PARP-1抑制劑與ATR抑制劑藥物聯用在乳腺癌細胞中的作用

任晉旻劉美娜王希玲張迎佳

PARP-1抑制劑與ATR抑制劑藥物聯用在乳腺癌細胞中的作用

任晉旻1劉美娜2王希玲2張迎佳2

目的研究將PARP-1抑制劑和ATR抑制劑進行藥物聯用是否會提升藥物對乳腺癌細胞的作用和殺傷效果。方法使用PARP-1抑制劑ABT-888和AZD-2281，ATR抑制劑VE-821和AZ-20，通過MTT法檢測細胞活性并計算IC50。結果PARP-1抑制劑與ATR抑制劑藥物聯用有效的提升了藥物對乳腺癌細胞的殺傷效果。結論PARP-1抑制劑和ATR抑制劑的藥物聯用在乳腺癌治療中是一個非常有前景的研究方向。

PARP-1抑制劑；ATR抑制劑；乳腺癌細胞

聚腺苷酸二磷酸核糖轉移酶（PARP-1）是目前研究廣泛的一種癌癥治療靶點。PARP-1與ADP核糖形成一種多聚物有助于召集和組裝DNA修復蛋白參與DNA的修復［1］。抑制PARP-1的活性，可以對BRCA突變的乳腺癌細胞有殺傷效果［2］。ATR也是DNA修復的關鍵因子，與PARP-1之間的關聯性也有報道［3］。ATR通過磷酸化Chk1使細胞停滯在G2/M期，是在雙鏈DNA斷裂及其他DNA損傷修復中起到決定性作用的關鍵因子［4］，也是重要的癌癥治療的潛在靶點［5］。

圖1 AZD-2281聯合VE-821 或 AZ-20在MCF-7中孵化144 h

將PARP-1抑制劑與ATR抑制劑藥物連用對于癌癥治療有著非同尋常的意義和價值。本研究選取有效的PARP-1抑制劑ABT-888和AZD-2281，以及有效的ATR抑制劑VE-821和AZ-20，在非BRCA突變的乳腺癌細胞株MCF-7中進行藥物聯用，探討和分析這兩種抑制劑的藥物聯用對乳腺癌細胞的殺傷效果，對乳腺癌治療的實驗及臨床研究起到一定的指導意義。

1 材料與試劑

MCF-7，ATCC，HTB-22

ABT-888，selleck，S1060

AZD-2281，selleck，S1004

VE-821，selleck，S8007

AZ-20，selleck，S7050

MTT，Sigma，M2128

三聯液（10%SDS＋5%異丁醇＋10 mmol/L HCL）

2 實驗方法

MCF-7種入96孔板，加入PARP-1或ATR抑制劑孵育144 h后加入10 μl 5 mg/ml的MTT，孵育4 h，加100 μl三聯液后孵育過夜，使用FlexStation3在350 nm下檢測OD值，使用GraphPad計算絕對IC50。

3 實驗結果

通過三次重復試驗，測得在MCF-7細胞株中，ABT-888的IC50為 49.5 μM，AZD-2281的 IC50為 6.9 μM，VE-821的IC50為4.4 μM，AZ-20的IC50為0.37 μM。

AZD-2281與VE-821或AZ-20的藥物連用結果如圖1所示：在VE-821濃度為50，25、12.5、6.2、3.1、1.5 μM時AZD-2281的IC50小于0.31 μM，VE-821濃度為0.8、0.4 μM時AZD-2281的IC50分別為1.05 μM，2.15 μM。在AZD-2281濃度為20、10、5、2.5 μM時VE-821的IC50小于0.4 μM，AZD-2281濃度為1.25、0.62、0.31 μM時，VE-821的IC50分別為0.78 μM，1.52 μM，1.61 μM。

AZD-2281與AZ-20藥物聯用在MCF-7細胞中的作用結果如圖1所示：在AZ-20濃度為10、3.3、1.1、0.37 μM時AZD-2281的IC50小于0.3 μM，AZ-20濃度為AZ-20濃度為0.12、0.04、0.012、0.004 μM時AZD-2281的IC50分別為1.2 μM，3.9 μM，7.0 μM，8.2 μM。在AZD-2281濃度為20、10 μM時，AZ-20的IC50小于0.004 μM，AZD-2281濃度為5、2.5、1.2、0.62、0.3 μM時，AZ-20的IC50分別為0.014 μM，0.05 μM，0.14 μM，0.2 μM，0.25 μM。ABT-88與VE-821或AZ-20的藥物連用也有同樣的結果。

4 討論

在過去的幾年中，科學家們對PARP-1抑制劑和ATR抑制劑的探索和研究已經取得了十足的進步［6］。雖然PARP-1抑制劑類藥物在體外、體內實驗中有不錯的表現，但是到了臨床研究階段依舊面臨諸多問題［7-8］。本項研究將ATR抑制劑和PARP-1抑制劑在非BRCA突變的乳腺癌細胞株MCF-7中進行藥物聯用，實驗結果表明這兩種抑制劑的藥物聯用可以提升藥物對乳腺癌細胞的殺傷效果。雖然ATR抑制劑距臨床方面研究還需大量的工作，但本項研究的結果有助于解決PARP-1抑制劑在臨床中面臨的效果不明顯和BRCA突變患者少等問題，對未來的實驗和臨床研究起到一定的指導意義，或將是一個非常有前景的研究方向。

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Efficacy of PARP-1 Inhibitor Combination With ATR Inhibitor in Breast Cancer Cells

REN Jinmin1LIU Meina2WANG Xiling2ZHANG Yingjia21 School of Life Sciences of Fudan University，Shanghai 200433，China，2 Shanghai Chem Partner Co. Ltd.，Shanghai 201203，China

ObjectiveTo study the effect of PARP-1 inhibitor combination with ATR inhibitor in treatment of breast cancer cells.MethodsUsing PARP-1 inhibitor ABT-888 and AZD-2281，using ATR inhibitor VE-821 and AZ-20，detection the effect of cells activity by MTT assay and analysis the IC50.ResultsPARP-1 inhibitor combination with ATR inhibitor had significantly improved the effect in the breast cancer cells.ConclusionPARP-1 inhibitor combination with ATR inhibitor in breast cancer therapy is a promising research direction.

PARP-1 inhibitor，ATR inhibitor，Breast cancer cell

R97

B

1674-9316（2015）28-0092-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.28.070

1 200433 上海，復旦大學生命科學學院

2 201203 上海睿智化學研究有限公司

張迎佳，E-mail：yjzhang1@chempartner.cn