聚乙二醇400介導的多西他賽脂肪乳劑與多西他賽注射液的稀釋穩定性研究

·論著·

聚乙二醇400介導的多西他賽脂肪乳劑與多西他賽注射液的稀釋穩定性研究

張廣軍1，林玲2，陳麗娜1，高保安1,2，陳建明1,2(1.第二軍醫大學藥劑學教研室，上海 200433；2. 天士力帝益藥業有限公司，江蘇 淮安 223002)

[摘要]目的建立多西他賽的含量測定方法；考察自制的聚乙二醇(PEG)400介導的多西他賽脂肪乳劑與市售的多西他賽注射液稀釋液的穩定性。方法建立高效液相色譜法測定含量；在室溫條件下采用膜過濾法，以過濾液的含量、pH值以及過濾前的粒徑為指標，考察PEG400介導的多西他賽脂肪乳劑與市售的多西他賽注射液的稀釋液隨時間變化的穩定性。結果多西他賽在1～256 μg/ml的濃度范圍內線性關系良好，回歸方程：Y=21.199X+20.488，r=0.999 9；自制PEG400介導的多西他賽脂肪乳劑分散液，室溫下24 h內過濾液的含量、pH值以及過濾前的粒徑均未見明顯變化。觀察市售多西他賽注射液的生理鹽水稀釋液，2 h發現有藥物析出，過濾液含量明顯下降。結論自制PEG400介導的多西他賽脂肪乳劑的分散穩定性遠優于市售多西他賽注射液的生理鹽水稀釋液，大大提高了臨床用藥的安全性。

[關鍵詞]聚乙二醇400；多西他賽脂肪乳劑；多西他賽注射液；稀釋穩定性

[基金項目]上海市納米專項(12nm0501000)

[作者簡介]張廣軍，碩士研究生.E-mail:13818346927@163.com

[通訊作者]陳建明.研究方向：藥物新劑型與新技術.E-mail:yjcjm@163.com.

[中圖分類號]R944.1[文獻標志碼]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.02.006

[收稿日期]2013-11-26[修回日期]2014-03-16

Stability comparison between a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel and docetaxel injection saline dilutions

ZHANG Guangjun1,LIN Ling2,CHEN Lina1,GAO Baoan1,2，CHEN Jianming1,2(1. Department of Pharmaceutics, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; 2. Tasly pharmaceutical Co.,Ltd,Huai′an 223002, China)

Abstract[]ObjectiveTo establish HPLC method to detect docetaxel and compare the stability of a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel with docetaxel injection saline dilutions.MethodsHPLC method was established to detect docetaxel concentration. The stability of a novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel and docetaxel saline dilutions were investigated by drug concentration pH value and particle size using membranes filtration method.ResultsThe linear range of docetaxel was 1-256 μg/ml,regression equation was Y=21.199X+20.488,r=0.999 9. The drug concentration pH value and particle size of polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel was stable at room temperature in 24 hours. However the docetaxel injection saline dilutions was discovered drug precipitation in about two hours after preparation and the drug concentration was significant decreased in the filtration of docetaxel injection saline dilutions.ConclusionThe novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion of docetaxel was a new stable docetaxel formulation and significantly increased the safety in clinical.

[Key words]polyethylene glycol；docetaxel；lipid nanoemulsion；saline dilutions；stability

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1100型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；TH-3560高壓滅菌鍋(鑫科企業有限公司)；BS124S型電子分析天平(德國Sartorius公司)；0.45 μm濾膜(美國Millipore公司)；NANO-S型馬爾文粒徑檢測儀(英國馬爾文儀器公司)；PB-10型pH計(德國Sartorius公司)。

1.2主要材料和試劑多西他賽原料藥(重慶美聯制藥公司，純度≥98%，批號:G-1005002)；多西他賽對照品(中國藥品生物制品檢定所，純度≥99.9%)；PEG400(中國醫藥集團上?；瘜W試劑公司)；多西他賽注射液(齊魯制藥有限公司，批號:809020EW)；20%中/長鏈脂肪乳注射液(廣州百特僑光醫療用品有限公司，批號:GM1101002)；甲醇，乙腈(德國默克公司,色譜純)；生理鹽水(山東辰欣藥業股份有限公司，批號:1208260591)。其他所用試劑均為分析純。

