加樣回收率試驗結果

[1] 李東,黃羅生,平其能.三七總皂苷純化和脫色工藝研究[J].海峽藥學,2008,20(1)：12-14.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社,2010.

[3] 張憲臣,王淑敏,陳光,等.人參總皂苷超聲提取工藝研究[J].現代中藥研究與實踐,2005,19(6)：55-57.

[4] 孔燕君,洪美鳳.紫外分光光度法測定人參及三七中總皂苷含量[J].中國現代應用藥學,2000，17(1)：51-52.

[5] 蘇靜,朱衛泉.RP-HPLC梯度洗脫法測定血塞通片中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量[J].藥物分析雜志,2005,25(2)：212-214.

[6] 胡靜,張鐵軍,許浚. RP-HPLC法測定三七總皂苷中3種皂苷[J].中草藥,2006,37(2)：218-219.

(責任編輯：余 婷)

Determination of Notoginsenoside R1and Ginsenoside Rg1, Rb1in the Shuxiong Orally Disintegrating Tablets by HPLC

Luo Kun,Yan Hong, Xia Xinhua*,Lei Zhidan ,Peng Maijiao ,Jiao Xiaoqi

(Hunan University of Chinese Medicine,College of Pharmacy,Changsha 410208,China)

Objective:To establish a method for determining the content of Notoginsenoside R1and Ginsenoside Rg1, Rb1 in the Shuxiong Orally Disintegrating Tablets.Methods:The product was analyzed by HPLC.The Kromasil-C18column (4.6mm×250 mm,5μm) was used with a mobile phase of acetonitrile-water gradient elution , the flow rate was 1.0 mL·min-1,203nm as the decetion wavelength and column temperature was 30℃.Results:The linear rang of R1, Rg1, Rb1was 0.41～4.08μg(r=0.9997), 0.80～8.04μg(r=0.9993), 0.82～8.20μg(r=0.9994).The average recovery was 98.97%(RSD=2.25%, n=6), 101.98%(RSD=2.55%, n=6), 98.71%(RSD=2.91 %, n=6). Conclusion:The method is simple,accurate,and sensitive,and can be used for controlling the quality of Shuxiong Orally Disintegrating Tablets.

Shuxiong Orally Disintegrating Tablets；Notoginsenoside R1；Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Rb1；Quantitative Determination

2015-06-12

湖南省科技廳科研項目(2009031)

羅堃(1980-)，男，湖南中醫藥大學講師,研究方向為中藥制劑工藝及其質量標準。Email:23689818@qq.com

夏新華(1962-)，男，湖南中醫藥大學教授、博士生導師,研究方向為中藥制劑新技術與新劑型。E-mail:xiaxinhua001@163.com

R284.2

A

1673-2197(2015)21-0030-03

10.11954/ytctyy.201521013