沙門菌和志賀菌通用增菌液增菌效果實驗觀察

張仕忠 常曉濤

【中圖分類號】R-0 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2015）02-0363-01

在對食品生產經營單位或公共場所從業人員作傷寒、痢疾帶菌檢查， 對各類食品樣品作沙門、志賀菌檢測時， 由于沙門菌和志賀菌檢驗所用的增菌液不同， 即使是對同一份標本也只能分別增菌， 分別劃線分離， 使實驗室的工作量成倍增加， 同時由于兩者增菌時間不相同， （ 沙門菌前增菌 8～ 18 h，TTB、SC增菌18～24h 志賀菌厭氧16～ 20 h） ， 給實驗測定的工作安排帶來一定困難， 因此， 研究和選擇合適的可同時用作沙門、志賀菌增菌的通用增菌液， 對提高實驗室的工作效率具有重要的現實意義。選擇了市售的 2 個牌號的沙門、志賀菌增菌液與 SC 增菌液及 GN 增菌液分別進行了增菌效果的對比觀察， 現將結果報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 培養基 營養肉湯培養基、SC 增菌液、GN增菌液分別按國標法 [1] 配制； 沙門、志賀菌增菌液干粉培養基 ① 、 ② （ 以下簡稱通用增菌液 ① 、 ② ） ，分別由廣東環凱微生物試劑廠及杭州天和微生物試劑廠提供， 均按使用說明配制。

1.1.2 試驗菌株 傷寒沙門菌（ 50071） 、鼠傷寒沙門菌 （ 50013） 、痢疾志賀菌 2 型、福氏志賀菌 2a（ 51302） 、大腸埃希菌（ ATCC25922） 由江蘇省疾病預防控制中心微生物試劑廠提供。

1.2 方法

1.2.1 試驗菌液的制備 取上述試驗菌株的 24 h 肉湯培養物， 除大腸菌外， 分別按 10 倍遞增連續稀釋至第 8 管。

1.2.2 沙門菌增菌效果的測定 取上述不同稀釋度的傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌肉湯培養物各 0.1 ml加入 SC 增菌液及通用增菌液① 、 ②中， 同時取大腸埃希菌的 24 h 肉湯培養物在上述各管中各加入 0.1ml。經 36 ℃ 24 h 增菌培養后各取 1 環在 XLD 瓊脂上分離培養， 于 36℃18～ 24 h， 檢查傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌菌落的生長情況。

1.2.3志賀菌增菌效果有測定 取上述不同稀釋的痢疾志賀菌及福氏志賀菌的肉湯培養各 0.1 ml， 分別加入 GN 增菌液及通用增菌液① 、 ② 中， 同時取大腸埃希菌的 24 h 肉湯培養物在上述各管中各加入0.1 ml。GN 增菌液各管經 36℃培養 8 h， 通用增菌液① 、 ② 各管經 36 ℃培養 24 h， 取上述增菌液各 1環在 XLD 瓊脂上分離培養， 于 36 ℃ 18～ 24 h， 檢查痢疾志賀菌及福氏志賀菌菌落的生長情況。各項測定均按相同方法重復測定 5 次， 并計算出每皿檢出沙門菌或志賀菌的平均菌落形成單位。> 1～ 5 cfu/皿為“ +”； 6～ 10 cfu/ 皿為“ + + ”； 11～ 20 cfu/ 皿為“ + + + ”； > 21 cfu/ 皿為“ + + + + ”。10-6 稀釋度能分離到沙門菌或志賀菌者， 判定該增菌液符合要求[ 1] 。

2 結果

2.1 沙門菌的增菌效果 在大腸菌干擾下， 通用增菌液① 、 ②對傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌的增菌效果均可達到 10 - 6 以上，詳見表1、表2。

2.2 志賀菌的增菌效果 在大腸埃希菌干擾下， 通用增菌液 ① 、 ② 對痢疾志賀菌及福氏志賀菌的增菌效果， 分別達到 10-7 及 10 -6 ， 已達到或接近達到 GN增菌液的增菌效果， 詳見表 3、表 4。

3 討論

關于腸道致病菌的增菌， 國家標準檢驗方法及相關文獻中， 推薦以亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（ SC） 、緩沖蛋白胨水（ BPW） 、四硫磺酸鹽增菌液（ TTB） 等用于沙門菌的增菌， 以 志賀氏菌增菌肉湯—新生霉素用于志賀菌的增菌。由于沙門菌與志賀菌之間， 甚至在不同種類的沙門菌之間， 一般均不能通用， 從而給基層單位實驗室的腸道致病菌檢驗工作帶來一定的困難或不便。因此， 有必要開展對沙門、志賀菌通用增菌培養基的研究。本次實驗結果可看出， 通用增菌液 ① 及 ② 在大腸埃希氏菌干擾下對傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌的增菌效果可達到 10-6 以上，達到沙門菌增菌液的增菌效果； 通用增菌液 ① 、 ② 對痢疾志賀菌及福氏志賀菌的24 h 增菌效果已達到或接近GN 增菌液 8 h 增菌的效果。以通用增菌液取代沙門菌專用增菌液及志賀菌專用增菌液， 不僅使增菌管數量從原來每份標本的 2管減少至 1 管， 而且使劃線分離用的選擇性平皿也由原來的 2 塊減少至 1 塊， 增菌時間均為 24 h， 既節省了培養基的用量又降低了實驗人員的勞動強度，提高了實驗室的工作效率。其實用意義顯而易見。本次實驗僅選擇2 株沙門菌及 2 株志賀菌進行增菌效果觀察， 對其他沙門菌及志賀菌是否可取得同樣的增菌效果等， 尚有待于作進一步的實驗探討。

參考文獻：

[1] 中華人民共和國國家標準GB4789.4-2010食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗、中華人民共和國國家標準GB4789.5-2012食品安全國家標準食品微生物學檢驗志賀氏菌檢驗

[2] 何曉青主編. 衛生防疫細菌檢驗 [ M] . 北京： 新華出版社， 1989： 301- 318.