2方法

2.1DLE分散液和TAX生理鹽水分散液的制備

2.1.1DLE分散液的制備精密稱取1.4 g多西他賽，溶于20 ml的PEG400中，加入0.5%活性炭去除熱原，充氮分裝于2 ml透明注射劑瓶中，121 ℃高壓滅菌15 min,得到多西他賽PEG400藥物溶液。使用注射器吸取制備的多西他賽PEG400溶液1 ml，然后將該溶液邊振搖邊注入99 ml 20%市售空白脂肪乳劑中至分散均勻即可，得到藥物濃度約為0.7 mg/ml的DLE分散液。

2.1.2TAX生理鹽水稀釋液的制備在室溫下將注射用溶媒加入多西他賽溶液中，將兩者在無菌環境下混勻，再均勻分散到適量生理鹽水中得到藥物濃度約為0.7 mg/ml的TAX生理鹽水稀釋液。

2.2對照品和供試品溶液的制備

2.2.1對照品溶液精密稱取對照品12.5 mg，加入25 ml量瓶中，以異丙醇溶解并定容至刻度，得到濃度為500 μg/ml的對照品儲備液。

不文明現象總讓媒體揪著批，恐怕沒完沒了，時間長了，會給大眾帶來“審丑疲勞”。其實，一次法律行動勝過一萬次輿論譴責，相關執法者、管理者，應走在媒體前面，該出手時就出手，積極捍衛法律規則，彌平社會爭議。以高鐵霸座問題為例，每次輿論曝光之后，相關部門都會在輿論壓力下追加執法，給予霸座者治安處罰，以及列入黑名單等。而如果每一次高鐵霸座都逃不過第一時間的處罰，恐怕霸座者也不至于這么囂張，權益受侵害的乘客也不至于如此無助，人們更不至于要一次次呼吁執法部門的介入。

2.2.2供試品溶液按“2.1”項下方法制備DLE分散液及多西他賽注射液生理鹽水稀釋液,于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h分別取適量過0.45 μm微孔濾膜，分別精密量取續濾液1 ml于10 ml量瓶中，用異丙醇破乳并定容至刻度，得到供試品溶液。

2.3色譜條件色譜柱：Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-水(42:34:24)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：232 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μl。分別取多西他賽對照品溶液，TAX生理鹽水稀釋液供試品和DLE分散液供試品溶液適量進樣,色譜圖見圖1，多西他賽的保留時間約為6.5 min，其他成分不干擾多西他賽的測定。

圖1　多西他賽高效液相色譜圖 A.對照品；B.DLE分散液供試品；C.TAX生理鹽水稀釋液供試品；1.多西他賽

2.4標準曲線和線性范圍精密量取適量對照品儲備液，用異丙醇稀釋成濃度為1、4、16、64、256 μg/ml的多西他賽系列標準溶液，取20 μl標準溶液注入液相色譜儀進行分析，以標準溶液的峰面積(Y)對相應的標準溶液濃度(X)進行線性回歸，其回歸方程為Y=21.199X+20.488，r=0.999 9,線性范圍為1～256 μg/ml。

2.5精密度實驗分別精密吸取低、中、高3個濃度(4、64、256 μg/ml)梯度的對照品溶液，按上述色譜條件于1 d之內連續進樣5次，RSD值分別為1.45%、0.56%和1.21%。連續3 d分別進樣，RSD值分別為1.96%、1.20%和0.93%。表明該方法日內和日間精密度良好。

2.6重復性實驗按“2.2”項下方法制備DLE分散液0 h供試品及TAX生理鹽水稀釋液0 h供試品各6份，各取20 μl進樣，測定供試品中多西他賽含量，計算其RSD值分別為0.89%、0.68%。表明測定方法的重復性良好。

2.7穩定性考察取按“2.2”項下方法制備的DLE分散液0 h供試品及TAX生理鹽水稀釋液0 h供試品,分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣20 μl，測定峰面積，計算峰面積的RSD值，結果兩供試品樣品中多西他賽峰面積的RSD值分別為0.69%、0.91%，表明兩者在24 h內穩定。

2.8加樣回收率比較分別精密量取已知濃度的DLE分散液供試液及TAX生理鹽水稀釋液供試液各9份，分為3組，分別精密加入低、中、高3個濃度的對照品溶液，測定各組藥物含量，計算加樣回收率和RSD值。結果如表1、表2所示，回收率均在95%～105%范圍內，RSD值均<5%，符合藥物含量測定要求。

表1　DLE分散液供試品加樣回收率

表2　TAX生理鹽水稀釋液供試品加樣回收率

3結果

3.1穩定性比較室溫下配制TAX生理鹽水稀釋液及DLE分散液，于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h分別取適量兩種藥物分散液，過0.45 μm濾膜除去游離藥物，分別精密吸取續濾液1 ml,于10 ml量瓶中，異丙醇破乳并定容至刻度，進樣20 μl，測定續濾液多西他賽濃度，以濾液中多西他賽濃度的變化來判斷這兩種制劑的稀釋穩定性。以0 h藥物濃度為100%，其余各時間點的藥物濃度與0 h藥物濃度百分比為百分標示量。結果見表3，DLE分散液至少在24 h內穩定，而TAX生理鹽水稀釋液穩定不足2 h，在2 h后稀釋液可見明顯的藥物析出現象，過濾后濾液藥物含量明顯下降。DLE分散液的稀釋穩定性遠超過TAX生理鹽水稀釋液。

表3　DLE分散液和TAX生理鹽水稀釋液

注：TAX生理鹽水稀釋液在2 h后開始出現明顯渾濁現象，藥物含量明顯下降

3.2DLE分散液pH值的測定按“2.1.1”項下配制DLE分散液，于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h使用pH計測定分散液的pH值。結果見表4,可以看出DLE分散液在24 h內pH值無明顯變化。

3.3DLE分散液pH值粒徑的測定按“2.1.1”項下配制DLE分散液,于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24 h取該乳劑分散液適量，用蒸餾水稀釋適當倍數后，按馬爾文粒徑檢測儀操作方法測定DLE分散液的粒徑。結果見表4，可見DLE分散液24 h內粒徑無明顯變化。

表4　DLE分散液粒徑及pH值變化( n=3)

4討論

本研究采用膜過濾法從藥物含量、pH值及粒徑3個方面研究了DLE的稀釋穩定性，并與TAX稀釋液的穩定性進行比較。膜過濾法具有操作簡便和重復性好的特點，根據文獻[5]可知,使用生理鹽水作為稀釋溶媒的TAX稀釋液最為穩定，藥物含量能穩定2 h，使用5%葡萄糖作為稀釋溶媒僅能穩定1 h，因此本研究選用生理鹽水作為溶媒，所得結果與該文獻報道的基本一致。而本實驗結果揭示，DLE分散液至少在24 h內，其藥物含量、pH值和粒徑保持不變，稀釋穩定性明顯優于TAX,可大大提高臨床使用的安全性。

TAX以表面活性劑吐溫-80作為藥物溶媒，有文獻報道，吐溫-80易引起休克、呼吸困難、低血壓、血管性水腫、風疹等嚴重的過敏反應及溶血，因而限制了其臨床應用。DLE因不含任何易導致過敏的表面活性劑，進一步提高了其用藥安全性。DLE具有載藥量高、安全性好、穩定性好的特點。相信隨著對DLE研究的深入，該制劑有望成為一種新型的安全有效的多西他賽注射制劑。

【參考文獻】

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[4]Baker SD, Zhao M, He P,etal. Simultaneous analysis of docetaxel and the formulation vehicle polysorbate 80 in human plasma by lipid chromatography/tandem mass spectrometry[J].Analyt Biochem,2004,324:276-284.

[5]張曉慶,劉明忠,張利斌.注射用多西他賽與不同溶媒配伍穩定性的研究[J].藥學服務與研究,2007,7(2):150-151.

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[本文編輯]李睿旻